In VitroおよびIn Vivoでの単純ヘルペスウイルスに対する活性を有する全植物抽出物のレビュー

概要

単純ヘルペスウイルス（HSV-1およびHSV-2）は高い感染力を持ち，生涯にわたる潜伏感染を引き起こし，口腔や性器の病変を繰り返し発生させる。HSV-1およびHSV-2感染症の治療法は確立されていないが、発生の予防と治療のために抗ウイルス剤が一般的に使用されている。しかし、抗ウイルス剤に対する耐性が出現し始めており、HSV感染の予防と治療のための新しい有効な治療法を見つけることが重要になっている。植物に含まれる成分は、様々なメカニズムで作用し、抗ウイルス剤の耐性獲得を困難にする可能性があるため、HSV治療薬として有効であると考えられる。世界のさまざまな地域から集められた多種多様な植物が，HSV-1および/またはHSV-2に対する抗ウイルス活性について研究され，さまざまな程度の有効性を示した。この総説の目的は，試験管内試験および生体内試験におけるHSV-1および／またはHSV-2に対する全植物抽出物について行われた研究をまとめることである。レビューした研究の大部分は，動物細胞株を用いて試験管内試験で行われたものであり，一部の研究は動物モデルデザインを用いている。また，HSV病変に対して植物療法を用いて行われた限られた数のヒト試験についてもまとめた。

キーワード：植物エキス，植物，漢方薬，単純ヘルペス，HSV

はじめに

単純ヘルペスウイルス（HSV）は、高い感染力を持つ二本鎖DNAウイルスであり、再発性の病変を引き起こす。1 世界中のあらゆる年齢層に感染し、季節変動がなく、ヒトと動物の両方に感染する。擦過された皮膚や粘膜の上皮細胞に最初に感染すると、一次感染部位に病変が現れる2。その後、ウイルスは三叉神経節や腰仙神経節に生涯にわたって潜伏感染するが、特定の条件下で再活性化することがある1。これらの条件には、生理的・心理的ストレス、疲労、紫外線照射、身体的外傷、ホルモンレベルの異常、免疫抑制、月経、発熱、上気道感染などが含まれる4,5。HSVの一次感染および再発はいずれも無症状の場合があるが、再活性化すると、通常、一次感染部位に潰瘍が生じます6。再発時には、身体的な症状が出る前に、HSVはウイルスを排出し、無症状で感染する能力を持っている1。このため、HSVを封じ込めることは難しく、人から人への感染を効率的に進めることができる。

HSVは1型（HSV-1）と2型（HSV-2）の2つのタイプに分類され、80%以上のアミノ酸が類似している。1 どちらのタイプも口腔および性器の病変を引き起こすが、HSV-1は主に口腔内またはその周辺に感染し（口唇ヘルペス)HSV-2は主に性器または肛門に感染します（性器ヘルペス）。2 HSV-1は通常、口腔内から口腔内への接触によって感染するが、口腔内から性器への接触でも感染する可能性がある。HSV-1は伝統的に口唇ヘルペスの原因として知られているが、現在、高所得国では新たに発症する性器ヘルペスおよび新生児ヘルペスの主要な原因となっている1。HSV-2は性感染症と考えられており、主に性行為中に感染します2。HSV-2は、世界的に性器潰瘍疾患の主要な原因であり、また、出産時に母親から新生児に垂直感染する新生児ヘルペスの原因でもある1。2012年のデータによると、世界保健機関は、アメリカ大陸におけるHSV-1およびHSV-2の有病率をそれぞれ40～50%および14%と推定している7。

口唇ヘルペスの主な症状は、口の中や周り、舌、特に口唇に、直径2～10mmの紅斑、水疱、潰瘍ができます5。5 性器ヘルペス感染症の主な症状は、性器または肛門部の斑点および丘疹で、小水疱、膿疱、潰瘍へと進行します8。口唇ヘルペスおよび性器ヘルペスの診断は、通常、患者の病歴、症状の提示、および身体検査によって行われる。6 ウイルス培養または尿中のHSV DNAの検出によって診断を確定することができ、HSVに対する抗体を調べる血液検査によって過去の感染を確認することができる。

また、HSV-1はアルツハイマー病のリスクを高めることが分かっており9,HSV-2はHIV感染のリスクを高めることが分かっている。HSVによる後遺症は重篤なものになる可能性があるが、HSV感染が致命的になることはほとんどない。口唇ヘルペスの患者は、日常生活における時間の制限および困難、身体的努力および社会的活動の低下、身体的痛みの増加、疲労感および倦怠感、ならびに仕事および家事の強い制限を報告している。10

さらに、性器ヘルペスの患者は、一般的、精神的、感情的な健康状態、活力、社会的機能の低下、および身体的痛みの増加を報告するため、生活の質が低下する11。

HSV-1およびHSV-2の治療法は確立されていないが、再発を予防したり、期間を短縮したり、重症度を下げたりするために、抗ウイルス薬が一般的に使用されている6。HSVの管理においては、ウイルスのDNA複製を標的とする非環状グアノシンアナログが第一選択薬となっている12。12 しかし、口唇ヘルペスと性器ヘルペスの両方にアシクロビルや他のヌクレオシド類縁化合物をこのように使用した場合のエビデンスには一貫性がなかった。

亜鉛，ビタミンC，リジン，アルギニンの少ない食事などの薬剤を使用しない治療法は，HSV感染症の管理に一定の効果を示しているが，その結果は控えめで一貫性がない。さらに古い研究では、水溶性バイオフラボノイド-アスコルビン酸複合体を経口投与したところ、口唇ヘルペスの発生が平均4.2日で治癒したことが報告されている18。最近では、（松ぼっくり）リグニンとアスコルビン酸の組み合わせを経口投与して活動性のHSV-1病変を治療するパイロット試験が行われ、症状が出てから48時間以内に治療を開始した場合、被験者は特徴的な病変を発症しなかったことがわかった19。これらの研究は、HSV感染症を治療するための併用療法が、単独療法よりも効果的である可能性を示している。

さらに、HSV感染症の予防および治療にアミノ酸の一種であるリジンを経口投与しても、1日1グラムの投与量では、低アルギニン食を摂取しなければ効果がないことがわかっている20。リジンを使用する根拠は、リジンとアルギニンの比率が高い場合にウイルスの複製が抑制されることを示す組織培養の結果から来ている22。さらに、リジンに酸化亜鉛、エキナセア、ゴールドンシールなどの成分を配合したハーブベースの軟膏を使用したある研究では、参加者の40%において、3日目までに口唇ヘルペスの発生が完全に消失したことが確認されている21。このハーブ軟膏の効果は、単一の成分で治療を行う場合と比較して、様々な作用機序で作用する複合植物成分の多様な成分によるものと考えられる。

植物療法は、HSVに対して様々な作用機序を発揮することから、感染症の予防や治療に有益な効果をもたらす可能性がある。特に，ウイルスの増殖の様々な段階で作用する強い抗ウイルス活性を示すものがある23。また，自然療法は，薬理学的な治療法に比べて，副作用が少なく，薬剤への耐性がなく，毒性が低いという特徴がある23。これらの理由から，多くの植物療法がHSVに対する効果を調べるために研究されている。

研究方法

本レビューの目的は，HSV-1および/またはHSV-2に対する抗ウイルス効果について研究されている植物に関する研究をまとめることである。Pubmedにおいて，以下のMeSH用語を用いて論文検索を行った：plant extracts; plants, medicinal; phytotherapy; herbal medicine; herpes simplex; and/or simplexvirus。結果をレビューし 2020年4月の発行日までの全植物抽出物を使用した研究を対象とした。研究は、論文のフルテキストが入手できない場合は除外した。また、本レビューのテーマが全植物抽出物であるため、植物抽出物に含まれる成分の抗ウイルス効果を調べた研究も除外した。レビューした論文で研究されたすべての植物のリストを表1に示す。このレビューは、試験管内試験および生体内試験で研究された単一のハーブ（植物の原産地である大陸ごとに地理的に整理されている)試験管内試験および生体内試験で研究されたハーブの組み合わせ、そして最後に単一または組み合わせのハーブを用いたヒト試験によって構成されている。

表1　抗HSV活性を示す全植物抽出物

略語の説明 HSV，単純ヘルペスウイルス，HSV-1，単純ヘルペスウイルス1型，HSV-2，単純ヘルペスウイルス2型。

シングルハーブ 試験管内試験

アフリカ

Ferreaらは，Combretum micranthumの4種類のメタノール抽出物の抗ウイルス活性をHSV-1（strain F）およびHSV-2（strain G）に対して試験した72。乾燥した葉を用いて，通常のメタノール，水性メタノール，HClおよびNaOHを添加した水性メタノール，NaOH自己酸化メタノールの4種類の溶媒を用いて抽出物を調製した。その結果、NaOH自己酸化メタノール抽出物のみが抗HSV活性を示した。これは、植物中の不活性な前駆体が、アルカリ触媒作用によって活性化合物に変化したためだと著者らは考えている。この抽出物は、ウイルス感染と同時に細胞を処理した場合（EC50はHSV-1が8μg/ml、HSV-2が19μg/ml)ウイルス吸着1時間後に処理した場合（EC50はHSV-1が150μg/ml、HSV-2が227μg/ml）に比べて効果が高かった。これらの結果は，C. micranthumがHSV-2よりもHSV-1に対してより効果的である可能性を示している。

Beuscherら68は，アフリカの薬用植物の56の抽出物について抗ヘルペス活性を試験し，6つの抽出物がHSV-1（Mclntyre株）に有効であることを見出した。しかし，各抽出物の濃度を高めていくと，100%のプラーク減少が得られる前にグリーンモンキーキドニー（GMK）細胞に対する毒性が認められた。In vitroで抗HSV活性を示した抽出物は，Chironia krebsiiのジクロロメタン抽出物（EC range = 6.25-12. 5μg/ml），Jasminum fluminenseの25%エタノール抽出物（EC範囲=50〜200μg/ml），Mitragyna inermisのメタノール抽出物（EC範囲=50〜100μg/ml），Polygala virgataの25%エタノール抽出物（EC範囲=400〜600μg/ml），Securidaca longepedunculataのメタノール抽出物（EC範囲=12. 5-25μg/ml），Securidaca longepedunculataの25%エタノール抽出物（EC範囲=2.5-6μg/ml）であった。

もう一つのアフリカの植物であるHelichrysum aureonitensは，Meyerら103によって抗菌作用が報告されており，ヒト肺線維芽細胞のHSV-1に対する抗ウイルス作用を示した。花を除いた植物の新芽から粗水抽出物を調製し，HSV-1ウイルス懸濁液と同時に細胞に添加した。1週間の培養後、細胞には細胞毒性作用は認められず、抽出物濃度1.35mg/mlで有意な抗ウイルス活性を示した。

さらに、KudiとMyint35は、17種類のナイジェリアの薬用植物について、ヒト大腸がん細胞（HT-29細胞）における抗ヘルペス活性を調べた。これらの植物は、発熱、下痢、寄生虫、性感染症、腸疾患、皮膚疾患などの適応症に地元で使用されている。各植物の葉，樹皮，または植物全体を用いてエタノール抽出物を調製した。抽出物をHSV-1吸着後の細胞に添加し，ウイルスの細胞病理学的作用を100%阻害するものを抗ウイルス活性を有するとした。17種類の植物抽出物のうち、4種類の植物が抗HSV活性を示した。Bauhinia thonningii, Anacardium occidentale, Dichrostachys glomerata, Sterculia setigeraの4種である。これらの抽出物は、HT-29細胞に対して、400μg/100μlの投与量では細胞毒性を示さず、各抽出物の100μg/100μlの投与量では抗ウイルス効果が認められた。

別の研究者グループであるFortinら70は、不眠症、下痢、高血圧、腹痛、皮膚症状、発熱などの病気に伝統的に使用されているラ・レユニオン島の薬用植物のコレクションを研究した。各ハーブのメタノール抽出物をHSV-1（H29株）に対して試験した。その結果，36種類の植物のうち，5種類が抗ウイルス活性を示した。Obetia ficifolia（EC50 = 7 μg/ml），Lomatophyllum macrum（EC50 = 64 μg/ml），Citrus hystrix（EC50 = 91 μg/ml），Erythroxylum laurifolium（EC50 = 125 μg/ml），Senecio ambavilla（EC50 = 170 μg/ml）であった。また、アシクロビルの抗ウイルス活性を調べたところ、そのEC50は3.3μg/mlであった。O. ficifoliaとE. laurifoliumが最も強い抗HSV活性を持っていると指摘されたが、著者らはこの発言の理由をさらに説明しなかった。

Toloら62は、Carissa edulisの抗HSV活性を調査した。Carissa edulisは、ケニアで地元に生育する薬用植物で、皮膚疾患や性感染症など様々な病気に伝統的に使用されている。C. edulisの根から水抽出物を調製し，凍結乾燥した後，野生型HSV-1（strain 7401 H）およびHSV-2（strain Ito-1262），チミジンキナーゼ欠損型HSV-1（strain B2006），アシクロビル耐性の7401 H HSV-1に対して試験を行った。抽出物は4株すべてのプラーク形成を阻害したが，野生型HSV-2株（EC50 = 6.9 μg/ml，SI = 69.6）およびチミジンキナーゼ欠損型HSV-1株（EC50 = 8.1 μg/ml，SI = 59.3）は抽出物に対してより感受性が高かった。さらに，200 μg/mlでは，アシクロビル耐性HSV-1株のウイルス収量を100%，野生型HSV-2株のウイルス収量を99.5%，野生型HSV-1株のウイルス収量を97.8%，チミジンキナーゼ欠損型HSV-1株のウイルス収量を96.3%減少させた。アシクロビルを5 μg/mlでチミジンキナーゼ欠損HSV-1株およびアシクロビル耐性HSV-1株に作用させたところ，それぞれ3.0%，1.5%のウイルス収量減少しか認められなかったことを考えると，この結果は重要である。

Sassiらは，チュニジアの15種類の薬用植物から抽出した50種類の抽出物について，HSV-1（strain 17）に対する抗ウイルス活性を調べた84。3種類の植物から抽出した4種類の抽出物が抗ヘルペス活性を示した。これらの抽出物は，Erica multifloraのメタノール抽出物（EC50 = 132.6 μg/ml，SI >3.77），Frankenia pulverulentaのアセトン抽出物（EC50 = 489.5 μg/ml，SI >1.02）およびメタノール抽出物（EC50 = 486.2 μg/ml，SI >1.03），Zygophyllum albumのアセトン抽出物（EC50 = 390.7 μg/ml，SI >1.28）であった。E. multifloraのメタノール抽出物とZ. albumのアセトン抽出物は，いずれも2000μg/mlでHSV-1に対する完全な細胞保護作用を示した。

Schnitzlerら136は，アフリカの薬用植物であるPelargonium sidoidesの水性抽出物を用いて，HSV-1（strain KOS）とHSV-2（strain HG52）の両方に作用するかどうかを試験した。この抽出物は、アフリカのグリーンモンキーキドニー（RC-37）細胞を用いたプラークリダクションアッセイにおいて、抗ウイルス活性を有することがわかった。最大非細胞毒性濃度（規定なし）で適用したところ，HSV-1とHSV-2の両方で，抽出物はプラーク形成を99%減少させることができた。さらに、HSVのライフサイクルを通して様々な時期にRC-37細胞に抽出物を添加し、アシクロビルと比較した。P. sidoides抽出物は、HSV感染前に添加した場合とHSV吸着時に添加した場合に抗ウイルス効果を示し、HSV複製時にのみ抗ウイルス効果を示したアシクロビルと比較した。著者らは，P. sidoidesをHSV感染初期の局所的な抗ウイルス剤として用いると効果的であると結論づけている。

SoltanとZaki61は，伝統的に感染症に用いられてきたエジプトの薬用植物42種を選び，地上部，種子，塊茎のいずれかの80%水性エタノール抽出物をHSV-1に対して試験した。その結果，合計5種類の植物が抗ヘルペス活性を示した。Moringa peregrinaとEphedra alataは、それぞれ50-100μg/ml(Rf 104)と500-1000μg/ml(Rf 104)の濃度範囲で最も高い抗ウイルス活性を持つことが確認された。Capparis sinaica、Tamarix nilotica、Cyperus rotundusは、それぞれ1000μg/ml(Rf 104)、1000μg/ml(Rf 104)、500μg/ml(Rf 102)の濃度では、殺ウイルス活性が低いことが確認された。注意しなければならないのは、E. alata以外の5つの植物はすべて食用であることで、したがって、ヒトのHSV-1感染症にE. alataを使用することは安全ではないかもしれない。

さらに，Behbahaniら48は，Avicenna marinaの葉のメタノール抽出物がHSV-2に対して抗ウイルス効果を示すことを明らかにした。この植物はアフリカ南部が原産で，伝統的に潰瘍，リウマチ，天然痘などの治療に用いられてきた。最大の阻害効果は、20μg/mlの濃度で見られ、抽出物はHSV-2の複製を80%阻害した。抽出物のEC50値は10μg/ml、SI値は25と測定され、32μg/mlの濃度まで細胞毒性作用は認められなかった。

Nauclea latifoliaの根を用いて、ジクロロメタンとメタノールの1:1混合溶媒を用いた抽出液を作り、Donalisioらが抗HSV-2活性を試験した129。アシクロビル感受性HSV-2株とアシクロビル耐性HSV-2株の2種類のHSV-2株を用いた。IC50値は，アシクロビル感受性HSV-2株では7.17μg/ml，アシクロビル耐性HSV-2株では5.38μg/mlであることがわかった。添加時期の実験では、HSV-2感染後の細胞に抽出物を添加したときに、最大のウイルス抑制効果が得られた。著者らは、N. latifoliaがウイルスの宿主細胞への付着や侵入を阻害しないことを指摘している。さらに、アシクロビル耐性のHSV-2株は、アシクロビル感受性のHSV-2株よりも抽出物に対して感受性が高かったことから、アシクロビルとは異なる作用機序の可能性が示唆された。

Hassanら188は，Hibiscus sabdariffaの水性抽出物を用いて抗HSV-2活性を試験したが，抽出物は抗ウイルス効果を示すことができなかった。

Toujaniら166は，Thymus capitatusの空中部から水性およびエタノール性の抽出物と精油を調製し，これら3つの抽出物がHSV-1とHSV-2の両方に対して抗ウイルス作用を示すことを見出した。HSV-1に対するEC50およびSI値はそれぞれ，水抽出物では23.4μg/mlおよび12.7以上，エタノール抽出物では16.6μg/mlおよび3.5，精油では17.6μg/mlおよび6.0であった。また，HSV-2に対するEC50およびSI値はそれぞれ，水抽出物では23.6μg/mlおよび12.6以上，エタノール抽出物では2.3μg/mlおよび26.8，精油では18.6μg/mlおよび6.9であった。これらの結果から，HSV-2はHSV-1に比べてT. capitatusのエタノール抽出物に対する感受性が高いことが強調された。一方，両ウイルスは水抽出物と精油に対して同様の感受性を示した。これは、2つのウイルス間の抗ウイルス化合物に対する感受性の違いと、異なる抽出物に含まれるこれらの化合物の濃度によるものと考えられる。

アジア

Elanchezhiyanら146は、Pongamia pinnataの水抽出物がHSV-1（strain AC）およびHSV-2（strain HV-219）の複製を、それぞれ1 mg/mlおよび20 mg/mlの濃度で完全に阻害することを確認した。実験はアフリカミドリザル腎臓（Vero）細胞を用いて行い，抽出物の調製には植物の種子を用いた。ウイルス接種後の細胞に抽出物を添加し，24時間後に完全な阻害効果が認められた。抽出物の濃度が1mg/ml以下、20mg/ml以下では効果が薄かった。

日本と中国の伝統的な薬用植物であるHouttuynia cordata（どくだみ）について，ヒト上皮性子宮頸癌（HeLa）細胞におけるHSV-1（strain HF）に対する抗ウイルス効果を検討した。Hayashiら105は，H. cordataの空中部の水蒸気蒸留物がウイルスの複製を阻害する効果があることを見出した（EC50=0.0013%，SI＞4.4）。HeLa細胞を蒸留物で前処理しても、プラーク形成やウイルスの吸着は減少しなかった。しかし，HSV-1に感染させる前に蒸留液をインキュベートすると，ウイルスの吸着が阻止されたことから，H. cordataの阻害作用のメカニズムとして，HSV-1のビリオンに直接作用することが明らかになった。

Chenら106もH. cordataの抗ウイルス作用を検証したが，その対象はHSV-2（strain G ATCC-VR-734）であった。葉と茎の水抽出物は，HSV-2の感染に伴うVero細胞の死を有意に阻止し，IC50値は50μg/mlであった。さらに、この抽出物は、150μg/mlおよび450μg/mlの用量で、ウイルスの産生をそれぞれ3および4ログ以上有意に抑制した。抽出物は，HSV-2感染時に活性化され，ウイルスの複製に必要なNF-| Bの阻害作用を示した。添加時期の実験では、HSV-2感染前、感染中、感染直後の細胞に抽出物を添加しても、同様の抗ウイルス効果が得られたことから、H. cordataはウイルス感染の初期に作用することが示唆された。

H. cordataの抗HSV作用のメカニズムについては，Hungらによってさらに検討された107。Vero細胞および2種類のヒト上皮癌細胞（Hep-2およびA549）を用いて，野生型HSV-1（strain F ATCC-VR733），アシクロビル耐性HSV-1，HSV-2（strain G ATCC-VR734）に対する植物の水性抽出物の実験が行われた。抽出物は，3つのHSV株すべてを阻害することができた。EC50およびSI値はそれぞれ，野生型HSV-1では0.692 mg/mlおよび144.51，アシクロビル耐性HSV-1では1.11 mg/mlおよび90.09，HSV-2では0.3 mg/mlおよび333.33と求められた。興味深いことに，EC50値は野生型HSV-1とアシクロビル耐性HSV-1で同程度であり，H. cordataがアシクロビルとは異なるメカニズムで抗ウイルス作用を発揮することが示唆された。Vero細胞を用いた実験では，H. cordata抽出物がHSVウイルスに直接作用し，ウイルスの結合と侵入を妨げ，ウイルスの侵入を阻止し，ウイルスの複製と遺伝子発現を抑制することが明らかになった。この多段階の阻害作用は，HEp-2細胞やA549細胞でも観察された。前述の研究と同様に、この抽出物はNF-kBの活性化を阻害することも確認された。著者らは、H. cordataが複数のメカニズムで抗HSV作用を引き出すことから、HSV感染症の治療に適した候補であると結論づけている。

