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Propolis and its potential against SARS-CoV-2 infection mechanisms and COVID-19 disease

Propolis and its potential against SARS-CoV-2 infection mechanisms and COVID-19 disease

www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7430291/

キーワードプロポリス、SARS-CoV-2,COVID-19,抗ウイルス、抗炎症、PAK1ブロッカー

要旨

プロポリスは、ミツバチが植物の滲出液から生産する樹脂状の物質であり、伝統的な漢方薬として古くから使用されており、健康補助や免疫システムの強化のために広く消費されている。COVID-19の大パンデミックにより、世界中でプロポリス製品への関心が高まっている。幸いなことに、SARS-CoV-2の感染メカニズムの様々な側面がプロポリス化合物の潜在的なターゲットとなっている。宿主細胞へのSARS-CoV-2の侵入は、細胞性アンジオテンシン変換酵素2（ACE2）およびセリンプロテアーゼTMPRSS2とのウイルススパイクタンパク質の相互作用によって特徴づけられる。このメカニズムには、コロナウイルス誘発肺炎、線維化、および免疫系の抑制を媒介するキナーゼであるPAK1の過剰発現が関与している。プロポリスの成分は、ACE2,TMPRSS2およびPAK1のシグナル伝達経路を阻害する効果があり、さらに、抗ウイルス活性が試験管内試験および生体内試験で証明されている。前臨床試験では、プロポリスはIL-6,IL-1β、TNF-αの減少を含む炎症性サイトカインの免疫調節を促進した。この免疫調節には単球やマクロファージ、Jak2/STAT3,NF-kB、炎症性サイトカイン経路が関与しており、進行したCOVID-19病の主要な死亡要因であるサイトカインストーム症候群のリスクを低下させている。プロポリスはまた、呼吸器疾患、高血圧、糖尿病、癌を含むCOVID-19患者に特に危険な合併症の様々な治療の助けとなることが期待されている。現在、一貫した生理活性を有する標準化されたプロポリス製品が利用可能となっている。COVID-19のパンデミックによって引き起こされた現在の緊急事態と限られた治療法の選択肢を考えると、プロポリスは、安全で経口投与が容易で、天然のサプリメントや機能性食品として容易に入手できる有望な治療法の選択肢として紹介されている。

1. 序論

COVID-19パンデミックは、人の健康や経済への影響が懸念されている。近年世界的に影響を及ぼしているインフルエンザなどよりもはるかに致死性が高く[1]、各国は渡航制限、学校や企業の閉鎖など、多くの人が接触する可能性のある場所を閉鎖するなどの異常な対策を余儀なくされている。この病気の影響を軽減するために、さまざまな公衆衛生戦略が採用されていたが、ウイルスが無症状の患者を介して拡散し続けているため、効果は限られている[2]。残念なことに、人々が感染しているか、あるいは以前に感染していたかを判断するための検査は、広く利用できず、しばしば費用がかかり、タイムリーで正確な結果が得られないことが多い。様々な治療法が提案され、試験されているが、そのほとんどは、広く安全に使用できるようになるまでには、臨床試験でのより確かなデータが必要である [3]。

隔離や自宅待機は、重要な労働者、特に医療従事者を効果的に保護するものではなく、感染して驚くべき速度で死亡している [4]。経済的な必要性やその他の必要性から、特に貧しい国やスラムやファベラスなどの貧しいコミュニティでは、これらの隔離対策をどの程度、どのくらいの期間維持することができるかが制限されている[5,6]。人口が徐々に正常な状態に戻ろうとし、社会的な距離を縮め、「非必要な職業」に就いている人々が職場に復帰すると、感染のリスクが高まる。このシナリオでは、病気の進行とその結果を少しでも改善するのに役立つ選択肢があれば、それは有用であろう。世界は、この致命的な病気の影響を軽減するために、安全な代替品を必要としている。

天然物は歴史的に病気の回避や緩和に広く用いられてきた[[7], [8], [9]]が、SARS-CoV-2感染症のアジュバント治療として検討されている選択肢の一つである[[10]。いくつかは抗ウイルス活性を証明している[[11], [12], [13]]。自然療法を使用することの重要な利点は、他の健康問題を抱えている人や軽度のインフルエンザ関連の症状があるが、すでに混雑している医療施設を受診する手段や勇気がない人が、SARS-CoV-2への感染の影響を軽減するために、簡単で安価な対策を講じることができるということである。

COVID-19パンデミックが引き起こしている多数の死亡者数やその他の被害を考えると、安全性が認められており、新型コロナウイルスを阻害し、感染力を低下させ、感染症の症状を緩和する可能性のある治療法を見つけることが急務となっている[14,15]。このような観点から、プロポリスとその成分は、SARS-CoV-2感染の病態生理学的な影響を軽減するのに役立つ可能性のある候補材料として浮上してきている[10]。

COVID-19の原因となるウイルスであるSARS-CoV-2による感染は、ウイルスのスパイクタンパク質とアンジオテンシン変換酵素2（ACE2）との結合によって特徴づけられる[16]。スパイクタンパク質の活性化は、ウイルス感染において重要な役割を果たすTMPRSS2などのプロテアーゼを介して媒介される[17]。エントリー後、エンドサイトーシスに続いて、コロナウイルス感染は、肺の炎症、肺線維症、および他の重要な死亡因子を媒介するキナーゼであるPAK1のアップレギュレーションを引き起こす。PAK1レベルの上昇はまた、適応免疫応答を抑制し、ウイルスの複製を促進する [10,18]。SARS-CoV-2感染は、ケモカインおよび活性化された炎症性プロサイトカインのレベルの上昇と関連しており、急速な呼吸障害および肺不全を伴う非定型肺炎の発症につながる[19]。免疫学的／炎症現象（サイトカイン放出症候群など）は、SARS-CoV-2感染のスペクトルにおいて重要であることが示されている。これらのメカニズムは、ウイルス負荷そのものよりも臓器機能障害と関連している[20]。これに沿って、レトロスペクティブな観察研究では、重症のCOVID-19患者では、軽症の患者と比較して、IL-6,IL-1,およびTNF-αなどのプロ炎症性サイトカインの血清レベルが高いことが明らかになっている[21]。

プロポリスが様々な代謝サイクルに影響を与えることにより、炎症性疾患の症状を軽減し、緩和することができるというかなりの証拠がある[22], [23], [24]。最近、いくつかの研究では、プロポリス抽出物およびその成分の一部が、SARS-CoV-2によって引き起こされる疾患の病態生理学的文脈において、いくつかの重要な標的に対して作用することが示されており、例えば、TMPRSS2の発現を減少させ、そうでなければウイルスの細胞内への侵入を容易にするであろうACE2の固定を減少させることが示されている。これは、単球／マクロファージの免疫調節（IL-1βおよびIL-6の産生の減少および除去転写因子NF-KBおよびJAK2／STAT3の減少、およびPAK1の遮断に加えて、COVID-19によって引き起こされる炎症性活性および線維化を決定する［［［25］、［26］、［27］、［28］］。

様々な併存疾患が、重度のCOVID19症状と関連しており、集中治療を必要とする患者の可能性が高くなっている;これらの併存疾患には高血圧および糖尿病が含まれる。また、COVID19患者の死亡率は、心血管疾患、慢性呼吸器疾患、および糖尿病を有する患者でははるかに高い[29,30]。これらの疾患がプロポリスの治療によって緩和される可能性があるというかなりの証拠がある。これには、糖尿病[31,32]、高血圧[33,34]、心血管疾患[35,36]の動物モデルの研究が含まれている。プロポリスは、免疫系の強化、ウイルス複製の減少、抗炎症作用など、SARS-CoV-2感染に特に関連する特性を持っている[22,24,28,37,38]。

2. プロポリスとその性質

プロポリスは、樹脂や植物の滲出物から得られる製品である。植物は主に植物化学物質を産生することで病原体から身を守るが、その多くは抽出されて医学に利用されている[39]。ミツバチが採取した植物防御物質には、フェノール類やテルペノイド類が含まれている［[40], [41], [42]］。ヒトにおけるコロナウイルスの阻害に有望なファイトケミカル化合物には、プロポリスの全成分であるケルセチン、ミリセチン、カフェ酸が含まれている[43]。ミツバチや他の多くの種の社会性のあるミツバチは、これらの抗菌特性を認識しており、これらの植物産物を選択的に採取して処理してプロポリスを作り、コロニーを保護するために使用している[44]。ミツバチによるプロポリスの生産と使用は、これらの社交性のあるハチが単独の昆虫種よりもかなり少ない免疫遺伝子を持っているという点に進化した[45]。より多くのプロポリスを生産するコロニーのミツバチは健康で長生きしている[46]。