さらに、Kurokawaら33,98は、多種多様なアジアの植物を対象に抗HSV-1活性を試験し、2つの研究で得られた知見を報告している。いずれの研究でも、植物抽出物の溶媒として熱水が使用された。1つ目の研究では，Kurokawaら33は142種類の抽出物のHSV-1（strain 7401 H）に対する抗ウイルス活性を試験した。その結果，100 μg/mlの用量で目に見える細胞毒性を示さずに100%のプラーク阻害を示した抽出物はElaeocarpus grandiflorusとWoodfordia floribundaであった。一方，300または500μg/mlの投与量で，目に見える細胞毒性なしに100%のプラーク阻害効果を示した抽出物は，Alpinia officinarum，Brainia insignis，Drynaria fortunei，Geum japonicum，Juglans mandshurica，Polygonum cuspidatum，Prunella vulgaris，Rheum palmatum，Spatholobus suberectus，Terminalia chebulaであった。2つ目の研究では、Kurokawaら98は、10種類の抽出物とアシクロビルの併用による抗ウイルス活性を試験した。アシクロビルと抽出物をそれぞれのEC50濃度で組み合わせ、HSV-1 strain 7401 Hに対して試験を行った。ウイルスのプラークをコントロールの10%以下に減少させたアシクロビルと抽出物の組み合わせは、G. japonicum、Rhus javanica（ヌルデ）、Syzygium aromaticu（チョウジ）、T. chebula（ミロバラン）であった。さらに実験を進めると、アシクロビルとエキスの組み合わせは、アシクロビルやエキス単独よりも強い抗ウイルス作用を示し、相乗効果が期待された。また、アシクロビルと抽出物の組み合わせでは、抽出物単独よりも低い濃度で細胞毒性を示すものはなかった。さらに，G. japonicum，R. javanica，S. aromaticum，T. chebulaの各抽出物を単独で2種類のアシクロビル耐性HSV-1株に対して試験した。その結果，4種の抽出物すべてが，野生型株と比較して耐性株に対して同様の抗ウイルス作用を示すことが確認された。

Abdulら34は，マレーシアの土着医療で一般的に使用されている61種類の植物のエタノール抽出物を用いて，HSV-1に対する抗ウイルス性を検証した。抗HSV活性を示した植物抽出物は，Alternanthera sessilis，Blumea chinensis，Calotropis gigantea，Costus speciosus，Eleusine indica，Eugenia michelii，Euphorbia hirta，Freycinetia malaccensis，Hedyotis auricularia，Leea indica，Mentha arvensis，Orthosiphon aristatus，Polygonum minus，Ricinus communis，Solenum americanumであった。これらの抽出物の最小発育阻止濃度（MIC）は0.001～0.01 mg/mlであった。さらに，これらの植物抽出物を用いて，HeLa細胞株を用いたアッセイを行い，細胞毒性を調べた。その結果，15種類の抽出物のうち，E. michelii，M. arvensis，F. malaccensis，P. minusのみが細胞毒性を示し，CD50値は0.05～0.1 mg/mlであった。

Taylorらは，細菌，真菌，ウイルス感染症の治療に伝統的に用いられてきたネパール原産の21種類の植物のメタノール抽出物について，HSV-1に対する抗ウイルス活性を調べた36。この試験は，光感受性成分を評価できるように，UV-A光，可視光，暗闇の中で行った。その結果，4種類の抽出物が，さまざまな投与量と光条件で100%のウイルス不活性化を示した。Macaranga pustulata（200μg/ml，3つの光条件すべて），Hypericum cordifolium（50μg/ml，3つの光条件すべて），Maesa macrophylla（100μg/ml，3つの光条件すべて），Sibbaldia micropetala（200μg/ml，3つの光条件すべて，可視光のみで100μg/ml）であった。さらに，5種類の抽出物は，投与量と光の条件を変えてHSV-1を部分的に抑制することができた。Hypericum uralum（200μg/ml，3つの光条件すべて），Centipeda minima（13μg/ml，3つの光条件すべて），Corallodiscus lanuginosus（100μg/ml，可視光のみ），Anemone obtusiloba（100μg/ml，3つの光条件すべて），Princepia utilis（200μg/ml，UV-Aおよび可視光のみ）であった。その結果，200μg/mlまではほとんどの抽出物が細胞毒性を示さなかったが，H. cordifolium，M. macrophylla，A. obtusilobaはこの用量で細胞毒性を示した。また，C. minimaは25μg/mlの用量で細胞毒性を示した。

Padmaら38は，Annona muricataのエタノール抽出物とPetunia nyctaginifloraの水抽出物（いずれも1 mg/ml）が，HSV-1（strains 753166およびA-16）に対して全細胞毒性を示すことを確認した。A. muricataの茎とP. nyctaginifloraの空中部を用いて，両ハーブのエタノール抽出物と水抽出物を作成した。その結果、1mg/mlの濃度では、Vero細胞に対する細胞毒性は認められなかった。著者らは、これら2つのハーブが抗ヘルペス薬として使用できる可能性があると結論づけている。

さらに，Nawawiらは，30種類のインドネシア産薬用植物の水性およびメタノール抽出物を用いて，HSV-1（strain 7401 H）に対する抗ウイルス効果を検証した92。100μg/mlの濃度で，以下の抽出物はプラーク形成を100%阻害し，続いてIC50値を求めた。Eurycoma longifoliaのメタノール抽出物（IC50=62μg/ml），Filicium decipiensのメタノール抽出物（IC50=68μg/ml），Garcinia mangostanaのメタノール抽出物（IC50=40μg/ml），Toona sureniのメタノール抽出物（IC50=37μg/ml）。Nephelium lappaceum（IC50=62μg/ml，70μg/ml），Punica granatum（IC50=68μg/ml，64μg/ml）の水性およびメタノール抽出物を用いた。T. sureniを除くすべての抽出物は100μg/mlで細胞毒性を示さなかった。

Yoosookら53は，標準HSV-2（strain G）および5つの臨床HSV-2分離株に対するBarleria lupulinaおよびClinacanthus nutansの抗ウイルス効果を試験した。B. lupulinaの小枝の葉とC. nutansの植物全体からメタノール抽出物を作成した。B. lupulinaは，HSV-2株Gに感染した細胞のプラーク形成を阻害する効果はなかったが，5つのHSV-2分離株に対しては，442.1-987.7μg/mlのEC50値で抗ウイルス活性を示した。これらの用量は，ハーブに見られる細胞毒性値（CC50 = 2.64 mg/ml）を大幅に下回っている。対照としてアシクロビルを試験したところ，すべてのHSV-2株に対してはるかに大きな抗ウイルス活性を示し，EC50値は1.9～13.6μMであった。C. nutansは、プラーク形成に対して抗ウイルス活性を示さなかった。収率低下アッセイでは，細胞を抽出物と様々な濃度のアシクロビルで8時間または24時間処理した。B. lupulinaは，0.25～1 mg/mlの用量で，8時間後にすべてのHSV-2株のウイルス力価を対照収量の0.05～12.7%に低下させることができた。C. nutansは、24時間後にのみ抗ウイルス活性を示し、最高の非細胞毒性用量（用量は明記していない）でウイルス力価を対照収量の2%以下に低下させた。2.5μMのアシクロビルで処理すると、24時間後のウイルス力価が0.1～5.3%であるのに対し、8時間後のウイルス力価は対照収量の14.2～43.9%に減少した。

C. nutansは，Kunsornら71による研究でも，溶媒としてn-ヘキサン，ジクロロメタン，メタノールを用いて抽出物を作成し，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain Baylor 186）に対して試験を行った。また，同じ溶媒を用いて調製したClinacanthus siamensisの抽出物についても，同時に抗HSV-1および抗HSV-2作用を試験した。その結果，すべての抽出物が異なる程度の抗ウイルス活性を示した。HSV-1に対して最も強い作用を示したのはC. nutansのn-ヘキサン抽出物（IC50 = 32.05 μg/ml、SI >50.36）で、次いでC. siamensisのメタノール抽出物（IC50 = 37.39 μg/ml、SI >43.52）であった。一方，HSV-2に対して最も強い作用を示したのは，C. siamensisのn-ヘキサン抽出物であった（IC50 = 46.52 μg/ml，SI >34.53）。比較のため、アシクロビルのIC50値は、HSV-1に対して0.09μg/ml、HSV-2に対して0.43μg/mlであることがわかった。

その後のYoosookらの研究では，66タイの8種類の薬用植物の粗水抽出物をHSV-1（KOS株）およびHSV-2（Baylor 186株）に対して評価した。その結果，Centella asiatica，Mangifera indica，Madura cochinchinensisの抽出物が両ウイルスに対して抗ウイルス活性を示した。HSV-1に対するEC50およびSI値はそれぞれ，C. asiaticaで362.40μg/mlおよび3.9，M. indicaで23.94μg/mlおよび29.5，M. cochinchinensisで20.19μg/mlおよび8.8であった。HSV-2に対するEC50値およびSI値は，それぞれC. asiaticaで298.84μg/mlおよび4.7，M. indicaで31.83μg/mlおよび22.2，M. cochinchinensisで68.32μg/mlおよび2.6であった。これをアシクロビルの有効性と比較すると，HSV-1およびHSV-2に対してそれぞれ0.14μg/mlおよび0.15μg/mlのEC50値を示した。抽出物とアシクロビルの組み合わせも検討した。C. asiaticaとM. indicaの組み合わせは、HSV-2に対して相加的な効果を発揮することが示され、各抽出物とアシクロビルの組み合わせは、アシクロビルの投与量が十分に多ければ、相補的または増強された抗ウイルス効果をもたらした。これらの結果から，C. asiatica，M. indica，M. cochinchinensisは，HSV感染症の治療に単独または組み合わせて使用できる可能性が示唆された。

さらに，Hsiangらは，解熱・抗炎症作用で知られる31種類の漢方薬のHSV-1に対する作用を調べた118。まず，漢方薬のメタノール抽出液を用いて試験を行い，ウイルスのプラークに対する抑制効果を示した漢方薬は，その後，冷水，熱水，エタノール，エタノール酸，メタノールを用いて抽出液にした。その結果，Rheum officinaleのエタノール抽出物（EC50 = 0.12 μg/ml，SI = 8.3），Sophora flavescensの熱水抽出物（EC50 = 0.41 μg/ml，SI = 8.4），熱水（EC50 = 0.20 μg/ml，SI = 9. 1），冷水（EC50=0.36μg/ml，SI=8.4），Paeonia suffruticosaのメタノール抽出物（EC50=0.06μg/ml，SI=12.3），Melia toosendanのメタノール抽出物（EC50=0.03μg/ml，SI=8.0）およびエタノール酸抽出物（EC50=0.02μg/ml，SI=8.0）であった。著者らは、SIが8.0以上のものを有意とみなした。その後の試験では，P. suffruiticosaの水抽出物およびメタノール抽出物，M. toosendanのエタノール酸抽出物，R. officinaleのエタノール抽出物で，ウイルスの付着を95%以上阻害した。また、P. suffruticosaのメタノール抽出物とR. officinaleのエタノール抽出物では、ウイルスの浸透を65%抑制することができた。著者らは，研究対象としたハーブはHSV-1感染の様々な段階で抗ウイルス剤として作用したことから，単純ヘルペス感染症はウイルスの複製サイクルの異なる時期に異なるハーブで治療できる可能性があると結論づけている。

Kuoら147は，7種の漢方薬のエタノール抽出物をHSV-1（strain KOS）に対して試験し，Psychotria serpensのみが100μg/mlの用量でプラーク数をほぼゼロにまで有意に減少させることを見出した。この効果は、10μMのアシクロビルと同様であった。P. serpensの抽出物のIC50値は58.3mg/mlと決定された。その他の薬草では，Ampelopsis cantoniensis，Melilotus indicus，Verbena bonariensis，Buddleia asiatica，Ruta graveolens，Tadehagi triquetrumがウイルスにほとんど影響を与えなかった。

Lohezic-Le Devehatらが調査したインドネシアの薬用植物8種のうち82 Elytranthe tubaefloraとMelastoma malabathricumのメタノール抽出物は、中程度の抗HSV-1活性を示し、著者らはSI値が4以上であると定義した。一方，Garcinia griffithiiのエタノール抽出物および酢酸エチル抽出物，Elytranthe globosa，Elytranthe maingayi，Piper aduncumのメタノール抽出物は，SI値が4未満の中程度の抗HSV-1活性を示した。 Vitex pubescensおよびScurrula ferrugineaのメタノール抽出物は，HSV-1に対して活性を示さなかった。

Chiangらは，ヒト皮膚基底細胞癌（BCC-1/KMC）細胞におけるHSV-1（strain KOS）および／またはHSV-2（strain 196）に対するアジアのさまざまな植物の抗ウイルス活性をいくつかの研究で調べた。40,43,57,54,131,189 著者らは，熱水および/またはエタノール抽出物を使用し，決定されたEC50またはIC50値が約200μg/mlより大きい抽出物は，ほとんどまたは軽度の抗ヘルペス活性を有するとみなしているようである。強力な抗HSV活性を示した抽出物は，Boussingaultia gracilis（HSV-1に対するEC50 = 80.7 μg/ml，SI = 37.6），43 Serissa japonica（HSV-1に対するEC50 = 67.5 μg/ml，SI = 23.3;EC50 = 92. 1μg/ml、HSV-2ではSI = 17.1)43 Blumea lacera（HSV-1ではIC50 = 83.2μg/ml、SI >12.0,HSV-2ではIC50 = 43.3μg/ml、SI >23.1)54 Tithonia diversifolia（HSV-1ではIC50 = 94.4μg/ml、SI = 9. 9,HSV-1ではIC50 = 94.4 μg/ml、SI = 9.9,HSV-2ではIC50 = 34.8 μg/ml、SI = 27.1)54 Ocimum basilicum（水抽出物：HSV-1ではEC50 = 90.9 μg/ml、SI = 16.2,HSV-2ではEC50 = 51.4 μg/ml、SI = 28.6。 6,エタノール抽出物：HSV-1に対してEC50=108.3μg/ml、SI=6.3）131中等度の抗ウイルス活性を示した抽出物は、Bauhinia variegata（HSV-1に対してEC50=182.7μg/ml、SI=7.4,EC50=117. 1μg/ml、HSV-2に対してSI = 11.6)40 Arachis hypogaea（HSV-2に対してEC50 = 191.1μg/ml、SI = 18.3)40 Boussingaultia gracilis（HSV-2に対してEC50 = 194.7μg/ml、SI = 15.6)43 Ardisia squamulosa（EC50 = 168. 5 μg/ml，HSV-1に対するSI = 10.1），43 Crossostephium chinense（HSV-2に対するEC50 = 179.2 μg/ml，SI = 4.0），43 Caesalpinia pulcherrima（HSV-1に対するEC50 = 166.8 μg/ml，SI = 16. HSV-1ではEC50=166.8μg/ml，SI=16.5，HSV-2ではEC50=193.1μg/ml，SI=14.2），57 Ixeris chinensis（HSV-1ではIC50=154.6μg/ml，SI>6.5，HSV-2ではIC50=120.7μg/ml，SI>8.3），54 and Senecio scandens（IC50=197. 54,Senecio scandens（HSV-2に対してIC50=197.6μg/ml、SI>5.1）などが挙げられる。40,43,57,131,189 抗ヘルペス作用がほとんどないか軽度であったハーブは、Bidens pilosa,43,54,189 Houttuynia cordata,189 Adenanthera pavonia,40 Bauhinia purpura,40 Desmodium caudatum,40 Desmodium triforum, 40 Glycine max,40 Pisum sativum,40 Artemisai princeps,43 Cinnamomum camphora,43 Jasminum sambac,43 Basella rubra,43 Drymaria cordata,43 Portulaca grandiflora,43 Rosa rugosa,43 and Eclipta prostrata. 54

さらに、Lipipunら28は、3種類のHSV-1株に対する20種類のタイ産薬用植物の抗ウイルス剤としての働きを調べた。野生型HSV-1（strain 7401 H）を感染させたVero細胞に，水，エタノール，クロロホルムの各植物抽出物を100 μg/mlの用量で投与した。その結果，歯垢形成を50%以上減少させることが確認され，HSV-1に対する抗ウイルス活性を有すると分類されたのは，Aglaia odorata，Cerbera odollam，Harpullia arborea，Ventilago denticulata，Azadirachta indica，Protium serratum，Rinorea anguifera，Hura crepitans，Schima wallichi，Moringa oleiferaの各抽出物であった。最も強い抗ウイルス作用を示したのは，A. odorata，C. odollam，V. denticulataの各抽出物で，100μg/mlの用量でプラークを100%抑制した。さらに，これら3種の抽出物を用いて，チミジンキナーゼ欠損型およびホスホノアセテート耐性型のHSV-1株に対する抗ウイルス活性を評価し，野生型の7401 H株と比較した。ポジティブコントロールとしてアシクロビルを使用したところ，野生型HSV-1と比較して2つの耐性株のプラーク形成を抑制するためには，より高用量の薬剤が必要であることがわかった。その結果，M. oleiferaはホスホノ酢酸耐性株に対して最も効果的であり（EC50=43.5μg/ml，SI=20.1），V. denticulataは3株すべてに対して同等に作用した（EC50およびSIはそれぞれ42.0～52.0μg/ml，16.1～20.0）。しかし，A. odorataは，チミジンキナーゼ欠損株（EC50 = 24.5 μg/ml，SI = 12.7）に対して，野生型（EC50 = 9.5 μg/ml，SI = 32.8）やホスホノアセテート耐性株（EC50 = 10.8 μg/ml，SI = 28.9）に比べて効果が低かった。

Tiwariら49も、Azardirachta indicaの抗HSV-1活性を、特に作用機序に着目して検討した。Azardirachta indicaの樹皮の水抽出物を50～100μg/mlの濃度で投与したところ，チャイニーズハムスター卵巣（CHO-K1）細胞，HeLa細胞，Vero細胞，網膜色素上皮（RPE）細胞へのHSV-1（KOS株）の侵入を阻止することが確認された。異なるHSV-1株（F，G，MP，17）を用いた実験では，A. incidaの抑制効果は各株に対して同様であり，株特異的ではないことが明らかになった。A. incidaの抽出物は，HSV-1ウイルスの細胞への付着を阻害し，抽出物で細胞を前処理すると，ウイルスの糖タンパク質を介した細胞-細胞融合が阻害された。なお，A. incidaはHSV-1を抽出物で前処理した場合にのみウイルスの侵入を阻害することが示され，細胞を前処理した場合には阻害しなかったことから，活性はウイルス粒子に対する作用によるものであることが示唆された。

Liらが試験した21種類の漢方薬のうち29,Agrimonia pilosa、Pithecellobium clypearia、Punica granatumの水抽出物は、異なる株のHSV-1（15577株）に対して抗ウイルス活性を示した。これら3つの抽出物は，標準株に対してIC50値が62.5～125μg/ml，SI値が4～12であった。また，アシクロビル耐性株および臨床株に対しては，それぞれ62.5～125 μg/mlおよび50～125 μg/mlのIC50値を示した。各植物抽出物はすべてのHSV-1株に対して有効であったが，A. pilosaはアシクロビル耐性株に対して，P. clypeariaは標準株に対して（IC50 = 100 μg/ml，SI = 4），P. granatumは臨床株に対して（IC50 = 50 μg/ml，SI = 20），最も有効であった。

Youngia japonicaの水およびエタノール抽出物は，Ooiらの研究ではHSV-1（strain 15577）に対して活性を示さなかった190。一方，Kuoら130は，Nelumbo nuciferaのエタノール抽出物を100 μg/mlの用量で投与したところ，HeLa細胞におけるHSV-1のプラーク形成を100%阻害した。抽出物のIC50値は50.0μg/mlであった。

Vijayanら76は，Hypericum mysorenseのメタノール抽出物（IC50=100μg/ml，SI=1.2），Hypericum hookerianumのメタノール抽出物（IC50=50μg/ml，SI=2.4），Usnea complantaのアセトンおよびクロロホルム抽出物（IC50=100μg/ml，SI=1.2）から，HSV-1に対する強力な抗ウイルス活性を見出した。ウイルス収量減少アッセイでは、H. mysorenseとH. hookerianumが、ウイルス粒子から100%保護する唯一の植物抽出物であることが明らかになった。また、Melia dubiaのアルコールおよび酢酸エチル抽出物、Cryptostegia grandifloraのメタノール抽出物、Rosmarinus officinalisの精油にも部分的な抗HSV活性が認められた。著者らはニルギリス産の計18種の植物を試験したが、上記の植物以外に抗ヘルペス活性を示すものはなかった。

さらに，YangらはEuphorbia thymifoliaの酢酸エチル抽出物のHSV-2増殖抑制効果を評価した91。E. thymifoliaは台湾で広く普及しているハーブで，利尿，解毒，抗マラリア，抗赤痢など多くの機能のために伝統的に使用されている。

抽出液の濃度とHSV-2増殖レベルには負の相関関係が認められた。酢酸エチル抽出物は，2.0，4.0，8.0μg/mlの高濃度で投与すると，HSV-2の感染力を大幅に低下させることができた。抽出物を感染細胞とインキュベートする際の温度を上げても阻害活性の変化は認められなかったが，抽出物を感染細胞とインキュベートする時間が長いほど，ウイルスの阻害効果が大きくなることが確認された。このことから、E. thymifoliaはHSV-2の感染を阻害することで、ウイルスの増殖を抑えることに成功したと結論づけられた。

同年，YangらはPhyllanthus urinariaの抽出物を用いて，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain 196）に対する抗ウイルス効果を検討した141。抽出物は，植物の全部分と，アセトン，ベンゼン，クロロホルム，エタノール，酢酸エチル，n-ヘキサン，メタノールなどのさまざまな溶媒から作られた。10μg/mlの投与量で、アセトン（31.4%)エタノール（40.4%)メタノール（41.3%）の各抽出物は、中程度のHSV-1プラーク阻害効果を示した。しかし，これらの3つの抽出物は，同じ用量で，HSV-2のプラークを90%以上阻害した。また，HSV-2に対するIC50値およびSI値は，それぞれアセトン抽出物で4.3μg/mlおよび3.5，エタノール抽出物で5.0μg/mlおよび4.0，メタノール抽出物で4.0μg/mlおよび4.1であった。なお，アシクロビルは0.05μg/mlでHSV-1およびHSV-2のプラークを90%近く阻害した。添加時期の実験では，ウイルス感染直後に抽出物を細胞に添加した場合にHSV-2が最も抑制され，ウイルス感染の前後に添加した場合には効果が大幅に減少した。また，著者らは，培養時間や温度を下げることが，3つの抽出物のHSV-2ウイルス殺傷活性に影響を与えるかどうかを検証したところ，大きな影響はないことがわかった。

Tanら138は，Phyllanthus urinariaを含むPhyllanthus属の他の植物について，HSV-1およびHSV-2に対する試験を行った。P. amarus，P. niruri，P. urinaria，P. watsoniiの植物全体の水性抽出物を試験した。いずれの抽出物もHSV-1およびHSV-2のウイルス複製を阻害し，IC50値は11.9～39.5μg/ml，SI値は12.7～＞33.6であった。4種の抽出物のうち，P. urinariaは両ウイルスに対して最も高いSI値を示した（両ウイルスともに33.6以上）。また，これらの抽出物はHSV-2よりもHSV-1に対してより強力な抗ウイルス作用を示すことが明らかになった。さらに，添加時期の実験では，4種類の抽出物すべてが，接種時または感染後に細胞に導入された場合に最も効果的にウイルスの複製を阻害し，感染前に導入された場合には阻害しないことが分かった。

Ophirrhiza nicobaricaのメタノール抽出物の中程度の抗HSV-1および抗HSV-2活性がChattopadhyayらによって観察された132。最大無毒性濃度である300μg/mlの濃度で、この抽出物は両ウイルスのプラーク形成を完全に阻害した。また，ウイルス感染前に抽出物で細胞を前処理しても，ウイルスの浸透性や吸着性は低下せず，感染性も低下しなかった。

Mothanaら56は，イエメンのSoqotra島で採取した25種の植物の熱水およびメタノール抽出物をHSV-1（strain KOS）に対して試験した。最も強い抗ウイルス作用を示したのは，Boswellia elongata（SI未報告），Buxus hildebrandtii（SI=71.4），Euryops arabicus（SI未報告）のメタノール抽出物であり，それぞれのIC50値は0.35μg/mlであった。また、Cissus subaphyllaのメタノール抽出物もIC50値が0.7μg/ml（SI未報告）と有望な抗HSV-1活性を示した。比較のため、アシクロビルのIC50値を0.7μg/mlと算出した。ウイルス数を10倍に増やして実験を再現したところ、B. elongataとB. hildebrandtiiの抽出物は強い抗ウイルス効果を維持していた。その他、HSV-1の抑制効果を示したメタノール抽出物は、Boswellia ameero、Cassia socotrana、Cissus hamaderohensis、Commiphora parvifolia、Dracaena cinnabari、Exacum affine、Fagonia luntii. Jatropha unicostate, Kalanchoe farinacea, Pulicaria stephanocarpa, Trichocalyx obovatus, Withania adunensis, Zygophyllum quatarenseなどが挙げられ、IC50値は1.5〜25μg/mlであった。また，Dorstenia socotrana，P. stephanocarpa，Punica protopunicaの熱水抽出物は，HSV-1に対して活性を示したが，IC50値はそれぞれ32.1μg/ml，50μg/ml，5.8μg/mlと，それほど強力ではなかった。

さらに、アロエベラのHSV-2感染に対する効果について、Zandiら30は、感染したVero細胞に粗製の熱グリセリン抽出物を感染中の異なる時期に投与して調べた。抽出物は、ウイルス接種時に添加した場合、700μg/mlの濃度でHSV-2に対して完全な細胞障害作用を引き起こすことがわかり、IC50値は428μg/ml、SI値は7.56と決定された。ウイルスの付着段階後に抽出物を添加した場合，850μg/mlの投与量でHSV-2の細胞障害作用を完全に阻止した。IC50値は536μg/ml，SI値は6.04であった。

インドの薬用植物Swertia chirataの抗HSV-1活性をVermaらが調査した。

161 植物の葉と茎の乾燥粉末を用いた水抽出物を総濃度1g/mlに調製した。その後、希釈して細胞に処理したところ、抽出液は1:64の希釈率で70%以上のプラーク形成を抑制した。また、感染後4,8,24時間目に抽出液を添加すると、4時間目に感染細胞が最も減少した。さらに，HSV-1の感染とS. chirataの処理を同時に行った後，12，24，48，72時間後にも遺伝物質の増幅は認められなかった。

Kuoら116は，HeLa細胞のHSV-1（strain KOS）に対するLobelia chinensisのメタノール抽出物の抗ウイルス活性を調査した。その結果，Lobelia chinensisの抽出物はプラーク形成を阻害し，IC50値は139.2μg/ml，SI値は約22.5であった。添加時期の実験では、感染後0〜8時間の間に添加すると効果的であることがわかった。さらに、L. chinensisがHSV-1の複製を阻害できることが実験で明らかになったが、これはDNA合成を阻害することによるものと考えられる。

Loizzoらは，レバノン杉として知られるCedrus libaniの3種類の抽出物にHSV-1（strain F）に対する抗ウイルス活性があることを確認した65。試験した抽出物は，植物の葉のエタノール抽出物，植物の球果のエタノール抽出物，植物の樹皮の精油である。3種の抽出物は、IC50値が0.44〜0.66mg/ml、SI値が1.74〜2.91と、同様の抗ウイルス作用を示した。なお、アシクロビルのIC50値は3.77μM、治療指数は27以上とされている。

Wangら137は，中国で50の基本的な薬草の1つとされるPhellodendron amurenseの樹皮のエタノール抽出物の抗ウイルス効果を調べた。抽出物の最大非細胞毒性量は44.12μg/mlと決定され、HSV-1感染時の様々な段階でテストされた。細胞に抽出物を前処理した場合、HSV-1のプラークは約10%しか抑制されなかったが、HSV-1を前処理した場合、プラーク形成は74%抑制された。ウイルスの吸着と複製の最中に抽出物を加えると，プラークが10～15%抑制された。また，アシクロビルを用いた試験では，ウイルスの複製中に添加した場合にのみ，プラークを90%以上抑制することができた。これらの結果から、P. amurenseはウイルス感染前に効果を引き出し、アシクロビルは感染後に効果を引き出すことが示唆された。

また，Liaoらは，Radix isatidisとViola yedoensisという2つの漢方薬について，HSV-1に対する抗ウイルス活性を調べた171。その結果，V. yedoensisのみがウイルスの複製を抑制した。抗ウイルス効果は、感染の6時間前に細胞に抽出物を前処理した場合と、感染の4時間後に細胞に処理した場合で同様であった。著者らは、作用機序がHSV-1を直接不活性化するものではない可能性を示唆した。

キマメとして一般的に知られているCajanus cajanの水性およびエタノール抽出物は，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain HG52）の両方に対して抗ウイルス作用を示した58 Zuらは，58 は，水性抽出物（HSV-1ではIC50 = 14.93 μg/ml，SI >15，HSV-2ではIC50 = 2.33 μg/ml，SI >100）に比べ，エタノール抽出物（HSV-1ではIC50 = 0.022 μg/ml，SI = 618.2，HSV-2ではIC50 = 0.10 μg/ml，SI = 136.0）に両ウイルスがより感受性を示すことを明らかにした。エタノール抽出物は，アシクロビルよりも高い抗ウイルス活性を示した（HSV-1に対してIC50 = 0.59 μg/ml，SI >55.9;HSV-2に対してIC50 = 0.62 μg/ml，SI >53.2）。時間応答アッセイでは，エタノール抽出物では10分，水抽出物では60分の処理時間で90%のプラーク抑制効果が得られた。さらに，ウイルス感染時に異なる時間に抽出物を添加した。いずれの抽出物も，HSV-1またはHSV-2のいずれかに抽出物を前処理した場合にのみ，プラーク形成を95～99%有意に抑制した。また，HSV-2の吸着時に抽出物を添加すると，プラーク形成が約45～60%抑制された。アシクロビルは感染後、ウイルスの細胞内複製中に添加すると抗ウイルス作用を示した。これらの結果は，C. cajanがHSVウイルスに対して直接抗ウイルス作用を発揮することを示唆している。

Arabzadehら173は，Zataria multifloraのメタノール抽出物が，最大無毒性濃度（1000μg/ml）以下の用量でHSV-1（strain KOS）のプラーク形成を有意に阻害することを確認した。抽出物を800μg/ml，500μg/ml，250μg/mlの用量でウイルス吸着中の細胞に添加したところ，HSV-1プラークをそれぞれ100%，93.2%，86.2%抑制することができた。さらに，この抽出物をウイルス感染後1，2，3時間後の細胞に添加したところ，250〜1000μg/mlのすべての用量で100%のプラーク抑制効果が認められた。

さらに，Mukherjeeらは，Achyranthes asperaのメタノール抽出物について，HSV-1（strain F）およびHSV-2（strain G）に対する抗ウイルス作用を検討した24。この抽出物は，HSVのプラーク形成を用量依存的に阻害し，112.5 μg/mlおよび120 μg/mlでHSV-1およびHSV-2を100%阻害した。抽出物のEC50値およびSI値は，HSV-1に対して64.4μg/mlおよび10.2，HSV-2に対して72.8μg/mlおよび9.0であった。また，アシクロビルのEC値およびSI値は，HSV-1に対して2.1μg/ml，61.9であり，HSV-2に対して2.9μg/ml，44.8であった。添加時期の実験では，A. asperaは両ウイルスに対して感染後に抗ウイルス作用を発揮し，感染前や感染時にはほとんど抑制効果が認められなかった。

Farahaniらは，Camellia sinensis，Nerium oleander，Echium amoenumのHSV-1（strain KOS）増殖抑制効果を検討した59。これらの植物を煎じ薬法で抽出して水性抽出物を得，Hep-2細胞を用いて細胞毒性を調べた。その結果，N. oleanderはすべての濃度で細胞に対して毒性を示したため，抗ウイルスアッセイには使用しなかった。他の2つの抽出物の抗ウイルス活性は、処理後1時間、2時間、3時間で測定した。C. sinensisでは，処理後1時間（IC50=20μg/ml，SI=50）および2時間（IC50=60μg/ml，SI=16.7）で有意な抗ウイルス作用が認められたが，3時間目には活性が低下した（IC50=480μg/ml，SI=2.1）．E. amoenumは、最初の1時間で抗ウイルス作用が認められたが（IC50 = 350 μg/ml、SI = 2.9)C. sinensisに比べて抗ウイルス作用は低かった。C. sinensisは1時間以内にHSV-1の増殖を抑制する有効な治療法であると結論づけられた。

Choら83は，Epimedium koreanumの水性抽出物が，マウスのマクロファージ（RAW264.7）およびヒト胚性腎臓（HEK293 T）細胞の両方でHSVの増殖を抑制することを見出した。実験に使用されたHSVウイルスの種類は特定されなかった。ウイルスは，マウスのマクロファージ（EC50=0.62μg/ml，SI=23.5）の方が，ヒト胚性腎臓細胞（EC50=1.41μg/ml，SI=5.9）よりも抽出物に対して感受性が高かった。E. koreanumは、抽出物用量1μg/mlで、RAW264.7およびHEK293 T細胞の両方において、対照と比較してウイルス力価を2倍に減少させることができた。

Pedilanthus tithymaloidesは，HSV-2（strain G），2つのHSV-2臨床分離株，およびHSV-2のチミジンキナーゼ欠損株に対して強い抗ウイルス活性を示した134 Ojhaらは，この植物のメタノール抽出物のEC50値が，4つのウイルス株に対して48.5～52.6μg/ml，SI値が8.29～9.00であったことを明らかにしている。

この抽出物は，86.5μg/mlの用量で感染後2～4時間までにHSV-2の増殖を99%阻害した。対照としてアシクロビルを試験したところ，株Gと臨床分離株の1つに対して，EC50値は2.6～2.8μg/ml，SI値は46.00～49.53であった。さらに、この抽出物は、HSV-2感染時に活性化され、ウイルスの複製に必要なNF-êBを阻害することが明らかになった。

西ヒマラヤ地域で一般的な植物であるIndigofera heteranthaのHSV-2（strain G）に対する抗ウイルス活性をKaushikらが試験した。その結果，根の抽出物が3つの抽出物の中で最も強い抗ウイルス活性を示し，IC50およびSI値はそれぞれ284.2μg/mlおよび13.3であった。その後の著者らの研究によると，この抽出物はHSV-2の付着，吸着，宿主細胞への侵入を阻害することにより，ウイルス複製サイクルの初期にその効果を発揮することが明らかになった191。

さらに，Heら（39）は，Antrodia camphorataという真菌のエタノール抽出物が，HSV-1（strain F）およびHSV-2（strain G）に対して抗ウイルス活性を有することを確認した。その結果，アシクロビルほどではないが，HSV-1に対して61.2μg/ml，HSV-2に対して57.5μg/mlのIC50値でウイルスのプラーク形成を阻害することがわかった。また，本抽出物のSI値は，HSV-1に対して7.92，HSV-2に対して8.43と求められた。なお，アシクロビルのIC50およびSI値は，HSV-1では2.1μg/ml，61.9，HSV-2では2.9μg/ml，44.8であった。

Euphorbia spinidensのメタノール抽出物について，KarimiらはHSV-1（strain KOS）に対する抗ウイルス作用を試験した90。その結果，この抽出物はHSV-1を用量依存的に阻害することができたが，アシクロビルによる治療ほどの効果はなかった。EC50およびSI値はそれぞれ，E. spinidensでは0.34μg/mlおよび14.9，アシクロビルでは0.028μg/mlおよび>178.6と判定された。添加時間の実験では，抽出物を5 mg/mlの濃度で塗布すると，ウイルスのライフサイクルの最初の2時間以内に最も効果的にウイルスを抑制し，合計70%の抑制効果を示した。著者らは，E. spinidensの抽出物がHSV-1の吸着およびウイルス複製の初期段階を阻害する可能性があると結論づけている。

Karimiら148は、Quercus brantiiの抗HSV-1活性も検証した。この植物のドングリの粗抽出物をエチルアルコールを用いて調製し，ベビーハムスター腎臓（BHK）細胞を用いてHSV-1（strain KOS）に対する効果を調べた。その結果，この抽出物はHSV-1に対して抗ウイルス活性を示したが（IC50=4.3μg/ml，SI=48.4），アシクロビル（IC50=1.3μg/ml，SI=136.5）よりも強力ではなかった。また、追加の実験では、吸着時と吸着後の両方に抽出物が存在する場合に、最大のウイルス阻害効果が得られることがわかった。

Ghoshら95は，この植物の葉または樹皮を用いて，水，メタノール，酢酸エチル，クロロホルムを溶媒とする複数の抽出物を調製した。樹皮からの抽出物は、葉からの抽出物に比べて常在菌に対してより強力な抗ウイルス活性を示した。最も注目すべきは，水（EC50=9.76μg/ml，SI=156.8）およびクロロホルム（EC50=6.75μg/ml，SI=119.9）の樹皮抽出物であった。これらの抽出物は、EC50値が0.64μg/ml、SIが468以上を示したアシクロビルには及ばなかった。また，アシクロビル耐性株に対しては，水樹皮抽出物が最も強い抗ウイルス活性を示した（EC50=6.28μg/ml，SI=243.6）。これらの値は，水樹皮抽出物が，野生型のHSV-2と比較して，アシクロビル耐性HSV-2に対してより強力な抗ウイルス作用を誘発することを示唆している。さらに、水性樹皮抽出物によるHSV-2の阻害は、感染前のウイルスを不活性化することによって起こるのに対し、クロロホルム樹皮抽出物はウイルスの細胞への付着や侵入を阻害することによって効果を発揮することが明らかになった。

Sakagamiら155は，HSV-1（strain F）に対するSasa senanensisの葉のアルカリ水抽出物の抗ウイルス活性を調べた。その結果，この抽出物には抗HSV活性が認められ，SI値は6～7であった。また、この抽出物をアシクロビルと併用して試験したところ、相乗効果が認められた。

KesharwaniらによるTerminalia chebulaの果実の50%エタノール抽出物には、非常に強力な抗HSV-2活性が認められた165。この抽出物は、HSV-2（strain G ATCC-VR-734）に対してIC50が0.01μg/ml、SIが40,000以上であり、アシクロビル（IC50=29.04μg/ml、SI=12.1）よりも有意に強力であったという。また，ウイルスを抽出物で前処理することにより，有意なウイルス抑制効果が認められた。この効果は，抽出物がウイルスの付着と宿主細胞への侵入を阻害することによるものと考えられた。逆に、感染後の細胞に抽出物を加えても効果は低かった。

Bonviciniら104は，細胞を抽出物で前処理した場合，感染時および感染後の細胞に抽出物を添加した場合，ならびにウイルスを抽出物で前処理した場合の抗ウイルス活性を試験した。抽出物を感染時に細胞に添加した場合，HSV-1およびHSV-2に対する抽出物のEC50値は，それぞれ66.8μg/mlおよび70.6μg/mlと決定された。感染後の処理では，HSV-1およびHSV-2に対して，抽出物のEC50値はそれぞれ91.3μg/mlおよび86.1μg/mlと判定された。細胞を抽出物で前処理した場合、ウイルスの複製に対する影響は認められなかった。抑制効果は，ウイルスを抽出物で前処理した場合に顕著に強かった。これらの結果から、H. indicusは感染サイクル全体を通してHSVを抑制することができるが、その効果は感染前の方がより強力であることがわかった。さらに感染前の試験では、抽出物がウイルスの付着を特異的に阻害することが明らかになった。また，ウイルスの侵入も抑制されたが，これは高濃度の場合に限られた。興味深いことに、この抽出物の阻害効果は、1回目の感染に比べて2回目の感染でより強く現れた。

さらに，Arisaema tortuosumの葉のエタノール抽出物のクロロホルム画分は，Rittaらによる調査で抗ヘルペス活性を示した44。最初に，A. tortuosumの葉と塊茎の細胞毒性を別々のエタノール抽出物を用いて評価した。葉のエタノール抽出物は毒性が低いことが判明し、さらにn-ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、n-ブタノールで分画した。HSV-1，HSV-2，アシクロビル抵抗性株のHSV-2に対する抗ウイルス作用を評価したところ，クロロホルム画分を除き，すべての画分で毒性が高いことがわかった。HSV-2（EC50 = 0.53 μg/ml，SI = 758）およびアシクロビル耐性HSV-2（EC50 = 0.86 μg/ml，SI = 467.4）は，HSV-1（EC50 = 2.64 μg/ml，SI = 12）と比較して，クロロホルム抽出物に対して感受性が高かった。著者らは，クロロホルム抽出物が直接的な殺ウイルス剤として作用するだけでなく，ウイルスの付着，吸着，複製を阻害することが確認されたと述べている。

Parkら81は，野生型（strain 7401 H），チミジンキナーゼ欠損型（strain B2006），アシクロビル耐性およびホスホノ酢酸耐性のHSV-1株に対して，5種類の海藻のメタノール抽出物の抗ウイルス効果を調べた。すべての抽出物を100 µg/mlの用量で試験した結果，Sargassum ringgoldianumは3種類のHSV-1株のプラーク形成を100%阻害したが，Vero細胞に対して強い細胞毒性を示した。Symphyocladia latiusculaは中程度の細胞毒性を示し，野生型HSV-1に対しては100%のプラーク形成を阻害し，アシクロビルおよびホスホノ酢酸耐性HSV-1に対しては82.74%の阻害率を示したが，チミジンキナーゼ欠損HSV-1のプラークは38.1%の阻害率にとどまった。S. latiusculaのIC50値は56.7 µg/mlと判定された（HSV-1株は特定せず）。Sargassum thunbergii，Ecklonia stoloniferaおよびUlva pertusaの抽出物は，アシクロビルおよびホスホノ酢酸耐性のHSV-1に対しても中程度のプラーク抑制効果を示し，それぞれ55.99%，47.79%および40.67%の抑制効果が認められた。S. thunbergiiとU. pertusaは細胞毒性を示さなかったが，E. stoloniferaはVero細胞に対して軽度の細胞毒性を示した。S. latiusculaのメタノール抽出物は，ヘキサン，ジクロロメタン，酢酸エチル，ブタノール，水の順に溶媒を用いて，5つのフラクションに連続的に分画した。その結果、ジクロロメタン画分が最も強い抗HSV-1活性を示し、IC50値は7.73 µg/mlであった（HSV-1株は特定せず）。

別の海藻であるCystoseira myricaについて，Zandiら77はHSV-1（strain KOS）に対する抗ウイルス活性を調べた。植物全体の熱水抽出液を調製し，ろ過とオートクレーブの2つの方法で滅菌した。これらの抽出物をウイルス接種と同時に細胞に添加したところ，IC50値とSI値はそれぞれ，ろ過した抽出物では99 µg/mlと33.4，オートクレーブした抽出物では125 µg/mlと28.2と判定された。接種後2時間後に添加した場合には、抽出物の効果は低く、IC50およびSI値はそれぞれ、ろ過した抽出物で143μg/mlおよび23.1,オートクレーブした抽出物で162μg/mlおよび21.7を示した。

最後に，Deethaeら158は，淡水産の緑藻類Spirogyraから水性，エタノール性，メタノール性の抽出物を作り，HSV-1（strain F）およびHSV-2（strain G）に対する抗ウイルス活性を調べた。まず，ウイルスの付着前，付着中，付着後の細胞に抽出物を添加して効果を測定した。HSV-1はエタノール抽出物（IC50=164.20μg/ml，SI=2.17）に，HSV-2はメタノール抽出物（IC50=75.03μg/ml，SI=3.34）に感受性が高かった。さらに，HSV-1およびHSV-2の両ウイルスを感染前に抽出物で処理した場合，メタノール抽出物が最も強く阻害した。ウイルスの複製に対する効果では，抽出物は感染後30時間までにHSVの収量を抑制することができた。HSV-1に対してはメタノール抽出物が，HSV-2に対しては水抽出物が，それぞれ最大の抑制効果を示した。試験したすべてのウイルスステージを比較すると，最も強力な抗HSV活性はウイルスの付着時に観察された。

中央アメリカ/カリブ

Del BarrioとParra139は，キューバ原産の植物であるPhyllanthus orbicularisの葉と茎の水性抽出物のHSV-2に対する抗ウイルス活性を，ヒト包皮線維芽細胞を用いて評価した。この抽出物は，EC50値が25.7μg/ml，SI値が26.03であった。HSV-2ウイルスを直接処理したところ、P. orbicularis抽出物5～25μg/mlの処理でウイルス力価が2 log10減少し、50～75μg/mlの処理で2.75 log10減少した。著者らは、P. orbicularisが抗ヘルペス作用を発揮するのは、ウイルスを直接阻害するか、あるいは宿主細胞への侵入を阻害することによると考えている。