プロポリスの組成は、各地域で利用可能な植物種によって異なる[42,48,49]。このばらつきが薬効に影響を与える可能性があるため、主要な生理活性成分にばらつきがなく、医薬品との相互作用が少なく安全で、臨床試験で有効性が証明されている製品のニーズを満たすために、標準化されたプロポリス製品が開発されてきた[50], [51], [52], [53]。近年数十年の間に、抗菌（抗ウイルスを含む抗炎症、免疫調節、抗酸化、抗がん剤としての特性を持つことが示されている[54]。プロポリスは、歴史的に様々な疾患を緩和するために広く使用されてきた[7], [8], [9], 55];また、一般的に安価で広く入手可能であり、望ましくない副作用を引き起こすことがほとんどないため、他の天然の代替品の中で、SARS-CoV-2感染症の補助治療としても検討されてきた[10]。

ブラジルのグリーンプロポリスのように、薬効成分として高く評価されているプロポリスの種類によっては、主にミツバチが特定の植物（この場合はBaccharis dracunculifolia）から採取した材料から生産されているものもある[56]。プロポリスの植物学的起源が特定された後、その植物の抽出物を製造して、薬用マウスウォッシュなどの有用な製品を開発することができる[57]。しかし、これらの植物抽出物の薬効は、ミツバチがこれらの植物原料から作るプロポリスに比べて劣ることが多い[58], [59], [60]。

3. プロポリスがCOVID-19への対応に適していると思われる理由

自然療法の中でも、プロポリスは広く研究されており、すでに多くの国で広く消費されている[38,55,[61], [62], [63]。例えば、のどスプレーやエキスなどのプロポリス製品は、ブラジルでは何百社もの企業によって生産されており、国内のほぼすべての薬局で健康補助食品として販売されており、安全に摂取できることが実用的に証明されている。これらのプロポリス製品とその製造原料は、ブラジルの企業によって、特に日本、韓国、中国を含むアジア諸国に広く輸出されている[50,64]。中国、日本、ロシア、韓国の医学におけるプロポリスの重要性は、2013年までに登録されたプロポリス含有製品の特許数に反映されており、その中には中国が約1200件、日本、ロシア、韓国が300～400件ずつ含まれている[42]。2013年以降、米国特許庁には約1400件のプロポリス関連特許が新たに出願されている。それは伝統的な漢方薬の重要な成分である[65]。日本の科学者は、がん治療のための様々なブラジル産プロポリス成分を単離して特許を取得しており[66]、その有用性を実証している。実際、プロポリスは幅広い薬理学的特性を有しており、健康な人も病気の人も予防や治療のために一般的に摂取されている栄養補助食品である[67], [68], [69]。また、抗菌、抗真菌、抗ウイルス、抗寄生虫、肝保護、免疫調節作用があるため、獣医学でも使用されている[70]。

コロナウイルスの大発生を受けて、韓国では機能性食品の使用が急増している。食品医薬品安全部によると、「健康機能性食品」とは、健康に有益であることが証明されている栄養素のことである[71]。今年3月には、コロナウイルスの大パンデミックに対応して、同省は機能性食品とされるプロポリスの規制を緩和し、新たな経口投与を許可した[72]。しかし、プロポリスが病気の症状を軽減したり緩和したりすることができるというかなりの証拠があるにもかかわらず、プロポリス製品が標準化されておらず、その成分や生物学的活性にばらつきがあるという批判があるため、米国などの多くの国では健康増進サプリメントとしてのプロポリスの受け入れは限定的である。これは、プロポリスが各地域で入手可能な植物の種類によって異なり、そこからミツバチが樹脂を採取してプロポリスを生産するからである[42,48,49]という部分もある。しかし、最近では、主要な生理活性成分や効果にばらつきのない製品のニーズを満たすために、標準化されたプロポリス製品が利用できるようになってきた[50,52]。そのような選択肢の一つである標準化されたブラジル産プロポリス抽出物ブレンド[54]は、腎臓病および糖尿病[51]、義歯の口内炎[73]、および火傷患者[74]の治療のための臨床試験で安全性と有効性が検証されている。したがって、栄養補助食品または機能性食品としてのプロポリスは、COVID-19パンデミックとの戦いに役立つ資源として考慮されるべきである。