その後，Fernandez Romeroら140は，P. orbicularisの茎と葉を，ジエチルエーテル，クロロホルム，ブタノール，50%エタノール，酢酸／水の組み合わせの順に溶媒を用いて5つの連続した抽出画分にした。ブタノール画分と酢酸画分は，ヒト包皮線維芽細胞とVero細胞において，アシクロビル感受性HSV-1とアシクロビル耐性HSV-1に対して，それぞれ有意な殺ウイルス活性を示した。ウイルス感染時に細胞に添加したところ，ブタノール抽出物はアシクロビル感受性HSV-1に対してEC50値が30.4～31.3μg/ml，SI値が21.6～22.8，アシクロビル耐性HSV-1に対してEC50値が32.8～42.5μg/ml，SI値が15.5～21.8であった。酢酸抽出物はそれほど強力ではなく，アシクロビル感受性HSV-1に対するEC50値は32.5～35.9μg/ml，SI値は10.3～11.6，アシクロビル耐性HSV-1に対するEC50値は29.4～30.7μg/ml，SI値は11.3～13.5であった。さらに，感染前のウイルスに抽出物を添加したところ，より高い抗ウイルス効果を示した。酢酸抽出物は，アシクロビル感受性HSV-1（EC50 = 0.47-0.53 μg/ml，SI = 705-785）およびアシクロビル耐性HSV-1（EC50 = 0.40-0. 68 μg/ml，SI = 491-1040）と比較して，ブタノール抽出物（アシクロビル感受性HSV-1ではEC50 = 0.74-1.93 μg/ml，SI = 371-895，アシクロビル耐性HSV-1ではEC50 = 1.15-1.51 μg/ml，SI = 474-572）の方が優れていた。著者らは，P. orbicularisのブタノール抽出物および酢酸抽出物は，ウイルスの宿主細胞への吸着，付着，浸透を抑制する可能性があると結論づけている。また、これら2つの抽出物のSI値は、del BarrioとParraの研究で使用されたP. orbicularisの水抽出物のSI値よりも10～20倍高いと結論づけている139。

ヨーロッパ

ヨーロッパのLamiaceaeファミリーのハーブに関する研究の多くは、Melissa officinalisに焦点を当てている。Dimitrovaら120は，50%エチルアルコール，50%エタノール，酢酸エチル，水を溶媒として，HSV-1（strain DA）に対するM. officinalisの4つの抽出物の予防および治療効果を検討した。HSV-1ウイルスを用いてインキュベートしたところ，水抽出物では3時間後，非水抽出物では12時間後に完全なウイルスの不活性化が認められた。さらに、非水系の抽出物をウサギの腎臓（RK）細胞に感染前後に添加したところ、3つの抽出物ともウイルスの繁殖を抑制することができなかった。

さらに，Schnitzlerら122は，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain HG）に対するM. officinalis精油の抗ウイルス効果を調査した。エッセンシャルオイルは，最大1%のエタノールで希釈した。プラーク減少アッセイでは，0.002%のオイル濃度でHSV-1を98.8%，HSV-2の力価を97.2%減少させた。それ以上の濃度では，ウイルスの感染力はほとんど見られなかった。IC50値とSI値はそれぞれ，HSV-1では0.0004%と7.5，HSV-2では0.00008%と37.5と算出された。HSV-1およびHSV-2をM. officinalisオイルの最大非毒性濃度（0.002%）で前処理したところ，ウイルスの感染力は有意に低下した。しかし，ウイルス吸着時にこの処理を施すと，HSV-1では64.8%，HSV-2では39.9%のプラーク形成の中等度の減少が見られた。RC-37細胞を感染前または感染中に精油で処理した場合、プラーク形成には影響がなかった。エッセンシャルオイルは非常に親油性が高いことから，著者らは，オイル中の有効成分がヒトに局所的に使用される直接的な抗ウイルス剤として使用できるメカニズムを提案した。

Mazzantiら123は，M. officinalisの水溶性抽出物が，ウイルス侵入後のHSV-2に対して有意な抗ウイルス効果を示すことを見出した。この抽出物は，まず細胞毒性を調べたところ，1 mg/mlの濃度までは細胞に障害を与えなかった。Vero細胞を感染後に0.5 mg/mlの用量で抽出物で処理したところ、細胞障害性効果は60%減少し、これが最大の効果であった。しかし，HSV-2ウイルスと抽出物をインキュベートしても，ウイルスの侵入を抑えることはできなかった。著者らは，M. officinalisがHSV-2に結合して宿主細胞への侵入を防ぐのではなく，侵入後にその効果を引き出すことを示唆している。

M. officinalisの抗ウイルス作用に関する研究は，Astaniら124によって引き続き行われ，HSV-1（strain KOS）に対するM. officinalisの水性抽出物の抗ウイルス作用が調べられた。抽出物でウイルスを前処理したところ，IC50は0.4μg/ml，SIは875であり，15μg/mlの濃度では99%以上のウイルスの不活性化が認められた。さらに、この抽出物は、最大非細胞毒性濃度（150μg/ml）の20倍の濃度である7.5μg/mlで、RC-37細胞へのウイルス付着を98%阻害した。著者らは，M. officinalisがウイルスの不活性化とウイルス付着の阻害の両方を示したことから，この植物はHSV感染症の予防薬として使用するのに適した候補であると結論づけている。

Nolkemperら121は，M. officinalis，Mentha piperita，Prunella vulgaris，Rosmarinus officinalis，Salvia officinalis，Thymus vulgarisなど，Lamiaceae植物科のさまざまな種から抽出した水性抽出物の抗ウイルス効果を調べた。すべての抽出物は，ウイルスを感染前に抽出物で処理した場合に阻害効果を示したが，HSV-1（株KOS）に対しては，HSV-2（株HG）に比べて効果が強かった。抗ヘルペス活性が強いものから順に，M. piperita（HSV-1に対してIC50 = 0.041 μg/ml，SI = 2610，HSV-2に対してIC50 = 0.227 μg/ml，SI = 471），M. officinalis（HSV-2に対してIC50 = 0.227 μg/ml，SI = 471）であった。officinalis（HSV-1に対するIC50=0.025μg/ml、SI=2200;HSV-2に対するIC50=0.027μg/ml、SI=2037)T. vulgaris（HSV-1に対するIC50=0.065μg/ml、SI=954;IC50=0. 0.077μg/ml、HSV-2ではSI = 805)P. vulgaris（HSV-1ではIC50 = 0.229μg/ml、SI = 546,HSV-2ではIC50 = 2.114μg/ml、SI = 59)S. officinalis（IC50 = 0. S. officinalis（HSV-1ではIC50=0.777μg/ml、SI=113,HSV-2ではIC50=1.359μg/ml、SI=65)R. officinalis（HSV-1ではIC50=0.646μg/ml、SI=98,HSV-2ではIC50=1.055μg/ml、SI=60）であった。添加時期の実験では，すべての抽出物はウイルスを前処理したときに最も強い抗ウイルス効果を発揮し，感染後に処理した場合には，どの抽出物もウイルスの複製を阻害する能力を示さなかった。アシクロビル耐性のHSV-1株を各抽出物の最大非細胞毒性濃度で処理したところ，M. piperitaは85%，S. officinalisは97%，ウイルスの感染力を低下させることが確認された。著者らは，シソ科の様々な種の水性抽出物が，医薬品による抗ウイルス治療に抵抗性であることが知られている株を含むHSVの吸着を阻害することができることを提案した。このように、これらの植物は、HSV感染症の再発を防ぐための局所治療薬として有益であると考えられる。

さらに，Schnitzlerら153は，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain HG）に対して，Salvia officinalisの水性抽出物および複数のエタノール抽出物（20%，40%，60%，80%）が抗ウイルス作用を示すことを見出した。抽出物は，著者の庭とシュヴァーベン山脈という2つの地域で採取されたS. officinalisの標本から作られた。RC-37細胞を抽出物で前処理したところ，HSV-2のプラーク減少率が最も高かったのは，庭のS. officinalis標本の20%エタノール抽出物（94%）とSwabian Mountainsの抽出物（99%）であった。HSV-1に対する効果は著しく低かった。抽出物でウイルスを前処理した場合，産地にかかわらず，HSV-1とHSV-2のウイルスプラークはそれぞれ90%と99%減少した。各園の抽出物ならびに水性および40%エタノールの山の抽出物は，HSV-1（IC50 = 0.03-11.18μg/ml，SI = 56-5463）に比べてHSV-2（IC50 = 0.02-3.20μg/ml，SI = 197-18,345）に対してより強い抗ウイルス活性を示した。逆に、20%、60%、80%エタノールの山の抽出物は、HSV-1（IC50 = 0.12-0.48 μg/ml、SI = 1135-3755）に対して、HSV-2（IC50 = 0.25-0.64 μg/ml、SI = 865-1802）に比べて大きな効果があった。著者らは、エタノールの抽出物は水の抽出物よりも抗ウイルス性が高く、庭のS. officinalisを使ったものはより大きな抗ウイルス効果があると結論づけている。したがって、S. officinalisの抗ヘルペス作用には採取場所が一役買っている可能性がある。

続いて，Reichlingら126は，シソ科の一般的な薬用植物4種のエタノール抽出物を調製し，HSV-1に対する抗ウイルス活性を調べた。対象とした植物は，Prunella vulgaris，Mentha piperita，Rosmarinus officinalis，Thymus vulgarisである。各植物の2種類の抽出液を20%エタノールと80%エタノールを溶媒として調製し，アシクロビルに感受性のあるHSV-1（KOS株）とアシクロビルに耐性のあるHSV-1（Angelotti株と1246/99株）に対して試験を行った。すべての抽出物の一連の希釈を行い，ウイルスの感染性を調べた。すべての希釈抽出物が有効であり，0.01%の低濃度でもウイルスの感染力をほぼ完全に減少させた。M. piperitaの抽出物は，野生型HSV-1に対して最も効果的であり，20%エタノール抽出物のIC50値は0.06μg/ml，SI値は7040であり，80%エタノール抽出物のIC50値は0.05μg/ml，SI値は5632であった。その他の抽出物は，IC50値が0.08～0.82μg/ml，SI値が90～4530であった。さらに，アシクロビル耐性のHSV-1に対しても，80%エタノール抽出物はいずれも両菌株のプラークを完全に減少させた。添加時間の実験では，宿主細胞を抽出物で前処理した場合，P. vulgarisとM. piperitaの80%エタノール抽出物がウイルスの感染力を有意に低下させる唯一の抽出物であることが明らかになった。ウイルスを前処理した場合、M. piperitaの20%エタノール抽出物、P. vulgaris、M. piperita、T. vulgarisの80%エタノール抽出物は、ウイルスの感染力を完全に低下させる効果があった。その他の抽出物は，プラークを75%以上減少させる効果があった。ウイルス吸着時に抽出物を添加した場合，P. vulgarisとM. piperitaの80%エタノール抽出物はウイルスの感染力を完全に抑制したが，R. officinalisの80%エタノール抽出物を除く他の抽出物はプラーク形成を50%以上減少させた。著者らは，M. piperitaとP. vulgarisの80%エタノール抽出物は，二重の抗ヘルペス作用を示すことから，HSV感染症の治療に有望な候補であると結論づけている。

別の研究では，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain HG52）に対するM. piperita精油の抗ウイルス活性が検証された127。Schuhmacherらは，精油をエタノールで希釈し，0.01%の精油でウイルスを1時間前処理したところ，HSV-1のプラーク形成を82%，HSV-2のプラーク形成を92%減少させることができたと報告している。M. piperitaのHSV-1およびHSV-2に対するIC50値は，それぞれ0.002%および0.0008%と算出された。HSV-1のウイルスを精油と3時間インキュベートしたところ、プラークは99%減少した。添加時間の実験では，ウイルスを精油で前処理することで最大の抗ウイルス効果が得られ，宿主細胞を前処理または後処理することで抗ウイルス活性はほとんど得られなかった。さらに、精油を0.01%の濃度で前処理することで、アシクロビル耐性のHSV-1を99%抑制することができた。著者らは，M. piperitaがウイルスの吸着を阻害することで抗ウイルス作用を発揮することを示唆している。

最後に，Omidianら125は，HSV-1の複製の異なる段階におけるM. piperitaの熱水抽出物の抗ウイルス効果を調査した。この抽出物は，宿主細胞を前処理した際のHSV-1感染を部分的に阻止し（EC50 = 62.70 mg/ml，SI = 1.79），HSV-1の吸着を部分的に阻害した（EC50 = 26.65 μg/ml）。ウイルス吸着後に抽出物を添加すると，ウイルス粒子は2時間以内に完全に不活性化し，HSV-1の収量は感染後30時間で抑制された。

Lamiaceae familyに属さない他の多くのヨーロッパの植物についても、その抗ウイルス効果が研究されている。SerkedjievaとIvancheva97は，Geranium sanguineumの抽出物について，Vero細胞およびヒト胚性皮膚筋肉細胞（E6SM）におけるHSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain G）に対する抗ウイルス能力を試験した。初期株の気根部とエタノール，メタノール，ハイドロエタノール，地上部とメタノール，後期株の気根部とメタノールを用いて5種類の抽出物を作成した。最も強い抗ウイルス作用を示したのは，水性エタノール抽出物（EC50=5.4μg/ml，SI=17.8）で，最も弱いのはメタノールの地上部抽出物（EC50=12.1μg/ml，SI=5.6）であった。ヒドロエタノール抽出物はHSV-1に対して用量依存的なウイルス阻害作用を示し，さらにHSV-2に対しても殺ウイルス作用を検討した。HSV-2はHSV-1と比較して，この抽出物に対してより感受性が高いことが示された（SI = 27.7）。また、添加時間の実験では、ヒドロエタノール抽出物は感染後の細胞に添加した場合にのみ有意な抗ウイルス効果を発揮し、感染前の細胞やウイルスの吸着・侵入時に添加した場合には、有意な抗ウイルス効果を発揮しないことが明らかになった。

その後、Serkedjieva145は、紅藻類のPolysiphonia denudataを用いて、3種類のHSV-1株（KOS、McIntyre、Kupka）およびHSV-2（GC25927株）に対する抗ウイルス効果を調べた。水抽出物は，HSV-1（EC50 = 0.18-0.42 μg/ml，SI = 24.8-47.7）に対して，HSV-2（EC50 = 1.2 μg/ml，SI = 8.7）よりも強い抗ヘルペス作用を示した。抗ウイルス効果は、使用したHSV株や細胞の種類によって異なっていた。例えば，HSV-1のKupka株を用いたVero細胞では，最も低いEC50である0.18 mg/ml（SI = 47.7）が観察されたのに対し，HSV-2のGC25927株を用いたE6SM細胞では，最も高いEC50である1.2 mg/ml（SI = 8.7）が観察された。抗ウイルス効果は用量依存的であり，高濃度では，具体的にはMIC90が6.5 mg/mlとなり，水抽出物は細胞外に作用してウイルスの吸着を防ぐことができた。添加時期の実験では、ウイルスの吸着時や感染後に抽出物を添加すると阻害効果があることが示された。

Serkedjieva67は，さらに紅藻類のCeramium rubrumを用いて，Vero細胞におけるHSV-1（strain Kupka），E6SM細胞におけるHSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain GC25927）に対する抗ウイルス効果を評価した。HSV-1 strain KOSは，C. rubrumの水抽出物に対して最も感受性が高く（EC50 = 0.5 mg/ml，SI = 10.8），用量依存的な直接殺傷活性を示した。一方，HSV-1 strain KupkaおよびHSV-2に対しては，EC50が1.1-1.2 mg/ml，SIが4.9-5.2と，それほど強くなかった。

さらに，Rhus aromaticaの根および樹皮からの乾燥水抽出物を，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain HG52）に対する抗ヘルペス活性について，Reichlingら150が研究した。R. aromaticaは，植物抽出物で処理する前にウイルスを曝露した細胞では感染を有意に減少させなかったが，感染前にウイルスとインキュベートした場合には，抽出物がプラーク形成を有意に減少させることが示された（HSV-1ではIC50 = 0.0005% and SI = 5400，HSV-2ではIC50 = 0.0043% and SI = 628）．HSV-1はこの抽出物に対してより感受性が高く、毒性のない用量である0.0025%の抽出物とウイルスを1分間インキュベートしたところ、HSV-1のプラークは90%減少した。

Lazreg Arefら94は，Ficus caricaのラテックスから5種類の抽出物を作り，溶媒はヘキサン，酢酸エチル，メタノール，クロロホルム，酢酸ヘキサン-エチルを用いた。100mg/mlまでの濃度では、クロロホルム抽出物の100mg/mlを除いて、いずれの抽出物もVero細胞に対して細胞毒性作用を示さなかった。ヘキサン抽出物と酢酸ヘキサンエチル抽出物は，試験したすべての濃度において，ウイルスの侵入，吸着，細胞内複製を阻止し，HSV-1を最もよく抑制した。具体的には，これら2つの抽出物の濃度は78μg/mlから100mg/mlの範囲であった。

Gescherら149は，Rhododendron ferrugineumの空中部から調製した水性抽出物が，HSV-1（strain 17 syn+）の宿主細胞への付着および侵入を阻止することを確認した。この抽出物は，1μg/mlおよび25μg/ml以上の濃度でウイルスの付着および侵入を完全に阻害した。抽出物でウイルスを前処理した場合、抗ウイルス効果はIC50が7.4μg/ml、SIが63.9に相当した。著者らは、R. ferrugineumがウイルスのエンベロープと直接相互作用し、宿主細胞への付着や侵入を防いでいることを示唆している。

Sarkarら112は，キノコLentinus edodesの菌糸体を用いて，HSV-1（strain F）に対する抗ウイルス活性を調べた。L. edodesを培養，抽出，ろ過し，最終製品をJLS-S001と命名した。この抽出物は，細胞からのHSV-1粒子の放出を阻止することが確認された（EC50 = 20 µg/ml, SI = 40）。また、この抽出物で細胞を前処理した場合、ウイルスの吸着は阻止されないことが確認された。

Santoyoらは，L. edodesと他のキノコ類の抗ヘルペス活性を評価した55 。キノコ類のBoletus edulis，L. edodes，Pleurotus ostreatusから水およびメタノール抽出物を調製した。水抽出物はメタノール抽出物よりも高い殺ウイルス活性を示したが，全体的な効果は低かった。3.75 mg/mlの濃度でHSV-1（strain KOS）は，L. edodes，B. edulis，P. ostreatusの水抽出物でそれぞれ50%，25%，15%阻害されたが，18.75 mg/mlの濃度ではすべてのメタノール抽出物で50%阻害された。添加時間の実験では，細胞を抽出物で前処理した場合，3種類の水抽出物すべてが，75μg/mlおよび100μg/mlの濃度でそれぞれ約60%および90%のウイルス感染を抑制した。メタノール抽出物は100μg/mlの濃度で40〜50%ウイルス感染を抑制した。また，水抽出物はウイルスの吸着をより強力に阻害し，50μg/mlおよび75μg/mlの濃度でそれぞれ60%および80%のウイルス感染力の低下を示した。最後に，ウイルスの複製を用量依存的に阻害する効果は，水抽出物の方がより強く認められた。水抽出物のIC50値およびSI値は，それぞれL. edodesで27.04μg/mlおよび14.21，B. edulisで35.12μg/mlおよび13.96，P. ostreatusで26.69μg/mlおよび15.15であった。メタノール抽出物は，前処理した細胞の感染防止，ウイルスの吸着防止，ウイルスの複製阻害の効果は低いものの，コントロールよりも高い効果を示した。作用機序の観点から 著者らは、キノコ類の抽出物がHSV-1の初期感染時にウイルスの付着または吸着を阻害し、さらに細胞内のウイルス複製を阻害すると推測している。

Santoyoらの別の研究78では，加圧液体抽出法を用いて，微細藻類のHaematococcus pluvialisとDunaliella salinaのヘキサン，エタノール，水の各抽出物を作成し，HSV-1（strain KOS）に対する抗ウイルス活性を評価した。H. pluvialis抽出物をウイルス感染細胞に添加したところ，細胞内複製の阻害は，ヘキサン抽出物（IC50 = 189.58 µg/ml，SI = 3.57）および水抽出物（IC50 = 133.98 µg/ml，SI = 12.01）と比較して，エタノール抽出物で最も大きかった（IC50 = 99.59 µg/ml，SI = 7.39）．D. salinaの抽出物はやや弱い活性を示したが，水抽出物（IC50 = 137.53 µg/ml, SI = 11.48）は，ヘキサン抽出物（IC50 = 168.81 µg/ml, SI = 2.88）およびエタノール抽出物（IC50 = 152.73 µg/ml, SI = 4.07）に比べて強い抗ウイルス作用を示した。添加時期の実験では、感染前に細胞を処理した場合の方が、感染時に添加した場合よりも抽出物の効果が高いことがわかった。H. pluvialisのエタノール抽出物が最も効果的で，HSV-1の感染力は，前処理した75µg/mlの投与量で85%減少したが，同時添加した150µg/mlの投与量では75%減少した。また，抽出物の殺ウイルス活性についても検討したが，すべての抽出物が10mg/ml以上のIC50値を示したことから，著者らは殺ウイルス活性はほとんどないと結論づけた。

さらに，Civitelliら128は，HSV-1（strain F）に対するMentha suaveolensの精油の抗ヘルペス活性を，Melaleuca alternifoliaの精油と比較した。その結果，M. suaveolensの精油のIC50値は5.1 μg/ml，SI値は67であり，M. alternifoliaの精油のIC50値は13.2 μg/ml，SI値は44であった。これらの値は、M. suaveolensがM. alternifoliaに比べてより大きな抗ウイルス能力を持っていることを示唆している。興味深いことに、各精油とアシクロビルを併用すると、相加的な抗ウイルス効果が認められた。さらに，各抽出物は細胞内のウイルスの代謝を阻害するが，ウイルスの吸着を防ぐことはできないことが示された。

Glycyrrhiza glabraは，Ghannadら100によって，HSV-1のウイルスの吸着を防ぎ，ウイルスの培養を遅らせる能力について試験された。Vero細胞をG. glabraの水抽出物で前処理し，HSV-1と1時間だけインキュベートしたときに，最大の抗ウイルス活性が見られた。さらに、細胞をHSV-1で処理し、1時間インキュベートした後に洗浄し、1,4,8,12時間後に非細胞毒性量の抽出物で処理した。コントロールと比較して最も顕著な結果が得られたのは、1時間後と12時間後の処理であった。著者らは、G. glabraの抗ウイルス能力は、ウイルスを直接阻害するか、ウイルスが宿主細胞に付着するのを防ぐことに由来すると推測している。また、著者らは、抽出物がウイルスの複製を遅らせることができたという結果から、G. glabraがウイルスの遺伝子発現を阻害している可能性を示唆している。

Fukuchiら101は，HSV-1（strain F）に対する抗ウイルス活性を示す，pH値の異なるGlycyrrhiza glabra水抽出物の能力を調べた。中性の水抽出物（EC50=650～740μg/ml，SI=2.0～＞4.6）は，アルカリ性の水抽出物（EC50=600～＞3000μg/ml，SI=＜1～3.2）に比べて大きな抗ウイルス活性を示した。ポジティブコントロールとして、Sasa senanensisのアルカリ抽出物を用いた。Sasa senanensisのアルカリ抽出物は、著者らが以前の研究で抗HSV活性を示している。S. senanensisは、HSV-1感染後の細胞生存率を維持するという観点から、G. glabraのすべての抽出物よりも優れていた（EC50 = 0.033-0.048 μg/ml、SI = 4.5-11.4）。全体的に見て，G. glabraは抗ヘルペス治療薬として作用する可能性があるが，利用可能な植物の中で最も有望ではないかもしれない。

Sokmenらは合計24種の植物についてHSV-1およびHSV-2に対する抗ウイルス活性を試験したが、すべての植物が効果を示すことはなかった192。研究対象となった植物は，Allium macrochaetum subsp. macrochaetum，A. macrochaetum subsp. tuncelianum，A. pustulosum，A. flavum，A. scorodoprosum，A. chrysanthemum，A. dictyoprosum，Rhus coriaria，Bupleurum sulphureum，Cannabis sativa var. sativa, Helianthemum ledifolium, Ecbalium elaterium, Phlomis kurdica, Sideritis libanotica, Thymus fallax, Linum usitatissimum, Urtica dioica, Peganum harmala, Hypericum scabrum, H. Capitatum, Achillea biebersteinii, Pimpinella anisum, Nigella sativa.

北アメリカ

Opuntia streptacanthaは、メキシコに生息するサボテンで、人間の軽度の糖尿病の治療に安全に使用されてきた。Ahmadら133は，乾燥粉末，アセトン，エーテル，クロロホルムの抽出液を用いて，HSV-2（strain 3345）に対するO. streptacanthaの抗ウイルス効果を研究した。異なる濃度の抽出物を，ウイルス吸着直後のベビーハムスター腎臓細胞（BHK-21）に添加した。3.5mg/mlの濃度ではウイルスの複製が2.3log10減少し，15mg/mlではウイルスの複製が完全に停止した。また、15mg/mlの濃度では、ウイルスのタンパク質合成が完全に阻害されたが、細胞のタンパク質合成には影響が見られなかった。ウイルスの複製に対しては、ウイルス接種の24時間前に細胞を前処理することで、より強力な効果が見られ、3.5mg/mlの濃度で複製を2.6 log10阻害した。また、感染48時間前に細胞を前処理した場合も同様の減少が見られた。さらに、ヒト子宮頸部細胞にHSV-2を接種した後、植物抽出物またはプラセボとともに2日間培養した。抽出物を15mg/mlの濃度で投与した場合、ウイルスの複製は3.5 log10減少した。最後に、O. streptacanthaを3gまたは6g、30日間摂取させて毒性を調べた。その結果、30日後に抽出物を人間が摂取しても、有害事象は報告されなかった。

Binnsら79は，8種類のエキナセアの根から70%エタノールで抽出し，HSV-1に対する抗ウイルス活性を評価した。いくつかの抽出物は，さらにn-ヘキサンおよび／または酢酸エチルで分画した。抗ウイルスアッセイでは，光増感剤である可能性のある化合物の活性化を確実にするため，可視光およびUV-A光への曝露を行った。その結果，E. pallida var. Sanguineaのエタノール抽出物のMICは0.026 mg/ml以下，E. purpureaの根のn-ヘキサン抽出物のMICは1.56 mg/mlとなり，最大の阻害活性が得られた。さらに，E. atrorubens var atrorubensおよびE. pallida var angustifoliaのエタノール抽出物とE. pallida var. angustifolia，E. pallida，E. pallida var. tennesseensisのn-ヘキサン画分は，それぞれMICが＜1 mg/mlであった。

また，Schneiderら80は，E. pallidaの抗ウイルス活性をHSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain HG52）に対して，水エタノール抽出物と植物の搾り汁を用いて検討した。植物の地上部を用いて，20%，40%，60%，80%の水性エタノールによる抽出物と，殺菌剤として96%のエタノールを混合した搾汁液を作成した。すべてのアルコール水抽出物は用量依存的な抗ウイルス活性を示したが，最も顕著な抗ウイルス活性は圧搾液から見出された（HSV-1に対するIC50 = 0.001% and SI = 22,700;HSV-2に対するIC50 = 0.0002% and SI = 113,500）．また、20%、40%、60%、80%エタノール抽出物のHSV-1に対するIC50値は、それぞれ0.03%（SI=506）,0.001%（SI=8400）,0.005%（SI=1100）,0.007%（SI=514）であった。さらに、20%、40%、60%、80%エタノール抽出物のHSV-2に対するIC50値は、それぞれ0.007%（SI = 2171）,0.01%（SI = 840）,0.006%（SI = 916）,0.004%（SI = 900）であった。Time-of-addition実験では，搾汁液はHSVの細胞内と細胞外の両方のウイルスに高い効果を示し，一方，水抽出物は細胞外のウイルスに影響を与えた。

さらに，Lavoieら（75）は，HSV-1（strain ATCC-VR733）に対するCornus canadensisの抗ウイルス作用を試験した。抽出物は，乾燥した茎と葉から，水，エタノール，水とエタノールの1：1の3種類の溶媒を用いて，煎じたり注入したりして作られた。ウイルスの吸収は，HSV-1と水：エタノールの煎じ液を同時に添加することで最もよく防止され，水の煎じ液ではいずれも9μg/mlのEC50を示した。ウイルスの直接的な阻害は，水または水：エタノール抽出物の煎じ液と煎じ液の両方で見られ，EC50は11～17μg/mlであった。EC50が50μg/mlを超えるものとして著者らが定義した、細胞を前処理した場合やウイルス複製中に添加した場合に、抗ウイルス効果を誘発する抽出物は認められなかった。したがって、C. canadensisは、ウイルス感染の初期段階またはその後に使用するのが最も効果的である。

最近、Silva-Maresら63は、抗ヘルペス活性について様々な植物をスクリーニングした。Juglans mollis，Persea americana，Hamelia patens，Clematis drummondii，Salvia texana，Salvia ballotaefloraの葉，地上部，皮質からメタノール，または水とメタノールを1:9で混合した抽出物を作成した。また，Ceanothus coeruleusとChrysactinia mexicanaの根からは，それぞれ酢酸エチルとエチルエーテルの抽出物を作成した。これらの抽出物は，Vero細胞にウイルスを感染させた後に添加した。その結果，HSV-1とHSV-2の両方に対して，S. ballotaefloraの抽出物が最も大きな抗ウイルス活性を示し，IC50値はそれぞれ31μg/mlと16μg/mlであった。次いで，J. mollisの抽出物は，HSV-1およびHSV-2に対して，それぞれ76μg/mlおよび126μg/mlのIC50値を示した。HSV-1とHSV-2に対するSI値は，J. mollisでは26.3以上，15.8以上，S. ballotaefloraでは7.5以上，14.6以上であった。また，HSV-1とHSV-2に対するSI値は，それぞれ以下の通りであった。P. americanaでは5.0および<3.4，H. patensでは>4および>9.4，S. texanaでは1.9および7.5，C. coeruleusでは5.45および3.8，C. mexicanaでは>11.7および>5.8，C. drummondiiでは>4.3および>7.8であった。

また，Zaharievaら102による最近の研究では，Graptopetalum paraguayenseのヒドロメタノール抽出物について，HSV-1およびHSV-2の菌株に対する抗ウイルス活性を評価した。その結果，HSV-1の野生型株（EC50 = 0.0001 mg/ml，SI = 25,000）およびHSV-2の野生型株（EC50 = 0.01 mg/ml，SI = 250），ならびにHSV-1のアシクロビル耐性株（EC50 = 0.001 mg/ml，SI = 2,500）およびHSV-2のアシクロビル耐性株（EC50 = 0.1 mg/ml，SI = 25）に対して，本抽出物は抗ウイルス性を示した。興味深いことに，この抽出物は，試験した4株すべてにおいてアシクロビルよりも高い抗ヘルペス作用を示した。

オセアニア

Schnitzlerら87は，Melaleuca alternifoliaを原料とするティーツリーオイルとEucalyptus globulusを原料とするユーカリオイルの抗ヘルペス効果を比較した。ティーツリーオイル（HSV-1に対するIC50 = 0.0009%，SI = 6.7，HSV-2に対するIC50 = 0.0008%，SI = 7.5）は，ユーカリオイル（HSV-1に対するIC50 = 0.009%，SI = 3.3，HSV-2に対するIC50 = 0.008%，SI = 3.75）よりも強力な抗ウイルス活性を示した。さらに，ティーツリーオイルは，ウイルスを前処理した場合に有意に高い殺ウイルス活性を示し，非細胞毒性濃度で各HSV株の90%以上を除去した。ユーカリオイルは，HSV-1とHSV-2のウイルス力価をそれぞれ58%と75%減少させた。添加時間の実験から、両オイルはウイルスの吸着に影響を与える能力があるが、ウイルスの浸透後には影響を与えないことがわかった。著者らは，M. alternifoliaまたはE. globulusから抽出したオイルは，HSV感染症の局所治療薬として有効である可能性があると結論づけている。

メラレウカ科の別の3種，M. ericifolia，M. leucadendron，M. armillarisについても，HSV-1に対する精油の作用が研究された。Faragら119は，M. armillarisで99%の殺ウイルス効果，M. leucadendronで92%の殺ウイルス効果，M. ericifoliaで91.5%の殺ウイルス効果を観察した。著者らは、プラーク減少率のばらつきは、各植物の精油の成分が異なることや、葉を採取した時期に起因すると説明している。

さらに，Reichlingら113は，HSV-1（strain KOS）とHSV-2（strain HG52）の両方に対して，一般にマヌカオイルとして知られているLeptospermum scopariumの精油の抗ウイルス効果を調べた。ニュージーランドで抗感染症オイルとして商業的に使用されているマヌカオイルは，すべてのアッセイにおいて最終的なエタノール濃度が1%になるようにエタノールで希釈された。L. scoparium精油は，ウイルスを前処理した場合，用量依存的に両ウイルスのプラーク形成を阻害した。IC50およびSI値はそれぞれ，HSV-1では0.96μg/mlおよび40，HSV-2では0.58μg/mlおよび66.2と判定された。さらに、ウイルス感染サイクルの異なる段階のHSV処理細胞に、マヌカオイルを非細胞毒性濃度の28.8μg/mlで添加した。ウイルス感染前にオイルで細胞を前処理しても、プラーク形成は減少しなかった。しかし、ウイルス感染前に前処理を行うことで、HSV-1とHSV-2の感染力はそれぞれ99.5%と98.9%減少した。マヌカオイルは，ウイルスのライフサイクルが進行するにつれて効果が低下した。したがって、L. scopariumのエッセンシャルオイルは、治療ではなく、HSV感染症の予防薬として有効である可能性がある。

南米

Hayashiら74は，Cordia salicifoliaの葉および小枝を乾燥させたクロロホルムおよびエタノール抽出物がHSV-1（strain HF）に対して抗ウイルス活性を有することを確認した。抽出物を感染後に添加した場合，ED50値は0.85μg/ml，SI値は261であった。添加時間の実験では，抽出物はウイルスの侵入と複製を阻害したが，付着は阻害しなかった。また，HSV-1のウイルス粒子に対して直接的な殺傷効果を示した。臨床的に重要な知見は，感染前3時間から感染後8時間の間に抽出物を添加した場合，HSV-1を99%阻害したことである。

Pachecoら45は，36種のチリ産植物の水性およびアルコール性抽出物について，HSV-1（strain F）およびHSV-2（strain 333）に対する抗ウイルス活性を評価した。その結果，Cassia stipulaceae（IC50 = 80 µg/ml）とIllinita sp.（IC50 = 40 µg/ml）の水性アルコール抽出物にHSV-1に対する抗ウイルス活性が認められた。HSV-2に対しては，Aristotelia chilensis（IC50 = 40 µg/ml），Drimys winteri（IC50 = 35-80 µg/ml），Elytropus chilensis（IC50 = 100 µg/ml）の水性アルコール抽出物とLuma apiculata（IC50 = 100 µg/ml）の水性抽出物から抗ウイルス活性が認められた。

Kottらは，アルゼンチン原産の植物の葉および地上部の水抽出物を調製し，HSV-1（strain F）に対する抗ウイルス活性を評価した115。試験した植物は，Polygonum punctatum，Lithraea molleoides，Sebastiania brasiliensis，Myrcianthes cisplatensis，Sebastiania klotzschianaであった。その結果，M. cisplatensisを除くすべての抽出物に抗ウイルス作用が認められた。S. klotzschianaのEC50は39μg/mlで，最も大きなウイルス抑制効果を示した。その他のEC50値は51～169μg/mlであった。非細胞毒性の最大濃度は，P. punctatumで450μg/ml，L. molleoides，S. brasiliensis，S. klotzschianaで250μg/mlであった。

ボリビア原産の植物であるBaccharis genistelloides，Baccharis rubricaulis，Ambrosia arborescens，Phoradendron crassifolium，Rumex obtusifolius，Plantago australis，Satureja bolivianaのエタノール抽出物および水抽出物について，Abadら51がHSV-1に対する抗ウイルス効果を検証した。エタノール抽出物は高い細胞毒性を示し，例えば，B. rubricaulisのエタノール抽出物は5 μg/mlという低濃度で細胞毒性を示した。水性抽出物のみに抗ウイルス作用が認められたが，非細胞毒性の最大濃度は有効濃度範囲の上限であった。HSV-1の抑制作用が認められた水性抽出物は，S. boliviana，B. genistelloides，P. crassifoliumであった。抗ヘルペス作用が認められた濃度は，S. boliviana，B. genistelloides，P. crassifoliumで，それぞれ10〜125μg/ml，25〜50μg/ml，125〜500μg/mlであった。

その後、Abadら52は、南米産の10種類の植物について、抗HSV-1活性を評価した。Baccharis trinervis，Baccharis teindalensis，Eupatorium articulatum，Eupatorium glutinosum，Tagetes pusilla，Neurolaena lobata，Conyza floribunda，Phytolacca bogotensis，Phytolacca rivinoides，Heisteria acuminataの水性およびエタノール抽出物を試験した。50〜200μg/mlの濃度で、B. trinervisの水抽出物は、ウイルスの複製を80〜100%阻害することができた。他の2つの抽出物は，ウイルスの複製を阻害することが認められたが，有効濃度とほぼ同じ濃度で細胞毒性を示した。これらの抽出物は、エタノール性のH. acuminata抽出物と水性のE. articulatum抽出物で、125〜250μg/mlの濃度でウイルス複製を60%以下に抑制した。

Garciaらは，Achyrocline flaccidaの空中部分を水抽出物にして，放射性標識HSV-1（strain F）に対する試験を行った193。この抽出物は，200μg/mlを感染時に適用した場合，ウイルスの吸着を95%以上阻害することが確認されたが，細胞の前処理として適用した場合には阻害効果はなかった。また、放射性同位元素で標識したウイルスを用いた実験では、200μg/mlの抽出物で浸透性が50%低下することが確認された。

Goncalvesら172は，アシクロビル耐性のHSV-1株を用いて，Vitex polygamaの葉および果実の酢酸エチル抽出物の抗ヘルペス活性を評価した。最大非細胞毒性濃度は，葉および果実の抽出物について，それぞれ25μg/mlおよび50μg/mlと決定し，すべての試験に使用した。いずれの抽出物も，細胞を前処理した際にHSV-1を阻害することが確認された。葉の抽出液では73.7%，果実の抽出液では85.2%の抑制効果が認められた。さらに，葉の抽出物は細胞内の活動を60.2%阻害することができたのに対し，果実の抽出物は73.1%のビリオンを阻害することで直接的な殺傷効果を発揮した。どちらの抽出物もHSV-1の宿主細胞への付着を防ぐことはできなかった。このように，葉の抽出物はHSVの感染時に使用するのに適していると考えられるが，果実の抽出物は感染を予防するために使用すると，より大きな効果を発揮する可能性がある。

Lopezらは，コロンビア国内のさまざまな地域で皮膚感染症に伝統的に使用されてきた24種類の植物のメタノール抽出物について，HSV-1を阻害する能力を試験した27 。合計13種類の抽出物がウイルスの細胞質作用を完全に阻害した。これらは，Vismia macrophylla（MIC = 5.5 μg/ml），Symphonia globulifera（MIC = 25 μg/ml），Eschweilera rufifolia（MIC = 8 μg/ml），Byrsonima verbascifolia（MIC = 6. 5 μg/ml（根皮抽出物の場合），MIC = 2.5 μg/ml（葉抽出物の場合），Iryanthera megistophylla（MIC = 10 μg/ml），Virola multinervia（MIC = 11. 5 μg/ml（樹脂抽出物），MIC = 17 μg/ml（樹皮抽出物），Myrteola nummulari（MIC = 10.5 μg/ml），Polygonum punctatum（MIC = 20 μg/ml），Adiantum latifolium（MIC = 11.5 μg/ml），Ampelozizyphus amazonicus（MIC = 22 μg/ml），Duroia hirsuta（MIC = 10.5 μg/ml）であった。これらの抽出物のうち，最も注目すべきはB. verbascifoliaの葉の抽出物で，2.5 μg/mlの低濃度でHSV-1の活性を完全に阻害した。

さらに，Betancur-Galvisら89は，コロンブスのEuphorbia属の薬用植物10種から石油エーテル，ジクロロメタン，エタノール，水の各抽出液を作り，HSV-2に対する抗ヘルペス活性を評価した。評価した種は，E. cestrifolia，E. cotinifolia，E. tirucalli，E. arenaria，E. pulcherrima，E. heterophyla，E. cyatophora，E. graminea，E. cf. cotinifolia，Euphorbia sp.であった。 さらに，E. tirucalliとE. cotinifoliaの新鮮な部分から水-メタノール（20：80）抽出物を作成した。E. tirucalliおよびE. cotinifoliaの葉および茎のヒドロメタノール抽出物（IC50 = 140.2 mg/ml，SI >7.13）に強い抗ウイルス活性が認められ，E. cotinifoliaの茎のエタノール抽出物（IC50 = 104.6 mg/ml，SI >9.56）に中程度の抗ウイルス活性が認められた。E. cotinifolia（IC50 = 75.6 mg/ml、SI = 1.59)E. cestrifolia（IC50 = 160.1 mg/ml、SI = 1.41)E. tirucalli（IC50 = 64.3 mg/ml、SI = 3. 46），E. cotinifoliaの葉のジクロロメタン抽出物（IC50 = 36.8 mg/ml，SI = 4.08）およびE. cestrifoliaの葉のジクロロメタン抽出物（IC50 = 59.8 mg/ml，SI = 2.83）であった。E. tirucalliとE. cotinifoliaのヒドロメタノール抽出物から最大の阻害効果が認められた。注目すべきは、これら2つの抽出物はどの用量で調べても細胞毒性は認められなかったが、その阻害作用はアシクロビルよりも低かったことである（IC50 = 2.8 mg/ml、SI = 31,600）。著者らは，E. tirucalliおよびE. cotinifoliaの抗ウイルス活性は許容範囲内であり，これらの植物は今後の研究の良い候補であると考えている。

MirandaらによるLicania tomentosaの種子の1:1塩化ナトリウム：グリセロール抽出物から、アシクロビル耐性HSV-1に対する有意な阻害作用および殺ウイルス作用が観察された114。ED50値は9μg/ml、SI値は851であった。さらに，この抽出物の最大非細胞毒性濃度を625μg/mlとして実験を行った。抽出物を感染前に37℃で3〜4時間前処理した場合、90%のウイルス抑制効果が認められたが、4℃で前処理した場合は細胞毒性が認められた。アシクロビル耐性のHSV-1に直接抽出物を添加したところ，59%のウイルスが不活化された。ウイルス付着後に抽出物を添加すると92.7%の抑制効果が得られたが，感染2時間後の添加では74.4%の抑制効果しか得られなかった。

Garciaら25は，アルゼンチンで発見されたさまざまな薬用植物から抽出したエッセンシャルオイルの殺ウイルス活性を評価した。Aloysia gratissima（IC50 = 65 ppm、SI = 2.31)32 Artemisia douglasiana（IC50 = 83 ppm、SI = 3. 77),32 Eupatorium patens (IC50 = 125 ppm, SI = 2.35),32 Tessaria absinthioides (IC50 = 105 ppm, SI = 2.50),32 Lepechinia floribunda (IC50 = 20.3 ppm, SI = 3.80),25 Lantana grisebachii (IC50 = 26.1 ppm, SI >19. 16)25 Lantana camara（IC50 = 43.3 ppm、SI = 2.48)25 Eupatorium catarium（IC50 = 47.9 ppm、SI = 10.09)25 Eupatorium arnottianum（IC50 = 52.1 ppm、SI = 7.61)25 and Trixis divaricata（IC50 = 37. 25 L. grisebachiiのエッセンシャルオイルが最も強い殺ウイルス活性を示したことから，著者らはHSV-2（strain G）およびアシクロビル抵抗性HSV-1（strain Field）に対して試験を行った。） その結果，HSV-2に対してはIC50値が44.3ppm，SI値が11.29以上，アシクロビル耐性HSV-1に対してはIC50値が79.7ppm，SI値が6.27以上となり，精油が両ウイルスに対して殺傷効果を発揮することがわかった。

Cellaらは，Trichilia glabraの葉のメタノール抽出物を作成し168，さらにクロロホルムとメタノールの比率を100:0～90:10の範囲で変えて分画した。これらの抽出物は，HSV-1（strain F）に対して用量依存的に殺ウイルス活性を示した。0.25 mg/mlの投与量で，95:5および90:10のクロロホルム-メタノール画分は，ウイルスの力価をそれぞれ2.4 log10および1.5 log10減少させた。さらに，0.27 mg/mlの95:5クロロホルム-メタノール画分，0.35 mg/mlの90:10クロロホルム-メタノール画分，0.5 mg/mlのメタノール抽出物では，HSV力価の33%の低下が認められた。

ブラジル南部に自生する植物から抽出した水性および水性エタノール抽出物の合計51種類について，MontanhaらがHSV-1に対する抗ウイルス活性を試験した31。抽出物はHSV-1株KOSに対して試験し，抗HSV活性を示したものは，続いてHSV-1株ATCC-VR733および29-R/acyclovir耐性に対して試験した。その結果，Ilex brevicuspis（5 mg/ml），Ilex theezans（0.25 mg/ml），Maytenus ilicifolia（1.25 mg/ml）の水抽出物と，Aloysia gratissima（1.25 mg/ml），Baccharis megapotamica（0.0048 mg/ml），M. ilicifolia（0.5 mg/ml）の水抽出物は，それぞれに定められた最大許容濃度において，ウイルスの細胞障害作用を100%阻害した。Baccharis erioclada（0.25 mg/ml），Glechon marifolia（0.625 mg/ml），Glechon spathulata（0.25 mg/ml）の水エタノール抽出物は，それらの最大許容濃度の半分の濃度でウイルスの細胞毒性作用を100%阻害した。B. eriocladaの水抽出物（0.312 mg/ml）およびBaccharis uncinellaのヒドロエタノール抽出物（0.312 mg/ml）は，最大許容濃度の4分の1の濃度でウイルスの細胞病理作用を100%阻害した。また，I. brevicuspis（5 mg/ml），I. theezans（0.25 mg/ml），B. erioclada（0.625 mg/ml），M. ilicifolia（1.25 mg/ml）の水抽出物は，HSV-1株ATCC-VR733の細胞障害作用を完全に抑制した。また，B. erioclada（0.5 mg/ml），M. ilicifolia（0.5 mg/ml），G. marifolia（0.625 mg/ml），G. spathulata（0.25 mg/ml），A. gratissima（1.25 mg/ml）のヒドロエタノール抽出物を用った。最後に，29-R/acyclovir耐性HSV-1株の細胞質作用を完全に阻害した抽出物は，水抽出物のB. erioclada（1.25 mg/ml）と，水抽出物のB. erioclada（0.5 mg/ml），B. uncinella（1.25 mg/ml），G. spathulata（0.25 mg/ml）であった。