4. いくつかのプロポリス化合物は、SARS-CoV-2 MPROと相互作用する可能性がある。

研究コミュニティでは、コロナウイルスの遺伝子コードとSARS-CoV-2によって引き起こされる損傷の根底にあるメカニズムを調べ、ウイルスを不活性化し、ウイルスが引き起こす損傷を軽減するための薬剤および／または潜在的なターゲットの探索に役立てている。コロナウイルスSARS-CoV-2の主なプロテアーゼであるMPRO（3-キモトリプシン様システイン酵素）は、コロナウイルスのポリプロテイン処理およびそのライフサイクルに不可欠であり、したがって、この酵素の活性部位の阻害は創薬のための関連するターゲットである[75]。

これに沿って、Hashemは、SARS-CoV-2感染症の治療に有用な選択肢を見出すために、in silicoアプローチ（分子ドッキング）を用いて様々な天然化合物を評価した。興味深いことに、カフェイン酸フェネチルエステル（CAPEガランギン、クリシン、カフェイン酸は、世界中のさまざまな種類のプロポリスに含まれている物質であり、このウイルス標的に対する薬剤の可能性があると考えられていた（表1）[76]。具体的には、CAPEは同様の研究でSARS-CoV-2 MPROと相互作用することが予測された[77]。したがって、プロポリスおよび／またはその成分の潜在的な抗SARS-CoV-2効果を評価するためには、試験管内試験試験を実施する必要があるが、これらのin silico試験の結果は十分に裏付けられている。

表1　プロポリスとその成分がSARS-CoV-2感染とその影響を減衰させる可能性のある経路

5. プロポリスはACE2およびTMPRSS2と相互作用し、宿主細胞のSARS-CoV-2の浸潤をブロックまたは減少させる可能性がある。

SARS-CoV-2は、アンジオテンシン変換酵素2（ACE2）と強く結合し、この酵素を宿主細胞への侵入・複製のための受容体として使用し[17,78]、損傷を引き起こし、対人感染を増加させる[26,79]。そのため、ACE阻害剤は有用な薬剤の代替品として考えられてきた。しかしながら、アンジオテンシン変換酵素（ACE）阻害薬およびアンジオテンシン受容体拮抗薬（ARB）の使用者に対する潜在的な劇症的影響が、COVID-19患者の治療における懸念事項として浮上している。8,910人の患者を対象とした観察研究では、この疑いは確認されなかったため、これらの薬剤は潜在的な心血管イベントに対する重要な手段であり続けている[80]。

ACE2酵素の阻害は、SARS-CoV-2感染症に対する治療の重要なターゲットである[15,81]。Gülerら[26]はプロポリスのアルコール抽出物を調製し、いくつかのヒドロキシ桂皮酸（カフェイン酸、p-クマリン酸、t-桂皮酸、CAPEフラバノン類のルチンとミリセチン、フラボン類のヘスペリジン、クリシン、ピノセンブリンを同定した。分子ドッキング評価を用いて、ルチンがACE2への結合エネルギーが最も高く、ミリセチン、カフェ酸フェネチルエステル、ヘスペリジン、ピノセンブリンがそれに続いた。ルチンはACE2の活性部位の亜鉛フィンガーと相互作用し、ACEに同じ亜鉛フィンガーを提示するメタロプロテアーゼである[26]。

in silicoでの証拠に加えて、Osésら[82]は、ACEの阻害を含む様々な特性について、いくつかのタイプのプロポリスを評価した。彼らは、研究したプロポリスのほとんどの種類で強力なACE阻害が認められ、90%以上のACE阻害が認められた。最も優れた結果は、プロポリスの成分であるカテキンとp-クマリン酸で発見された。

宿主細胞の表面にあるACE2とTMPRSS2（膜貫通型セリンプロテアーゼ2）は、スパイク糖タンパク質との相互作用を介してSARS-CoV-2によって、侵入と複製を進めるために利用される[15]。Vardhan & Sahoo [15]は、RNA依存性RNAポリメラーゼ（RdRpACE2,スパイク糖タンパク質などの関連する標的との分子ドッキング法を用いて、薬草によく見られるいくつかの分子を研究し、その結果をヒドロキシクロロキンと比較した[15]。リモニンが最も活性の高い化合物であったが、同じくプロポリス化合物であるケルセチンとカエンフェロールも高いドッキングスコアを示した[15]。カエンフェロールを前立腺癌モデルで研究したところ、TMPRSS2の発現が減少し、抗腫瘍効果が期待できる作用機序が示された[83]。ケンプフェロールはTMPRSS2の阻害に関与しており[83]、抗ウイルス活性[84]（表1）に加えて、ACE2,RdRp、スパイク糖タンパク質（SGp）[15]と相互作用する可能性があるため、COVID-19に対する使用のための重要なプロポリス成分である可能性がある。

6. プロポリスはPAK-1をブロックし、肺線維化を回避し、正常な免疫応答を回復させる可能性がある

COVID-19の損傷を制御するための可能性のあるターゲットの中で、主要な「病原性」キナーゼPAK1が鍵を握っている。マラリアやウイルス感染症では必須の構成要素であるが、異常に活性化されると、癌、炎症、免疫抑制など、他の様々な疾患や病状にも関与する。PAK1活性化の結果として、COVID-19の悪化因子である肺線維症[10]が挙げられる。PAK1はRACによって活性化される。Xuら[18]は、プロポリスの成分であるカフェイン酸とそのエステル(CAPE)がRACを不活性化し、結果としてPAK1を阻害することを実証した。PAK1を直接、または上流で不活性化することで、コロナウイルスの病原性を減衰させることができる可能性がある[10]。B細胞およびT細胞は、ウイルスおよび他の侵入者に対する特異的な抗体を産生するリンパ球であり、PAK1はそれらの抑制に寄与する。PAK1阻害剤は、ウイルスとの闘いと正常な免疫応答の回復の両方を助けることができる[10]。

ヨーロッパや温帯アジア産のプロポリスは、通常、ポプラの木から採取した樹脂からミツバチが製造しているが、フラボノイド化合物が優勢であるのに対し、ブラジルに自生するグリーンプロポリス（Baccharis dracunculifolia由来）は、アルテペリンC、バッカリン、ドルパニンなどの様々な種類のフラボノイドやプレニル化フェニルプロパノイドを含有している。これらおよび他のすべての種類のプロポリスは、PAK1を不活性化することができる[10]。アルテピリンCはPAK1を選択的に阻害する［85］（表1）。

いくつかの研究では、プロポリスが免疫応答を改善する能力を持ち、免疫賦活剤として作用することが示されている。その成分は中和抗体価を増加させ、貪食を活性化し、IFN-γレベルとリンパ球数を増加させる[86]。IFN-γレベルの増加は、単純ヘルペス動物モデルにおいて、ある種のプロポリスの効果に関与するメカニズムを評価したShimizuら[28]によっても検出された。

CAPE（カフェイン酸フェネチルエステル）は、ミエロ単球細胞におけるNF-κBの活性化を強力に阻害する。Ansorgeら[37]は、プロポリス、CAPE、ケルセチン、ヘスペリジンおよび他のいくつかのプロポリスフラボノイドが、重要な抗炎症性サイトカインであるTGF-β1を増加させながら、Th1およびTh2型T細胞のサイトカイン産生を抑制することを実証した。さらに、CAPEは、JAK2/STAT3シグナル伝達のダウンレギュレーションを介して酸化ストレスや炎症を減衰させることができる[87]だけでなく、CAPEは、炎症性のプロTh17の開発に重要なIL-6リン酸化とSTAT3を阻害する免疫調節効果を持っている[88]。

CAPEとカエンフェロールの抗炎症効果に加えて、Paulinoら[89]はラットの前足浮腫および細胞培養物におけるアルテペリンCの抗炎症効果を評価し、その活性がNF-kBの調節を介したプロスタグランジンE2およびNOの阻害によって少なくとも部分的に媒介されていることを実証した。アルテピリンCは、ブラジル産グリーンプロポリス（植物由来のBaccharis dracunculifolia）の重要なバイオマーカーである。