さらに，Ruffaらは，アルゼンチン産の15種類の薬用植物について，HSV-1（F株）およびHSV-2（G株）に対する抗ヘルペス活性を評価した85。抽出液はメタノールで調製し，その後，メタノール抽出液を乾燥させて熱水に溶解し，凍結乾燥させて輸液とした。Juglans australisのメタノール抽出物と輸液のみ（methanolic: HSV-1に対してEC50=96.0μg/ml、SI=5.9,輸液。HSV-1に対してEC50 = 65.3 μg/ml，SI = 8.1，HSV-2に対してEC50 = 114.1 μg/ml，SI = 4.3）およびEriobotrya japonicaのメタノール抽出物（HSV-1に対してEC50 = 183.2 μg/ml，SI = 2.4，HSV-2に対してEC50 = 146.1 μg/ml，SI = 3.0）に抗ヘルペス作用が認められた。J. australisの輸液のみが、HSV-1に対して著者らがSI＞8と定義した有効な抗ウイルス活性を示した。

Andrighetti-Frohnerら41は，ブラジルの大西洋熱帯林に生育する6種類の薬用植物を用いて，ジクロロメタン，酢酸エチル，n-ブタノールで抽出した後，水エタノール抽出物を作成した。研究対象とした植物は，Cuphea carthagenensis，Lippia alba，Tillandsia usneoides，Bromelia antiacantha，Araucaria angustifolia，Wilbrandia ebracteataであり，抗ウイルス活性の試験に用いたHSV-1株は，野生型のKOS株と29-R/acyclovir耐性株であった。KOS株に対して最も強い作用を示したのは，C. carthagenensisの酢酸エチル抽出物（EC50=2μg/ml，SI=90）とT. usneoidesの酢酸エチル抽出物（EC50=3μg/ml，SI=65）であった。KOS株に対して活性を示したその他の抽出物は，C. carthagenensisのジクロロメタン抽出物（EC50=4μg/ml，SI=49）およびT. usneoidesのジクロロメタン抽出物（EC50=10μg/ml，SI=18），A. angustifoliaの酢酸エチル抽出物（EC50=35μg/ml，SI=9）およびW. ebracteataの酢酸エチル抽出物（EC50=10μg/ml，SI=9）であった。また，A. angustifolia（EC50=13μg/ml，SI=11），C. carthagenensis（EC50=31μg/ml，SI=12），T. usneoides（EC50=3μg/ml，SI=8），W. ebracteata（EC50=125μg/ml，SI=1）のn-ブタントリック抽出物を用いて検討した。アシクロビル耐性株はW. ebracteataの影響を最も強く受け，酢酸エチル抽出物ではEC50が25μg/ml，SIが10，n-ブタントリック抽出物ではEC50が12μg/ml，SIが10であった。その他，L. albaのn-butanol抽出物（EC50=2μg/ml，SI=8），T. usneoidesのdichloromethane，ethyl acetate，n-butanol抽出物（EC50=26μg/ml，SI=7，EC50=23μg/ml，SI=8，EC50=12μg/ml，SI=2）が，29-R/acyclovir耐性菌に対して活性を示した。

南米の植物8種の抽出物について，MullerらはHSV-1株KOSおよび29-R/acyclovir耐性に対する抗ウイルス活性を評価した108。抽出物は，水，エタノール，40%ヒドロエタノール，メタノールで調製した。HSV-1 KOS株に対して，Ilex paraguariensisの水抽出物（EC50 = 80.0 μg/ml，SI = 15.8），Rubus imperialisのメタノール抽出物（EC50 = 70.0 μg/ml，SI = 19.8）およびLafoensia pacariのメタノール抽出物（EC50 = 60.0 μg/ml，SI = 19.0）は，SI >7と定義される抗ヘルペス活性を示した。さらに，I. paraguariensisの水抽出物（EC50=100.0μg/ml，SI=12.6）には，29-R/acyclovir耐性株に対する抗ヘルペス活性が認められた。 6）とPassiflora edulis（EC50=89.9μg/ml，SI=17.8），R. imperialis（EC50=90.0μg/ml，SI=15.4）とSloanea guianensis（EC50=140.0μg/ml，SI=10.0）のメタノール抽出物で認められた。

I. paraguariensisもLuckemeyerらによって研究された109。植物の葉のヒドロエタノール抽出物を調製し、さらにブタノール、残留水、残留ブタノール、および酢酸エチル画分に分割した。この抽出液および画分について，HSV-1（strain KOS）およびHSV-2（strain 333）に対する抗ヘルペス作用を観察した。その結果，抽出物および残留水性画分を除くすべての画分が両菌株に対して抗ヘルペス作用を示し，酢酸エチル画分で最も強い抑制作用が認められた（HSV-1に対してIC50=6.6μg/ml，SI=188.7，HSV-2に対してIC50=7.1μg/ml，SI=264.7）。さらに，水エタノール抽出物は，HSV-2（IC50=14.1μg/ml，SI=171.3）およびHSV-1（IC50=22.2μg/ml，SI=68.9）に対して強い阻害作用を示した。比較のためにアシクロビルも試験したところ、HSV-1に対してはIC50が0.5μg/ml、SIが2000以上、HSV-2に対してはIC50が1.2μg/ml、SIが833.4以上であった。この研究の他の実験を通じて、著者らは酢酸エチル画分がウイルスの付着と宿主細胞への侵入を防ぎ、ウイルス粒子の横方向への広がりを抑えることができることを示すことができた。

Valadaresら157は，Solanum paniculatumの葉のエタノール抽出物にHSV-1に対する抗ウイルス活性があることを確認した。この抽出物は，EC50が約298μg/ml，SIが1.4であった。比較のため、アシクロビルも試験したところ、EC50は40μg/mlであった。

さらに，Brandaoらは，ブラジルの薬用植物18種の34のエタノール抽出物をHSV-1に対して試験した37。合計30の抽出物が，妥当な用量または理想的な用量で非細胞毒性を示し，そのうち10の抽出物が何らかの抗ヘルペス活性を示すことが分かった。中等度の作用を示した抽出物はArrabidaea formosa（葉：EC50=82.2μg/ml，SI＞6.1，茎：EC50=90.2μg/ml，SI＞5.5），Zeyheria tuberculosa（葉：EC50=81.8μg/ml，SI=2.1）であった。活性が低かったのは、Anemopaegma setilobum（葉。EC50=138.1μg/ml、SI＞1.4;茎。EC50=168.2μg/ml、SI＞3.0)Arrabidaea craterophora（茎：EC50=188.1μg/ml、SI=1.9)A. formosa（果実：EC50=148.5μg/ml、SI＞3.4)Arrabidaea pulchra（葉：EC50=232. 1μg/ml，SI＞2.2），Arrabidaea sceptrum（茎：EC50=375.3μg/ml，SI＞1.3），Stizophyllum perforatum（茎：EC50=338.7μg/ml，SI＞1.5）であった。

Faral-telloら26は，南米の植物24種と南米の藻類4種からエタノール抽出物を作成し，HSV-1（strain F）に対する抗ウイルス活性を試験した。その結果，いずれの藻類もHSV-1に対する抑制作用を示さなかったが，14種類の植物の抽出物がウイルスの抑制作用を示した。これらの植物は，Achyrocline satureioides，Bauhinia candicans，Chenopodium ambrosioides，Limonium brasiliense，Margyricarpus pinnatus，Phyllanthus niruri，Polygonum punctatum，Psidium incanum，Psidium luridum，Schinus molle，Sesbania punicea，Smilax gracilis，Tillandsia aeranthos，Tillandsia usneoidesであった。これらの植物抽出物のEC50値は50～1500μg/mlであり，算出されたSI値が最も高かったのはP. niruri（42.37），P. incanum（14.89），L. brasiliense（4.58）であった。また，これら14種類の抽出物について，それぞれの最大非細胞毒性濃度でHSV-1ウイルスを直接不活化する能力を調べたところ，6種類の抽出物に殺ウイルス活性が認められた（著者らは，ウイルス粒子の90%以上を不活化すると定義している）。これらの抽出物は，C. ambrosioides，L. brasiliense，M. pinnatus，S. gracilis，T. aeranthos，T. usneoidesであった。

Soaresらは，ブラジル産の36種類の海藻について，アシクロビル耐性のHSV-1およびHSV-2に対する抗ヘルペス活性を調べた69。ジクロロメタンとメタノールを1:1の割合で，あるいはジクロロメタンのみで抽出物を調製し，ウイルス感染と同時に最大非細胞毒性濃度を決定してVero細胞に添加した。アシクロビル抵抗性HSV-1に対する強い抗ウイルス活性（ウイルス力価の90%以上の阻害）は，Laurencia dendroideaのジクロロメタンおよびメタノール抽出物（3.1µg/mlで97.5%阻害），Hypnea spinella（200µg/mlで92%阻害），Lobophora variegata（6. 2µg/ml），Stypopodium zonale（50µg/mlで96.8%阻害），Sargassum cymosum（50µg/mlで98.2%阻害），Ulva fasciata（200µg/mlで99.9%阻害），Codium decorticatum（200µg/mlで99.9%阻害），Penicillus capitatusのジクロロメタン抽出物（250µg/mlで93.0%阻害）などが挙げられる。さらに，Chondracanthus acicularisのジクロロメタン抽出物およびメタノール抽出物（100µg/mlで92.4%阻害），Stypopodium zonaleのジクロロメタン抽出物（50µg/mlで95.8%阻害），Penicillus capitatusのジクロロメタン抽出物（250µg/mlで96%阻害）は，アシクロビル耐性HSV-2に対して強い抗ウイルス活性を示した。強い抗HSV活性（CC50 > 200 µg/ml）を示した抽出物では、L. dendroideaの抽出物（CC50 = 48.2 µg/ml）を除き、細胞毒性は認められなかった。

Moura-Costaら60は，6種類のブラジル産植物の水性および水性アルコール（50%および70%）の抽出物をHSV-1に対して評価した。研究対象となった植物は，Campomanesia eugenioides，Luehea paniculata，Ocimum gratissimum，Cordia americana，Schinus terebinthifolius，Zanthoxylum rhoifoliumであった。C. americanaとZ. rhoifoliumの樹皮の水抽出物を除くすべての抽出物が，抗HSV-1活性を示した。水性抽出物（EC50は1.4-26μg/ml、SIは6.9-21.3）に比べ、アルコール抽出物（EC50は0.6-20μg/ml、SIは13-62）の方がより高い抗ウイルス効果が認められた。SI値が最も高かったのは，C. eugenioidesの70%アルコール抽出物（52）およびC. americanaの樹皮（55）と，O. gratissimum，190 C. americanaの葉，82 S. terebinthifolius（>48）およびZ. rhoifoliumの葉の50%アルコール抽出物（146）であった。

S. terebinthifoliaは，Nocchiら156により，HSV-1 KOS株，29-R/acyclovir耐性株，および臨床株に対する抗ヘルペス活性が試験された。この植物の粗いヒドロエタノール抽出物は，KOS株に対してEC50およびSI値がそれぞれ10.20μg/mlおよび>49，29-R株に対して13.9μg/mlおよび>35.9，臨床株に対して14.2μg/mlおよび>34.9を示した。さらに試験を進めると、抽出物は、ウイルスの吸着および感染の段階で抽出物を添加すると、ウイルスの付着および浸透を阻害することで抗ウイルス効果を発揮した。しかし、抽出物でウイルスを前処理した場合、ウイルスの感染性にはほとんど影響が見られなかった。興味深いことに、この抽出物は、アシクロビルとの併用試験において、アシクロビルとの相乗効果を示した。

さらに，Petronilhoら64は，Cecropia glazioviiの葉のヒドロエタノール抽出物が，HSV-1 strain 29-R/acyclovir resistantのウイルス複製を阻害することを見出した。この抽出物は，EC50が40μg/ml，SIが50であったことから，強いウイルス抑制能力があることが示唆された。

Silva Juniorら96は，Gallesia gorazemaの根からのジクロロメタン抽出物が，最大非細胞毒性濃度100μg/mlでHSV-1に対して93%のウイルス抑制効果を示したが，HSV-2に対しては効果がなかったことを明らかにした。Gallesia gorazemaの葉からのエタノール抽出物も試験したが，HSV-1およびHSV-2に対して抗ヘルペス活性を示すことはできなかった。

Trichilia catiguaの樹皮の粗抽出物は，Espadaらによって7：3のアセトン：水を用いて調製され，さらに水または酢酸エチルで分割された。167 抗ウイルス活性，殺ウイルス活性，およびHSV-1のウイルス吸着阻害を調べた。粗抽出物（IC50=4.59μg/ml，SI＞87）は，水性画分（IC50=12.5μg/ml，SI＞32）や酢酸エチル画分（IC50=11.1μg/ml，SI＞35.97）よりも強い抗ウイルス活性を示した。添加時期の実験により、抽出物および画分は感染時に細胞に添加すると最も効果的であることがわかった。酢酸エチル画分では，100μg/mlで96.45%のウイルス吸着抑制効果が認められた。さらに，粗抽出物，水性画分，酢酸エチル画分のそれぞれ100μg/ml，50μg/ml，25μg/mlでは，100%のウイルス直接阻害効果が得られた。また、粗抽出物はアシクロビルと拮抗し、2つの画分は相乗的に作用することがわかった。

Boffら160は，Strychnos pseudoquinaの茎皮から抽出した酢酸エチルの抗ウイルス作用を，HSV-2株333とHSV-1株KOSおよび29-R/アシクロビル耐性に対して評価した。抽出物とウイルスを同時に細胞に投与したところ，HSV-1 KOS株ではIC50値が5.29μg/ml，SI値が10.16，HSV-2株ではIC50値が6.55μg/ml，SI値が8.21であった。また，感染後に抽出物を投与したところ，HSV-1 KOS株ではIC50値が22.2 μg/ml，SI値が3.84，HSV-1 29-R株ではIC50値が17.62 μg/ml，SI値が3.05，HSV-2株ではIC50値が8.64 μg/ml，SI値が6.22であった。また，添加時間の実験により，抽出物はウイルス吸着時（HSV-1 KOS株ではIC50 = 1.96 μg/ml，SI = 27.43，HSV-2株ではIC50 = 6.02 μg/ml，SI = 8.92），吸着後（IC50 = 3. 12 μg/ml，SI = 17.23（HSV-1）;IC50 = 3.15 μg/ml，SI = 17.07（HSV-2）），および浸透性（IC50 = 7.33 μg/ml，SI = 7.34（HSV-1）;IC50 = 4.47 μg/ml，SI = 12.03（HSV-2））を示した。また，抽出物を細胞に前処理することにより，HSV-2の複製を阻害した（IC50 = 7.56 μg/ml，SI = 7.11）が，HSV-1の複製には影響を及ぼさなかった。

HSV-2（strain 333）に対するEquisetum giganteum，Croton lechleri，Uncaria tomentosa，Copaifera reticulataの水性抽出物の抗ウイルス活性をChurquiらが調査した73。E. giganteum，U. tomentosa，C. reticulataの抽出物を100μg/mlの濃度で，C. lechleriの抽出物を30μg/mlの濃度で投与したところ，ウイルスのプラークは100%減少した。E. giganteum，U. tomentosa，C. reticulata，C. lechleriの各抽出物のIC50値はそれぞれ18μg/ml，28μg/ml，50μg/ml，10μg/mlであり，SI値はそれぞれ＞55.56，＞35.71，10，＞100と算出された。いずれの抽出物も殺ウイルス効果を示し，ウイルスの吸着を防ぐことができたが，ウイルスの複製を阻害したり，細胞を前処理して感染を防いだりする効果はなかった。

Baccharis anomalaの水性抽出物は，Venturiら50により，HSV-1のATCC-VR733株および29-R/acyclovir耐性株に対する効果が検討された。その結果，水抽出物のEC50およびSI値は，野生型株に対して0.0088 mg/mlおよび49.14，29-R株に対して0.065 mg/mlおよび66.53であった。また，抽出物を細胞に前処理してもHSVの感染は阻害されなかったことから，抽出物はウイルスの付着を阻害する作用はないと考えられた。

Tanacetum partheniumの空中部分を使用してヒドロエタノール抽出物を作成し，Benassi-ZanquetaらがVero細胞およびマウス線維芽細胞（L-929）におけるHSV-1（strain KOS）に対する試験を行った162。この抽出物はL-929細胞の創傷治癒を促進し，コントロールと比較して48時間で5倍，72時間で3倍の増加を示した。さらに、この抽出物は、Vero細胞におけるウイルスの複製を阻害し、EC50値は3.1μg/ml、SI値は18.1を示した。

最近では，Fahmyら86が，Erythrina speciosaの葉のメタノール抽出物を酢酸エチルでさらに分割したものがHSV-1を阻害することを発見し，EC50およびSI値がそれぞれ94μg/mlおよび2.65であることを示した。

複数の地域で実施

Macrocystidia cucumisの菌糸体の抗ウイルス活性は，SaboulardらによってBHK-21細胞のHSV-1（strain F）に対して評価された117。この菌糸体を培養液で培養したところ，抗ウイルス活性，具体的には21日間の培養後にHSV-1抗原の発現が減少することが確認された。この活性は，培養液を64倍まで希釈しても維持され，細胞毒性も認められなかった。著者らは、この培養液から活性化合物を分離し、それが新規のヌクレオシドアナログであることを突き止めた。この化合物のHSV-1に対するMICは0.72 µg/mlであった。

Panら111は，別のキノコであるInonotus obliquus（チャーガ）の水性抽出物のHSV-1に対する抗ウイルス活性を評価した。この抽出物は，IC50値が12.29 µg/ml，SI値が80以上であり，主にウイルスの侵入を防ぐことで作用することがわかった。

さらに，Krupodorovaらは，RK-13細胞におけるHSV-2（strain BH）に対する各種キノコの抗ウイルス活性を評価した47。キノコはバイオマスとして培養し，菌糸体は0.9%塩化ナトリウム水溶液を用いて水性抽出物とした。HSV-2の複製を阻害したのは，Fomes fomentarius（EC50 = 0.62 mg/ml，SI = 40.32），Pleurotus ostreatus（EC50 = 0.155 mg/ml，SI = 80.64），Auriporia aurea（EC50 = 0.155 mg/ml，SI = 161.29），Trametes versicolor（EC50 = 0.077 mg/ml，SI = 324.67）の4種であった。

Chiangら144,143は、BCC-1/KMC細胞のHSV-1(strain KOS)およびHSV-2(strain 196)に対して、Plantago majorおよびPlantago asiaticaの水性抽出物を試験した。P. asiatica（EC50 = 1318 μg/ml，SI = 46.5）143およびP. major（EC50 = 843 μg/ml，SI = 2.2）144,143は，HSV-2に対して抗ウイルス活性を示したが，HSV-1に対してはいずれの抽出物も活性を示さなかった。著者らは，観察された抗ウイルス活性は弱いものであったとしており，P. majorとP. asiaticaは今後のHSV研究の候補としては不十分であると考えられる。

鈴谷らは，Sambucus nigra（セイヨウニワトコ）の抽出物について，HSV-1（strain VR-3），アシクロビル抵抗性HSV-1（strain VRTK-），HSV-2（strain UW-268）に対する抗ヘルペス活性を評価した154 。この抽出物の抗ウイルス効果は，クロカリンと呼ばれるRibes nigrumの抽出物と比較された。S. nigraの抽出物は、アシクロビル耐性HSV-1に対してSI 2.14を示したが、他の2株に対してはSI <1であった。KurokarinのSI値は、野生型HSV-1に対して1.19,アシクロビル抵抗性HSV-1に対して2.19,HSV-2に対して1.72と判定された。いずれの抽出物も，野生型HSV-1に比べてアシクロビル耐性HSV-1に対してより強力なウイルス抑制効果を示した。

Ozcelikら142は，Pistacia veraからn-hexaneと異なる植物部位（種子，核，葉，茎，枝，貝殻の皮）を用いて15種類の親油性抽出物を調製し，HSV（種類は特定せず）に対する抗ウイルス効果を評価した。15種類の抽出物のうち6種類でウイルスの細胞質効果の抑制が認められた。最も効果が高かったのは，植物の新鮮な穀粒，木質化した殻の皮，未熟な種子から調製した抽出物で，それぞれMIC＜0.00006 μg/mlであった。

さらに，Eugenia caryophyllusの花蕾をTragoolpuaら88がエタノールで抽出し，HSV-1（strain Fおよび5つの分離株）およびHSV-2（strain Gおよび5つの分離株）に対して評価した。抽出物は，HSV-1 F株（ED50 = 72.8 μg/ml，SI = 1.55）およびHSV-2 G株（ED50 = 74.4 μg/ml，SI = 1.52）に対して，同様の抗ウイルス活性を示した。また，同じく活性を示したHSV-1株およびHSV-2株は，同様の抗ウイルス効果を示した（それぞれ，ED50=62.0～73.1 μg/ml，SI=1.54～1.82，ED50=42.6～52.9 μg/ml，SI=2.13～2.65）。HSV-1 strain FおよびHSV-2 strain Gは，78.1 μg/mlの濃度の抽出物を3時間曝露すると，いずれも完全に不活性化された。さらに，感染後30時間後に抽出物を投与すると，HSV-1およびHSV-1分離株の複製を10～27%，HSV-2およびHSV-2分離株の複製を16～35%抑制することができた。

Onozatoら163は，Tanacetum vulgareの水性および酢酸エチル抽出物がHSV-1に対して抗ヘルペス活性を示すことを確認した。酢酸エチル抽出物（EC50=40μg/ml，SI=3.9）は，水抽出物（EC50=55μg/ml，SI=2.2）よりもわずかに強力な作用を示した。さらに、単離された化合物を用いた実験が行われ、著者らは、T. vulgareがHSV-1の複製を阻害することで抗ウイルス活性を示す可能性が高いと結論づけた。