コロナウイルス感染は、感染の初期段階で免疫応答を異常に調節し、それによってウイルスの複製を容易にするので、免疫調節が望ましい。しかし、COVID-19の後の段階では、体は誇張された炎症反応を発現し、これは肺および他の器官に大きな損傷を与えることができる。典型的な免疫抑制剤とは異なるプロポリスは、疾患の初期段階では免疫抑制を回避し、後期段階では過剰なIL-6,IL-2およびJAKシグナル伝達を阻害して、誇張された宿主の炎症反応を減少させることができる[90]。プロポリスの成分であるCAPEは、免疫調節剤としても知られており[91]、誇張された炎症反応を減少させるのに役立つ代替品として考慮されるべきである。マウスモデルでは、プロポリスは生体内でToll様受容体の発現とプロ炎症性サイトカイン産生に対して免疫調節作用を有していた[92]。

プロポリスおよび／またはその成分がウイルスの複製および感染性に干渉し、免疫系の強化を促進する一方で、抗炎症作用により肺の炎症を減少させる可能性があることを示す十分な証拠がある。これらは、COVID-19の症状や劇症的な影響を最小限に抑えるのに役立つ可能性がある有用な特性である（図1）。

図1　プロポリスが宿主細胞へのSARS-CoV-2の付着、ウイルスの複製、および病態生理学的な結果を阻害する主な経路。

SARS-CoV-2の標的細胞への侵入には、スパイクタンパク質がACE2に結合し、TMPRSS2によって活性化されることが必要である。結合後、いくつかのシグナルがトリガーされ、ウイルスエンドサイトーシスおよびPAK1の活性化を可能にし、ウイルスに対する適応免疫応答および抗体産生を低下させる。PAK1はまた、CCL2産生を刺激し、これは線維化応答を発生させる。ウイルス感染は、核内移行因子NF-KB活性化を誘導し、局所的な炎症性サイトカイン産生を発生させる。プロポリス由来の化合物は、TMPRSS2およびアンカーリングACE2の発現をダウンレギュレートし、ウイルスの侵入を制限する。さらに、NF-KBおよび単球/マクロファージの免疫調節を促進し、プロ炎症性サイトカインの過剰産生を減少させ、PAK1の活性化を減少させ、SARS-CoV-2に対する抗体の産生を増加させる。

7. 抗ウイルス物質としてのプロポリス

プロポリスは様々なウイルス性疾患生物に対して試験されてきたが、初期の成功により、最も有用な成分を決定するための研究が促され、より活性の高い特異的な医薬品を製造するために改良された可能性がある[93]。動物モデルでプロポリスによって制御され、ヒトでの制御が示唆されたウイルスには、インフルエンザ[11,94]、単純ヘルペスウイルス2型[95]、HIV[93,96]などがある。清水ら[28]は、単純ヘルペスウイルス1型のマウスモデルを用いて、エタノール抽出物中の3種類の異なるプロポリスを評価した。ミツバチがプロポリスの生産に使用した樹脂（Baccharis dracunculifolia、Baccharis eriodata、Myrceugenia euosma）の植物由来の違いによる化学的な違いにもかかわらず、3種類のプロポリス抽出物はすべて直接的な抗HSV-1効果を有するだけでなく、マウスの皮内HSV-1感染に対する免疫学的活性を刺激した。

プロポリスの抗ウイルス活性は、DNAおよびRNAウイルス（ポリオウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス）に対して試験管内試験モデル（培養細胞）で報告されている。ポリオウイルスとヘルペスウイルスに対しては、プロポリス濃度30 ug/mlで99.9%の阻害効果が得られており、最も優れた結果が得られている[97]。プロポリスの成分であるクリシンとカエンフェロールは、宿主細胞の単分子膜を感染させ、その後薬剤を含む培地で培養すると、ヘルペスウイルス株の細胞内複製を濃度に依存して減少させた。別のプロポリス成分であるケルセチンも同様の効果を示したが、試験した最高濃度（60 ug/mL）でのみ、様々なヒト単純ヘルペスウイルス株に対して細胞内複製を約65%減少させ、一方でウシヘルペスウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス、およびウシコロナウイルスの感染性を約50%減少させた。ロタウイルスの場合は70%の減少であった[84]。