164 植物の地上部と根茎をメタノールで抽出し，地上部の抽出液を石油エーテル，クロロホルム，酢酸エチル，ブタノール，水で分画した。クロロホルム画分には細胞毒性が認められたため，抗ウイルス能の評価は行わなかった。各抽出物/フラクションをHSV-1およびHSV-2に対して調べた。最大の抗ウイルス効果が認められたのは，石油エーテル（HSV-1に対するEC50 = 69.9 μg/ml，SI = 3.37;HSV-2に対するEC50 = 61.16 μg/ml，SI = 3.85）と酢酸エチル（EC50 = 95.7 μg/ml，SI = 2. 03 for HSV-1; EC50 = 59.4 μg/ml and SI = 3.27 for HSV-2)フラクションと，根茎のメタノール抽出物(EC50 = 295.8 μg/ml and SI = 3.68 for HSV-1; EC50 = 500.0 μg/ml and SI = 2.18 for HSV-2)を用いた。また，初感染から6時間後までに石油エーテルまたは酢酸エチル抽出物を添加すると，強い抗ウイルス効果が認められた。根茎のメタノール抽出物は，初感染後2時間までの添加でウイルス抑制効果を示した。さらに、酢酸エチル抽出物および石油エーテル抽出物は、50μg/mlの濃度で添加した場合、80%以上のウイルス吸着を抑制することができた。

Yarmolinskyら93は，Ficus benjamina（葉，果実，茎）およびLilium candidum（葉，花びら，球根）のエタノール抽出物を用いて，HSV-1（strain ATCC-VR-735）およびHSV-2に対する抗ウイルス効果を調べた。両植物の葉の抽出物は，両ウイルスに対して強いウイルス抑制効果を示したが，他の抽出物は有意な効果を示さなかった。最も顕著な効果は，抽出物を感染後の細胞に添加するのではなく，ウイルスと同時に添加した場合に認められた。F. benjaminaの葉の抽出物（HSV-1に対してSI = 980,HSV-2に対してSI ∼800）は、両ウイルスに対してアシクロビル（HSV-1に対してSI ∼700,HSV-2に対してSI ∼300）よりも大きなSIを示し、L. candidumの葉の抽出物（HSV-1に対してSI = 87.5,HSV-2に対してSI = 35）よりも有意に大きなSIを示した。また，いずれの抽出物もアシクロビルとの相乗効果が認められた。

Jaeger Greerらは，合計31種類の薬用植物をアセトンとメタノールで抽出し，各抽出物をHSV-1（McIntyre株）およびHSV-2（333株）に対して試験した46。8種類の植物から抽出したエキスは，0.025～0.2 mg/mlの濃度でプラーク形成を10～98%阻害した。これらの抽出物は，Atractylis macrophylla，Clematis cirrhosa，Gnaphalium chilense，Hymenoclea salsola，Kalanchoe pinnata，Lithospermum officinale，Psilostrophe cooperi，Tetraclinis articulataのアセトン抽出物と，H. salsolaとK. pinnataのメタノール抽出物であった。K. pinnataのアセトン抽出物は，0.2 mg/mlの濃度でHSV-1とHSV-2をそれぞれ95%と98%阻害し，最も安全な抗ウイルス効果を示したが，この濃度では細胞毒性はなかった。その後の実験で、K. pinnataのアセトン抽出物は、HSV-1とHSV-2の両方に対してEC50が0.025 mg/ml、SIが50であった。それほど強力ではないが，K. pinnataのメタノール抽出物は，HSV-1に対してEC50が0.05 mg/ml，SIが19であり，HSV-2に対してEC50が0.2 mg/ml，SIが4.75であった。また，HSV-2に対しては，A. macrophyllaのアセトン抽出物が特筆すべきSIを示した（EC50 = 0.05 mg/ml，SI = 5）。

さらに，Danaherら152は，Rubus eubatusの実のエタノール抽出物が直接的な殺傷効果を発揮し，口腔上皮細胞（OKF6）におけるHSV-1（strain 17+）のウイルス吸着および複製を防止することを見出した。具体的には，56μg/mlの抽出物で，ウイルスの収量を99%減少させることができた。また、感染後1時間後に抽出物を添加した場合、ウイルス収量を大幅に減少させるには280μg/mlの濃度が必要であった。さらに、この抽出物は高濃度でも細胞毒性は認められなかった。

Diasらは，Arctium lappa果実のヒドロエタノール抽出物がHSV-1（strain ATCC-VR733）に対して抗ウイルス効果を示すことを明らかにした42。試験したすべての濃度の抽出物（3.125～400μg/ml）は細胞毒性を示さず，抽出物はウイルス量を用量依存的に減少させた。400μg/mlでは、A. lappaはウイルス感染による細胞損傷を防ぎ、50μg/mlのアシクロビルと同等の、しかしわずかに優れた抗ウイルス能力を示した。

Peganum harmalaのさまざまな植物体を用いて，溶媒（ヘキサン，ジクロロメタン，酢酸エチル，メタノール，エタノール）を組み合わせた抽出物を作成し，Benzekriら135がHSV-2に対する抗ウイルス活性を評価した。その結果，種子抽出物のみがウイルス抑制効果を示した（IC50 = 161 μg/ml，SI = 13.19）．また，添加時間の実験では，種子抽出物が直接的な殺ウイルス活性（IC50=49μg/ml，SI=43.46）を示し，ウイルスの吸着と溶解を妨害したが，前処理した細胞をウイルス感染から保護することはできなかった。

Donalisioら169は，メタノール（EC50=4.71μg/ml，SI=30.6），水（EC50=10.2μg/ml，SI=18.6），クロロホルム（EC50=12.3μg/ml，SI=15.4）で調製したVachellia niloticaの樹皮抽出物がHSV-2（strain ATCC-VR540）に対して抗ウイルス活性を示した。また、アシクロビルについても試験を行い、EC50値は3.17μg/ml、SI値は>468を示した。アシクロビル耐性のHSV-2株に対しては，メタノール抽出物は抗ウイルス活性を示し（EC50=6.71μg/ml，SI=21.5），アシクロビルとは異なる作用機序を持つことが示唆された。さらに，メタノール抽出物は，感染時に添加するとウイルス量を減少させたが，感染後に添加するとウイルス量を軽度にしか減少させないことが確認された。また，メタノール抽出物は，前処理した細胞の感染を防ぐことはできなかった。

最後に，Sharifi-Radら170は，Veronica persicaのエタノール抽出物について，HSV-1およびHSV-2に対する抗ウイルス効果を検証した。この抽出物は，感染後に添加すると，用量依存的にウイルス量を減少させることができた。SIは，HSV-1に対して65，HSV-2に対して45であった。エタノール抽出物をさらに0%，20%，40%，60%，80%，100%のメタノールで分画した。最も顕著な抗ウイルス効果は80%メタノール画分で観察され（HSV-1に対してIC50=0.62μg/ml，SI=451.6，HSV-2に対してIC50=0.73μg/ml，SI=383.5），他のすべての画分ではSI＜4であった。80%メタノール画分で達成されたSI値は，アシクロビルで観察されたSI値（HSV-1に対してSI=320，HSV-2に対してSI=300）よりも大きいことを認めるべきである。さらに、添加時間の実験では、接種時と感染後に80%メタノール画分で細胞を処理した場合に、最大のウイルス抑制効果が得られることがわかった。感染時または感染後に単独で処理した場合は効果が弱かった。さらに、80%メタノール画分は、アシクロビルとの相乗的な抗ウイルス効果を示した。

シングルハーブ 生体内試験

Dimitrovaら120は、ウサギのHSV-1 (strain DA)感染に対するMelissa officinalisの4つの抽出物の抗ウイルス効果を調査した。抽出物は、50%エチルアルコール、50%エタノール抽出物、酢酸エチル、または水で調製した。ウサギの目にHSV-1を感染させ、1時間間隔で1日8回または9回、4種類の抽出物のうち1種類を投与した。それぞれのウサギから毎日7日間、涙の分泌物を採取して分析した。いずれの結果指標においても、処理したウサギとコントロールのウサギの間に差は認められなかった。著者らは、M. officinalis抽出物の抗ウイルス効果を生体内試験で実証することはできなかった。

HSV-1（strain 7401 H）に感染した雌のBALB/cマウスの病変の発生を遅らせ，生存期間を延長する能力について，Kurokawaら33,98,99が3つの研究でアジアのさまざまな植物の水性抽出物を試験した。これらの抽出物の多くは，著者らによって，単独またはアシクロビルとの併用により，試験管内試験でHSV-1に対する抗ウイルス作用を示すことがすでに確認されている。最初の研究では，Kurokawaら33がマウスにHSV-1を切開接種し，植物水抽出物を0.25 ml/マウスの容量で1～10 mgの用量で，接種8時間前に1回，接種後10日間にわたって1日3回経口投与した。その結果，Alpinia officinarum，Caesalpinia sappan，Geum japonicum，Paeonia suffruticosa，Phellodendron amurense，Polygala tenufolia，Punica granatum，Rhus javanica，Syzygium aromaticum，Terminalia arjuna，Terminalia chebulaの各抽出物は，ヘルペス病変の発生および進行を有意に遅延させた。平均生存期間を延長したのはPhellodendron amurenseだけであった。

2 つ目の研究では、Kurokawa ら 98 が G. japonicum、R. javanica、S. aromaticum、T. chebula の 4 種類の水性抽出物の抗ウイルス活性を、それぞれアシクロビルと組み合わせて試験した。抽出物は250mg/kg、アシクロビルは2.5mg/kgを投与した。G. japonicum、S. aromaticum、T. chebulaとアシクロビルを併用することにより、アシクロビルまたは抽出物の単独投与と比較して、ヘルペス病変の発生・進展および平均生存期間を有意に遅延させることができた。R. javanicaとアシクロビルの併用は、アシクロビルまたは抽出物単独と比較して、有意な抗ウイルス効果を示さなかった。また、試験したいずれの組み合わせにおいても、有意な毒性は認められなかった。さらに、4つの抽出物とアシクロビルを用いて、マウスの皮膚と脳におけるウイルス収量を調べた。抽出物は、皮膚よりも脳で2.5～20倍の抗ウイルス活性を示した。一方、アシクロビルは、脳よりも皮膚でより強い抗HSV作用を引き起こすことが確認された。また、アシクロビルと各抽出物の併用は、アシクロビルや抽出物の単独よりも強い抗ウイルス作用を示し、その作用は皮膚よりも脳で強かった。

3つ目の研究として，Kurokawaら99は，4カ月前にウイルスに感染し，紫外線を照射されたBALB/cマウスを対象に，G. japonicum，R. javanica，S. aromaticum，T. chebulaの熱水抽出物のHSV-1感染の再発予防効果を検証した。各抽出物，あるいは対照として水を，750mg/kg/dayの総量で1日3回，10日間にわたってマウスに経口投与した。紫外線照射は6日目に開始した。抽出物は，再発の発生率を低下させ，小水疱の重症度を低下させ，病変が発生した場合にはその期間を短縮させることが示された。また，予防的治療により，マウスの三叉神経節や触角でウイルスDNAを検出する能力も低下した。最も強い予防効果は、S. aromaticumの抽出物を投与したマウスで観察された。

また，中野ら151は，R. javanicaの抗ウイルス作用と，モルモットの再発性HSV-2（strain Ito-1262）性器ヘルペスに対する予防効果をクロスオーバー試験で検討した。まず，雌のモルモットにHSV-2を膣内に感染させ，病変が治癒するまで1.5カ月間観察した。一次感染が緩和された後、モルモットにR. javanicaの水性抽出物または水を2カ月間投与した。R. javanicaは、平均625mg/kg/dayで飲料水から投与した。2ヵ月後、小水疱の数、治癒までの時間、病変の重症度に顕著な減少が見られた。二次感染が解消された後、クロスオーバーデザインの第2部が実施された。プラセボを投与されたモルモットには，R. javanicaを2〜3カ月間投与し，R. javanicaを投与されたことのあるモルモットには，水またはT. chebulaの新しい抽出物を同じ期間投与した。いずれの抽出物も平均625mg/kg/日で投与した。R. javanicaを投与した後に水を投与したモルモットでは，抽出物の投与を中止しても直ちに感染が生じることはなかった。しかし、R. javanicaを投与することで、病変の数、重症度、有病率が減少した。著者らは、クロスオーバー後も同様の結果が得られたことから、R. javanicaはHSV-2の再発感染を予防的に軽減する可能性があるとしている。

さらに，Nawawiら92は，7種類のインドネシア産薬用植物のメタノール抽出物の抗ヘルペス効果をBALB/cマウスで検討した。対象とした植物は，Eurycoma longifoli，Filicium decipiens，Garcinia mangostana，Melaleuca leucadendron，Nephelium lappaceum，Punica granatum，Toona sureniであった。抽出物は2%ジメチルスルホキシドに溶解し，HSV-1（strain 7401 H）接種の8時間前と接種後に1日3回，マウスに経口投与した。その結果，すべての抽出物が局所における小水疱の出現を有意に遅らせることができたが，M. leucadendronとN. lappaceumのみが，対照と比較して，軽度の帯状病変への進展を抑え，死亡率を低下させることができた。特に、N. lappaceumは軽度の帯状病変の進展を完全に抑制し、アシクロビルと同等の抗ヘルペス活性を示した唯一の抽出物であった（比較として0.1 mg/マウスを投与）。著者らは、N. lappaceumはヒトにおける抗HSV-1治療薬として使用できる可能性があると結論づけている。

その後のNawawiらの研究159では、Stephania cepharanthaの根の塊茎のメタノール抽出物を用いて、BALB/cマウスのHSV-1（strain 7401 H）感染を撃退する効果を調べた。マウスにHSV-1を自然感染させた後、抽出物を125または250mg/kg体重で経口投与した。抽出物は小胞の数と発生を減少させ、マウスの生存時間を増加させた。

Lipipunら28は，雌のBALB/cマウスを用いて，Aglaia odorata，Moringa oleifera，Ventilago denticulata，Cerbera odollam，Willughbeia edulisの水，エタノール，またはクロロホルム抽出物の抗ヘルペス作用を評価した。マウスを剃毛し，野生型HSV-1（strain 7401 H）を皮膚に感染させた後，抽出物を感染の8時間前に250 mg/kg，その後8時間ごとに5日間経口投与した。その結果，A. odorata，M. oleifera，V. denticulataを投与したマウスでは，皮膚病変の大きさと発生が有意に減少した。次に，新しい雌のBALB/cマウスにウイルスを感染させ，アシクロビル5mg/kgまたはA. odorata，M. oleifera，V. denticulataのいずれか250mg/kgを8時間ごとに2週間投与した。3種の植物抽出物はいずれも局所における小水疱の発生を有意に抑制したが，M. oleiferaのみがマウスの死亡率を低下させ，生存期間を延長させた。A. odorata，M. oleifera，V. denticulataの抗ウイルス活性は，アシクロビルと同等であった。

さらに，Parkら81は，Symphyocladia latiusculaのメタノール抽出物が，雌のBALB/cマウスにおけるHSV-1感染の出現を有意に遅らせ，さらに進行を抑えることを見出した。マウスに野生型HSV-1（strain 7401 H）を接種し，その4時間前にSymphyocladia latiusculaの抽出物を0.5 mg/mouseの用量で経口投与し，接種後6～10日間，1日3回投与した。抽出物は、対照と比較して、局所小胞の出現および軽度の帯状病変へのさらなる進行を有意に遅延させた。生存時間はコントロールに比べて抽出物で増加したが、死亡率は両グループとも100%であった。さらに、この抽出物を投与したマウスの皮膚および脳におけるウイルス収量を、接種後3日および6日目に評価した。その結果、接種後3日目と6日目のいずれにおいても、抽出物は皮膚におけるウイルス収量を有意に減少させたが、脳におけるウイルス収量は減少しなかった。

野生型HSV-1（strain 7401 H），野生型HSV-2（strain Ito-1262），またはアシクロビル抵抗性の7401 H HSV-1に感染したBALB/cマウスにおけるCarissa edulis抽出物の治療効果について，Toloらが調査した62。感染後のマウスに，250 mg/kgの抽出物を1日3回，1週間にわたって投与した。野生型HSV-1感染マウスとアシクロビル耐性HSV-1感染マウスのいずれにおいても、感染の開始が2日間有意に遅延した。野生型HSV-2マウスの感染開始の遅延は、コントロールとの間に有意な差はなかった。注目すべきは、野生型HSV-1感染マウスにおける感染開始の遅延は、アシクロビルによる治療で観察された遅延と同様であったことである。さらに，ハーブエキスを投与した野生型HSV-1感染マウスでは，コントロールと比較して，生存期間の延長と死亡率の低下が認められた。

Lobelia chinensisのメタノール抽出物は，Kuoらによって，BALB/cマウスのHSV-1感染に対する抗ウイルス効果が示された116。この抽出物は，ウイルスのDNA合成を阻害することによって，試験管内試験で抗HSV-1活性を示すことが著者らによって既に発見されていた。マウスにHSV-1（strain KOS）を接種し，抽出物20 mg/kg，50 mg/kgまたはアシクロビル60 mg/kgを1日3回，7日間経口投与した。抽出物20 mg/kgを投与したマウスとコントロールでは，病変の発生に差は認められなかった。しかし、50mg/kgの抽出物またはアシクロビルを投与したマウスでは、病変が完全に消失したことから、両者とも病変形成の防止に有効であると考えられた。さらに実験の結果、L. chinensisはマウスのHSV-1の複製を阻害することが明らかになった。これは、ウイルスのDNAの発現を減少させることによるものと考えられる。また、この抽出物を投与したマウスの肝臓や腎臓には、毒性作用は認められなかった。

Kaushikら110は，Indigofera heteranthaのヒドロメタノール抽出物を用いて，BALB/cマウスのHSV-2感染に対する治療効果を検証した。著者らは以前，この抽出物が試験管内試験においてHSV-2の付着，吸着，および宿主細胞への侵入を阻害することで抗ウイルス活性を示すことを発見していた。この抽出物をクリーム状にして，マウスの生殖器領域に局所適用した。マウスにHSV-2（G株）を膣内に接種し，感染後30分目から1日3回，375，750，1500mg/kgのクリームを5日間投与した。クリーム375および1500mg/kgを投与した結果，マウスの生存率は100%であり，750mg/kgを投与した結果，生存率は87.5%であった。また，病変形成，臨床症状，膣外病変への影響については，1500mg/kgの処理でのみ100%の減少が認められた。さらに、抽出クリームの予防効果を検証する実験を行った。感染前2時間および4時間に125mg/kgおよび500mg/kgを投与したところ，100%の生存率と病変スコアの有意な減少が認められた。著者らは、I. heteranthaには性器ヘルペス感染の治療と予防の両方の可能性があると結論づけている。

Nocchiら156は、雌のBALB/cマウスを用いて、Schinus terebinthifoliaの粗製ハイドロエタノリック抽出物の抗HSV活性を調査した。この抽出物は，ウイルスの付着と侵入を阻害することにより，試験管内試験でHSV-1に対して抗ウイルス作用を示すことが著者らによって以前に確認されている。マウスにHSV-1（strain KOS）を感染させ、無処置、2%粗抽出物、5%粗抽出物、またはアシクロビルクリームを1日5回、10日間投与した。その結果、粗抽出物を投与したマウスは、無投与のマウスに比べて病変の進行が遅く、治癒も早かった。さらに、粗抽出物を投与したマウスとアシクロビルを投与したマウスの間には、統計的に有意な差はなかったと報告されている。また、ネズミの骨髄において、粗抽出物による遺伝毒性がないことも確認されていることも重要だ。

Churquiら73は，Equisetum giganteum，Croton lechleri，Uncaria tomentosa，およびCopaifera reticulataのエタノール抽出物について，C57bl/6雌マウスのHSV-2感染に対する効果を調べた。これらの抽出物は，試験管内試験においてHSV-2（strain 333）に対してウイルスの吸着を阻害することで抗ウイルス作用を示すことが著者らによって確認されていた。また、各抽出物をウイルスと同時にマウスに投与したところ、4つの抽出物すべてがウイルスの阻害を介してHSV感染を防ぐことに成功した。

最近では，Benassi-Zanquetaら162が，Tanacetum partheniumの水性抽出物をBALB/cマウスに経口投与および局所投与し，抗HSV-1活性を調べた。この抽出物は，著者らによって試験管内試験でHSV-1（strain KOS）に対する抗ウイルス作用を示すことが確認されている。経口投与は1日1回とし、マウスには無投与、対照投与、アシクロビル10mg/kg体重、水抽出物4mg/kg体重、水抽出物8mg/kg体重のいずれかを投与した。外用投与は1日4回行い、マウスには無投与、対照投与、5%アシクロビル、2.5%水酸化ナトリウム抽出物、5%水酸化ナトリウム抽出物のいずれかを投与した。両腕とも10日間実施した。ハイドロエタノール抽出物は、遺伝毒性も刺激性もないと判断された。抽出物またはアシクロビルによる経口および局所治療は同様の結果が得られたが，HSV病変の改善は不活性治療に比べて軽度であった。

in vitroでのハーブの組み合わせ

Serkedjievaら174は，Sambucus nigra 100g，Hypericum perforatum 70g，Saponaria officinalis 40gから水性抽出物を調製し，HSV-1（McIntyre株）に対するハーブコンビネーションの抗ウイルス効果を調べた。ヒト胎児肺線維芽細胞（MRC-5）を用いて抽出物の細胞毒性を評価した結果，最大許容濃度は250μg/mlと決定された。200μg/mlの濃度では，抽出物は0.01/mlのウイルス量に対して殺ウイルス効果を示したが，ウイルスを不活化する能力は0.1/mlのウイルス量でしか認められなかった。さらに，MRC-5およびウサギ腎臓（RK-13）細胞にHSV-1を感染させ，抽出物またはコントロールと24時間インキュベートした。MRC-5細胞では250ug/mlの濃度の抽出物を、RK-13細胞では100,150,200ug/mlの濃度の抽出物を試験した。MRC-5細胞とRK-13細胞では、対照と治療のウイルス力価の間に、それぞれ2.4 logの差と1-3 logの差があった。

Chengら178,179は、2つの研究で、2つの中国伝統薬の処方の抗ヘルペス活性を調査した。最初の研究では，Chengら178は，Artemisia capillaries 108g，Gardenia jasminoids 36g，Rheum officinale 36gからなるYin Chen Hao Tangの水性抽出物を調製した。この抽出物をHSV-1（KOS株）およびHSV-2（196株およびG株）に対して試験したところ，両ウイルスを異なる程度に阻害することがわかった。HSV-1に対するIC50値は145.5～150.1μg/ml，SI値は5.7～6.0であった。抗ウイルス活性はHSV-2株に対してより強力で、IC50値は19.6～29.4μg/ml、SI値は28.9～43.4であった。添加時間の実験では，HSV-2に対する抽出物の抗ウイルス作用は，ウイルスと同時に細胞に添加した場合，あるいは感染後2時間後に添加して48時間存在を維持した場合にのみ認められた。また、HSV-2のウイルスを抽出物で前処理すると、ウイルスの感染性が阻害されることが示され、この不活性化は不可逆的であることが確認された。

また，Chengら179は，以下の10種類の漢方薬とその重量からなる龍胆瀉肝湯の水性エキスを作成した。この漢方薬は，次の10種類の漢方薬と重さから構成されている：Alisma plantago-aquatica 32g，Akebia quinata 16g，Angelica sinensis 16g，Bupleurum chinense 32g，Gardenia jasminoides 16g，Gentiana scabra 32g，Glycyrrhiza uralensis 16g，Plantago asiatica 16g，Rehmannia glutinosa 16g，Scutellaria baicalensis 16g。抽出物は，HSV-1（KOS株）とHSV-2（196株）の両方を用量依存的に阻害することが示されたが，HSV-1は抽出物に対してより感受性が高かった。その結果，HSV-1に対するIC50値は257.5μg/ml，SI値は15.8，HSV-2に対するIC50値は494.6μg/ml，SI値は8.2であった。さらに、HSV-2のウイルスを抽出物で前処理したところ、ウイルスの感染力の低下が認められた。著者らは，龍胆瀉肝湯はヘルペスウイルスを直接不活化する可能性が高く，アシクロビルとは異なる作用機序であると結論づけている。

Liaoらは、免疫調整作用があると考えられているもう一つの漢方処方である「補中益気湯」の水抽出物について、抗HSV-1活性を検証した171。この抽出物は、7.5gのPanax ginseng、11.25gのAstragalus membranaceus、7.50gのGlycyrrhiza uralensis、3.75gのCimicifuga foetida、および11.25gのAtractylodes macrocephalaから調製したものである。HSV-1（strain KOS）の抑制効果は、600μg/mlの抽出物をウイルス感染したSK-N-SH細胞に処理しても認められなかった。

最後に、Mishraら180は、HSV-2（strain G ATCC-VR-734）に対するハーブゲル製剤の抗ウイルス作用を調べた。このゲルは以前，HIV-1による潰瘍を対象に研究されたもので，著者らはHIV-1による潰瘍とHSV-2には強い関連性があるとしている。このゲルには，Acacia catechu，Lagerstroemia speciosa，Terminalia chebula，Phyllanthus emblicaの50%エタノール抽出物が含まれていた。このゲル製剤を使用することにより，HSV-2の付着（IC50=46.55μg/ml，SI=68.30）および侵入（IC50=54.94μg/ml，SI=57.87）が，感染細胞をアシクロビルで処理した場合よりも大きく減少した。感染後の細胞を処理した場合、アシクロビル（IC50=0.065μg/ml SI=69,082）は製剤（IC50=469.05μg/ml、SI=6.78）よりも有意に大きな抑制効果を示した。しかし、殺ウイルス活性を試験したところ、ゲル製剤（IC50=27.26μg/ml、SI=116.63）は、アシクロビル（IC50=124.50μg/ml、SI=3.61）よりもビリオンに対して有意に強い効果を示した。さらに、ゲルを正常なヒト膣粘膜（Vk2/E6E7）細胞に適用して生理的な影響を探った。その結果、膣内細菌叢の生存率や膣内ケラチノサイトの健全性は低下しなかった。また、変異原性や炎症性サイトカインの分泌を増加させることもなかった。著者らは、これらの結果は、ヒト以外の細胞株から得られた結果よりも、患者の治療に適用できると結論づけている。

In Vivoにおけるハーブの組み合わせ

Ikemotoら175は、茂薬湯の抗ウイルス作用をマウスと組織培養細胞で調べた。滋養強壮剤は，Glycyrrhiza glabra，Zingiberis siccatum，Aconitum carmichaeliiを3：2：1の割合で配合した漢方薬Si Ni Tangの和名である。中国では何千年もの間、様々な感染症の治療に伝統的に使用されてきた。このハーブの組み合わせの抗ウイルス活性を調べるために、マウスに致死量のHSV-1（strain KOS）を感染させ、様々な用量のShigyaku-to（1.25-80mg/kg）を投与した。最も強い抗ウイルス作用が見られたのは20mg/kgの投与量で、生理食塩水を投与したマウスの死亡率が100%だったのに対し、74%のマウスが感染を免れた。さらに、感染したマウスに、滋養強壮剤を投与した未感染マウスの全脾臓細胞を接種したところ、接種していない対照群に比べて生存率が有意に高かった。Vero細胞を用いてShigyaku-toの抗ウイルス機構を調べたが、この生薬配合物は試験管内試験ではウイルス殺傷活性やウイルス静菌活性を示さなかった。著者らは、この生薬配合物の抗ウイルス機構は、マウスの体内の抗ウイルス機能を刺激することによるものではないかと考えている。

松尾らは、熱傷を受けたBALB/cマウスを用いて、漢方処方の一つである甘草附子湯（かんぞうぶしとう）の抗ウイルス作用を調べた176。熱傷を負ったマウスは、熱傷を負っていないマウスに比べてヘルペスに約100倍も感染しやすいことから、著者らは熱傷を負ったマウスを使用することにした。Aconitum carmichaelii、Atractyloidis lanceae、Cinnamomum verum、Glycyrrhiza glabraを2:12:7:4の割合で配合したカンゾウブシトウから熱水抽出物を作成した。マウスに熱傷を負わせ，その1日後にHSV-1（KOS株）を接種した。傷害後1日目と4日目に抽出物を5mg/kgの用量で腹腔内投与した。抽出物は、マウスの死亡率を有意に減少させ、コントロールの95%に対して10%の割合を示した。さらに、この抽出物を投与したマウスでは、CD8+ ST細胞の活性が低下していた。これは、CD8+ ST細胞活性の増加が、熱傷を負ったマウスの感染性の増加に関与していることを示す重要な発見である。さらに、抽出物を投与したマウスではContra-ST-cellの生成が促進されており、これがCD8+ ST細胞活性の低下を説明していると考えられる。著者らは、カンゾウブシトウの水性抽出物は、Contra-ST細胞の生成を促進することにより、熱傷を負ったマウスのHSV-1感染感受性を低下させると結論づけている。

最後に，長坂ら177は，葛根湯（かっこんとう）と呼ばれる漢方薬の組み合わせについて，その抗ヘルペス作用を調べた。葛根湯は、Pueraria pseudo-hirsuta radix 24g、Ephedra sinica herba 12g、Zizyphi jujuba fructus 12g、Cinnamomi cassia cortex 9g、Paeoniae lactiflora radix 9g、Glycyrrhizae uralensis radix 6g、Zingiberis officinale rhizoma 3gを混合したものである。ハーブ混合物の熱水抽出物を調製し，雌のBALB/cマウスに，感染の4時間前に，抽出物300mg/kgまたは水を経口投与した。マウスにHSV-1株7401 Hを接種して皮膚HSV感染させ、同じように300mg/kgの抽出物または水を8時間ごとに7日間投与した。葛根湯を投与したマウスの死亡率は33%であったのに対し、無投与のマウスは100%であった。さらに、病変の大きさと重症度は、カッコントウを投与したマウスでは、未投与のマウスに比べて有意に減少した。確立されたHSV-1感染に対する抗ウイルス効果を調べるために、別々の雌のマウスにHSV-1株7401 Hを接種し、感染後0時間または18時間に330mg/kgのKakkon-toを投与するか、または無処置のコントロールとした。皮膚病変の出現は、対照群に比べて治療群で有意に減少した。しかし、病変はすべてのグループで小水疱から潰瘍化した病変へと同じ経過をたどった。唯一の違いは、治療時間にかかわらず、治療したマウスの方が病変の大きさが小さかったことである。著者らは、「葛根湯」がHSV-1皮膚感染症に対する治療薬および予防薬として作用すると結論づけている。

ヒト臨床試験

再発性口唇ヘルペスに対するMelaleuca alternifolia（ティーツリー）オイルジェルの効果は、Carsonらが実施した無作為化、プラセボ対照、治験責任医師の盲検化試験によって研究された181。治療法は、6%のM.オルタニフォリアオイル水性ジェルまたはプラセボジェルのいずれかであった。参加者は、1日5回、できるだけ感染が始まった直後にジェルを塗布するよう指示された。M.オルタニフォリアオイルジェルを塗布した群は、プラセボを塗布した群（12.5日）に比べて感染期間が短く（9日)病変部のウイルス量もM.オルタニフォリアオイルジェルを塗布した群はプラセボを塗布した群に比べて少なかった。しかし、HSVの存在（PCRによる）および痂皮形成までの期間については、両グループとも同様の結果が得られた。研究結果は統計的に有意ではなかったが、これは研究対象とした人口が少なかったためであると著者は述べている。しかし、メラレウカオルタニフォリアオイルは、口唇ヘルペス感染症に対する費用対効果の高い代替外用療法となる可能性がある。

Wolblingらが実施した2つのヒト試験182では、HSV病変に対するMelissa officinalis（レモンバーム）の抗ウイルス効果が実証された。M. officinalisの乾燥抽出物を1%含むLomaherpanクリームが試験された。最初の試験では，プラセボ対照群を使用せずに，HSV病変に対するクリームの試験が行われた。この試験は、3つの皮膚科クリニックで、皮膚または移行粘膜に72時間以内にHSV病変を有する合計115人の患者を対象に実施された。被験者には、病変が完全に治癒するまで、1日5回、クリームを病変部に塗布するよう指示した。その結果，4日目に60%，6日目に87%，8日目に96%の被験者が病変を完治させた。著者らは，HSVの病変が10～14日で自然に治癒することから，クリームが治癒期間を短縮したと考えた。2つ目の試験は，前の試験と同じ組み入れ基準でHSV病変を有する116名の患者を対象とした無作為化二重盲検プラセボ対照試験であった。M. officinalisを含まないクリームをプラセボとして使用した。被験者には，1日2～4回，5日から最大10日間，クリームを病変部に塗布するよう指示した。ベースラインでは、治療群とプラセボ群の臨床症状に統計的な差はなかった。2日目には、プラセボ群と比較して、治療群で症状および病変部の腫れが有意に減少した。5日目には、プラセボ群の15名に対し、治療群の24名で症状の完全な消失が認められた。また、被験者および医師による治癒の評価は、プラセボ群に比べて治療群で有意に高かった。この試験では、HSV病変の治療にM. officinalisを使用することのエビデンスが得られた。抗ウイルス効果は、感染経過中のできるだけ早い時期に治療を開始した場合に最も顕著であることがわかった。

また，Koytchevら183は，HSV感染症に対するM. officinalisの抗ウイルス活性を，無作為化二重盲検プラセボ対照試験で評価した。この試験では、年に4回以上の口唇ヘルペスのエピソードがあるという基準に基づいて、66人の患者が参加した。M. officinalisの乾燥抽出物として記載されている1%の有効成分を70：1の濃度で含むクリームが作成された。被験者には、治療薬またはプラセボクリームのいずれかが与えられ、1日4回、5日間にわたって病変部にクリームを塗布するよう指示された。症状スコアは，再発性口唇ヘルペス患者のほとんどの症状がこの時期に最も重くなることから，治療開始2日目に測定した。M.officinalisクリームを用いた治療では，プラセボと比較して症状の重さのスコアが有意に低下した。著者らは，M. officinalisクリームにより，治癒期間の短縮，隣接する細胞へのウイルスの拡散の減少，かゆみ，ほてり，腫れ，紅斑などの症状の軽減が見られたと報告している。さらに、M. officinalisクリームは、再発した口唇ヘルペスの人の無症状期を長くするのではないかと推測されている。

さらに、Vonau et al 194は、50人の参加者を対象としたプラセボ対照二重盲検クロスオーバー試験を用いて、性器ヘルペスの頻度と重症度を減少させるエキナセアプルプレアの有効性を研究した。各参加者に存在するHSVの菌株を確認したところ、HSV-1とHSV-2の混合株であることが判明した。使用されたエキスは、Echinaforceと呼ばれる市販の化合物で、E. purpureaの植物と根から作られたものであった。プラセボまたは800mg×2回の経口投与による治療を6カ月間行い、その後、反対のアームによる治療を6カ月間行った。その結果、E. purpureaとプラセボの間には、性器ヘルペスの予防および再発の頻度を減少させるという点で、有意な差は認められなかった。さらに、痛みのスコア、感染期間、好中球数についても、プラセボとエキスの間に有意な差は見られなかった。

Clewellら184は，HSV病変部に対するオトギリソウと硫酸銅五水和物の局所製剤の効果を，5%アシクロビルの局所製剤の効果と比較して検討した。この製剤は，Dynamiclearとして販売されており，1回の塗布でHSV病変を治療することを目的としている。著者らは、5%アシクロビル外用剤は何度も塗布する必要があるため、Dynamiclearは5%アシクロビル外用剤に比べて費用対効果の高い治療法であると説明している。18～55歳の活動性HSV-1またはHSV-2病変を有する149名の参加者を、Dynamiclearを1回塗布する群と5%アシクロビル外用剤を14日間塗布する群に無作為に割り付けた。参加者は、1日目、2日目、3日目、8日目、14日目に症状を報告し、身体検査の評価を行った。Dynamiclear群は、アシクロビル群に比べて、灼熱感や刺すような感覚の報告が少なく、急性の痛み、紅斑、小水疱の評価が低下した。実際には、アシクロビル群はDynamiclearで治療した群に比べて小水疱が発生する可能性が4倍高かった。また、Dynamiclearによる治療は、有害事象や毒性を伴わなかったことも重要だ。

2つのハーブの組み合わせの治療的な抗ウイルス効果は、土方ら185,186によって2つの試験で評価された。最初の試験では、土方ら185は、Coicis精液4g、Elfuinga applanata 2g、Ganoderma lucidum 4g、Terminalia chebulae 2g、Trapa natans 2g、Wisteria floribunda 2gを1日分として含む水性抽出物を調製した。31～60歳の再発性口唇ヘルペスの男性1名と女性4名に、本エキスを1日1回、2回、または3回に分けて経口投与した。5人の患者すべてにおいて，ハーブコンビネーションエキスを使用することで，何も治療を行わなかった以前の発生時と比較して，ヘルペス病変の治癒期間が有意に短縮された。無治療では約2週間で治癒した病変が、数日で痂皮化して治癒した。さらに、1名の患者では、抽出物の使用により、発生に伴う痛みが有意に減少した。

2つ目の試験では，土方ら186が，Wisteria floribunda 2g，Trapa natans 2g，Terminalia chebulae 2g，Coicis lachryma-jobi 4g，Ganoderma lucidum 4g，およびElfuinga applanata 2gを1日1回投与するために，水性エキスを調製し，その後，乾燥させて粉末にした。研究参加者は、少なくとも1年以上HSV感染を繰り返し、外部の医療機関で治療を受けたが改善されなかった。本研究では、性器ヘルペスの患者15名と口唇ヘルペスの患者13名を募集した。患者は、感染した1日目と2日目に1日2回、その後は完全に症状が改善するまで1日1回、組み合わせたハーブを服用するように指示された。ベースライン時の感染緩和までの平均期間は，性器ヘルペスで10.9±6.3日，口唇ヘルペスで7.8±4.3日であった。ハーバルコンビネーションによる治療後、感染が緩和されるまでの平均時間は、性器ヘルペスで4.9±1.3日、口唇ヘルペスで4.0±1.1日に短縮された。いずれも統計学的に有意な減少であった。著者らは、このハーブの組み合わせによる治療は、再発したHSV感染症を迅速かつ効果的に緩和すると結論づけた。

最後に，Sallerら187は，口唇ヘルペス病変に対する2種類のハーブクリームの有効性を評価するため，二重盲検無作為化比較試験を行った。1つ目のクリームにはSalvia officinalisの葉から抽出したセージエキスが、2つ目のクリームにはRheum palmatumとRheum officinaleの根から抽出したセージエキスとルバーブエキスが含まれてた。基準となる治療薬は、アシクロビル（50mg/g）を含むゾビラックスであった。すべての被験者に外用薬を投与した。合計145名の被験者が試験に参加し、64名がルバーブ・セージクリームを、40名がセージクリームを、41名がゾビラックスクリームを受けるように、3つの治療グループに分けられた。参加者のHSVの状態は、腫れの量と病変に伴う痛みによって評価された。治癒までの平均期間は，セージ，セージ・ルバーブ，ゾビラックスクリームの各群で，それぞれ7.1日，6.7日，6.5日であり，痂皮形成までの平均期間は，それぞれ7.8日，7.2日，6.3日であった。治癒までの平均時間および痂皮形成までの平均時間は、治療法間で統計的な差はなかった。さらに、ルバーブ・セージ抽出物クリームを使用した被験者は、セージ抽出物クリームを使用した被験者よりも痛みを感じなかったと報告している。本研究は，HSV病変の治療において，ハーブ療法，具体的にはルバーブとセージの組み合わせが，現在の薬理学的な局所療法と同等の効果を示す可能性があるという知見の基礎を提供するものである。

同定された構成要素

薬用植物には、多種多様な植物化学物質や成分が含まれている。このレビューの中のいくつかの研究では，対象となる植物に含まれる成分を同定している。複数の抗ウイルス植物から単離された化合物には、フェノール酸56,90,108,136-138,174,180,例えばシコリン酸79,80,没食子酸92,138,150,180,ロスマリン酸63,120,121,123,124,126,153, 173,182,187 カフェ酸,94,109,120,121,124,126,153,182 カテキン酸,72 クマール酸,94,124,153 フェルラ酸,94,120 カルノシン酸,153 クロロゲン酸,109,162,182 アトマール酸,69 およびカフェオイル酸。 108 フラボノイドは、24,41,56,70,82,90,95,97,101,107,108,121,126,132,136-138,148,150,160,163,174,180特にルテオリン、44,48,94,121,126,134,153,164,172ケルセチン、57,83,102,106,172ケルシトリン、106アピゲニン、44,121,126,131,153ルチン、57,109,138ミリセチン、57,ケンフェロールが確認された。その他の成分としては、アルカロイド、56,24,41,49,95,107,129,132,135,158,159 タンニン、29,56,70,75,82,92,95,97,138,141,148,165,150,174,180,190 キサントン、66, 82 サポニン、41,95,100,101,108,109,129,174 セスキテルペン類、78 ハロゲン化セスキテルペン類、69 セスキテルペンラクトン類、162,163 モノテルペン類、131,65,166 トリテルペノイド類、24,41, 56,57,66,70,95,96,131,132,158,150 ステロール類,24,41,56,96,132,166,180 フェノール類,78 ブロモフェノール類,81 クマリン類,41,136 リグナン類,42,112 アルデヒド類,105,104,166 アルカン類, 78 多糖類,30,49,55,68,78,83,100,158,171 炭水化物,112 タンパク質,112 ケトン類,82,105 トリアシルグリセロール,69 脂肪酸,69,78 カルボン酸,39 ヒドロキシアントラセン。 187 最後に、抗ウイルス精油に含まれる成分として、ビシクロゲルマクレン、25ゲルマクレン-D、25スパチュレノール、25β-カリオフィレン、25ピペリテノン、25α-コペン、25オイゲノール、119 1,8-シネオールが確認された。 119 1,8-シネオール，119 テルピネン-4-オール，119 フラベソン，113 レプトスペルモン，113 シトラールa，122 カリオフィレン，122 シトラールb，122 シトロネラール，122 β-キュベベン，122 メンチルヘプテノン，122 カリオフィレンオキシド，122 オシメン。 122

制限事項

このレビューにはいくつかの限界がある。まず、レビューした研究の間で異なる結果指標を使用しているため、結果を比較することが困難である。いくつかの研究では、単純ヘルペスウイルス感染に対する植物抽出物のSI値を算出しているが、他の研究ではCC50,TD50,IC50,ED50の値のみを報告している。さらに、レビューした研究の中には、これらの結果指標のいずれも報告していないものもあった。CC50またはTD50をIC50またはED50と一緒に報告することは、抽出物の治療能力を十分に評価し、抽出物間の能力を比較するために重要だ。例えば、ED50が高く、CC50が低い抽出物は、顕著な抗ウイルス活性を示す前に細胞毒性を示すことになり、これは低いSIに相当する。一方、ED50が低くCC50が高い場合は、細胞毒性の兆候が現れる前に抗ウイルス作用が発現するため、安全性の高い抽出物となり、これは高いSIに相当する。一部の研究では、欠損したSI値を算出することができたが、CC50/TD50またはIC50/ED50のみが報告されている場合には、これができない研究もあった。これらのケースでは、有効性は解釈の余地がある。

第二に、軽度、中等度、強い抗ウイルス活性を表すSI範囲またはカットオフ値は、研究によって異なっていた。この違いの理由としては、試験で使用されたウイルスの用量が考えられる。例えば、SI値が20の抽出物を、ある著者グループは強い抗ウイルス活性を持つとし、別の著者グループは中程度の効果を持つとしている場合がある。このように，HSV-1およびHSV-2ウイルスの細胞への投与量が異なることから，抽出物の絶対的な抗ウイルス効果を比較することは困難である。

第三に，植物の絶対的な抗ウイルス効果を研究間で比較することは困難である。なぜなら，抽出物は，植物の種類や量だけでなく，異なる溶媒を用いて調製されるからである。植物の抗ウイルス作用は、その有効成分によるものである。その成分が何なのか、極性は何なのか、植物のどの部分に含まれているのかがわからなければ、理想的な抽出方法を決めることはできない。そのため、抗ウイルス作用のある植物でも、有効成分を抽出するのに適していない溶媒で抽出した場合には、効果がないと判断されることがある。

最後に、植物に関する研究の多くは試験管内試験で行われている。多くの植物が抗HSV活性を示しているが、その結果を臨床的にどのように作用するかを推定することはできない。ヒトでの臨床試験の数が少ないため、HSVの予防や治療に対する植物の有効性についての結論は限られたものになっている。したがって，無作為化臨床試験という形で，より多くの生体内試験研究が必要である。

結論

単純ヘルペスウイルスは、症状がなくてもウイルスが排出されることで容易に人から人へ感染するため、世界中の多くの人が感染している1。HSV感染は致命的ではないが、再発するため、個人の生活の質に悪影響を及す。HSVには治療法がないため、HSVの発生を防ぎ、治療するための管理戦略が重要だ。現在の治療法の効果は、ヌクレオシド系抗生物質に対するウイルスの耐性の出現に見られるように、弱まり始めている。12 研究では、さまざまな植物のHSV感染に対する能力が研究されており、現在利用されている治療法よりも高い効果が得られる可能性がある。HSVは、植物成分のさまざまな活性成分が、ウイルスの付着、侵入、DNA複製、遺伝子発現、またはウイルスを直接不活性化するなど、さまざまな作用メカニズムを持っているため、耐性を獲得しにくい可能性がある。これにより、従来のHSV治療薬であるアシクロビルはウイルスの複製を特異的に標的としていたが、植物成分はそれを上回る効果が期待できる。さらに、この結果は、併用療法が単独療法よりも大きな効果をもたらす可能性を示唆している。今後の研究では、試験管内試験で抗HSV活性を示した植物を組み合わせたヒト臨床試験を行うことが望まれる。