8. プロポリスの抗炎症作用と免疫調節作用

人工呼吸器補助集中治療を必要とし、しばしば人工呼吸器依存症の長期化と死亡をもたらすCOVID-19の最も重篤な症例は、感染に対する過剰な炎症反応の結果である[98]。SARS-CoV-2感染は、ケモカインおよび活性化されたプロ炎症性サイトカインのレベルの上昇と関連しており、急速な呼吸障害および肺不全を伴う非定型肺炎の発症につながる[19]。免疫学的／炎症現象（サイトカイン放出症候群など）は、SARS-CoV-2感染における重要な死亡因子であることが示されている。IL-6,IL-1,TNF-αなどのプロ炎症性サイトカインの血清レベルが、軽症の患者と比較して重症のCOVID-19患者では高いことが明らかになっている[21]。この免疫プロセスに関与する分子機構は、PAK1ブロッカーであるシクレソニド、ヒドロキシクロロキン、イベルメクチン、およびケトロラックを含む、患者で試験されている様々な合成医薬品の標的である[10]。PAK1（RAC/CDC42-活性化キナーゼ1）は、SARS-CoV-2感染に反応して肺で過剰発現し、入院患者の死亡を頻繁に引き起こすサイトカインストームの重要なメディエーターである[99]。幸運なことに、プロポリスの成分は有効なPAK1ブロッカーである（表1）。

プロポリスが炎症性疾患の症状を軽減したり、緩和したりすることができるというかなりの証拠がある[[22], [23], [24]]し、免疫調節作用がある[[24,37]。しかしながら、これらの特性は、プロポリスの植物由来、使用される抽出プロセス／溶媒、およびプロポリス抽出物を試験する際の炎症プロトコル（細胞培養、動物モデル、リポ多糖類による誘導）によって異なる場合がある[50]。動物モデルを用いた試験では、プロポリスが主要なプロ炎症性メディエーターであるIL-6およびTNF-αのレベルを低下させ、調節性サイトカインであるIL-10のレベルを上昇させることが示されている[24]。プロポリスの成分であるケンフェロールは、ERK-NF-κB-cMyc-p21経路を介してIL-6,TNF-α、およびVEGF（血管内皮増殖因子）を減少させる[83]（表1）。

マクロファージ培養細胞を用いた試験では、関節リウマチ、ループス、その他の自己免疫疾患などの疾患において、プロポリスが炎症性炎症経路の重要な構成要素であるIL-1ベータの産生を抑制することも実証されている[55]。作用機序は十分に解明されていないが、これらのプロポリス成分は、慢性炎症性疾患の予防治療における補完的なサプリメントとしての可能性を秘めている[100]。

9. ワクチンアジュバントとしての可能性を秘めたプロポリス

プロポリスは安全な免疫賦活剤であり、強力なワクチンアジュバントであると考えられている[101]。プロポリスは、より早い段階で免疫反応を誘導し、より長い保護期間を提供するため、ワクチンのアジュバントとして広く試験されている[102]。また、伝統的な漢方薬のアジュバント成分としても含まれている[103]。プロポリスのフラボノイドは、血清中のIgG、IL-4,およびIFN-γを増強するアジュバントとしての可能性を持っている[104]。Fernandesら[86]は、プロポリスが犬のコロナウイルスに対して開発されたワクチンにポジティブなアジュバント効果を発揮することを発見した。彼らは、ワクチンによって誘導された細胞応答を測定する効果的な方法であるIFN-γを測定した。マウスモデルでは、不活化された豚ヘルペスウイルス1型ワクチンのアジュバントとしてプロポリスを添加すると、細胞性および体液性反応の増加が刺激され、IFN-γが増加した [105,106]。プロポリスはモルモットの不活化豚パルボウイルスワクチンに対する免疫応答を増強した [107]。トリコモナス・ヴァギナリスタンパクワクチンにプロポリスを添加した場合、マウスのIgG抗体反応はタンパク単独の場合と比較して4～10倍に増加した[108]。また、プロポリスは牛ヘルペスウイルスの免疫におけるアジュバントとしても有効であった[105]。不活化ウイルスワクチンを接種したマウスの体液性および細胞性反応を改善した[109]。アジュバントとしてのプロポリスは、HIV-1ポリトープワクチン候補でワクチン接種したマウスにアルミナとフロイントのアジュバントと同様の免疫応答（IFN-γレベルの上昇）を与え、望ましくない副作用のリスクが少なくなった[110]。

10. COVID-19患者における併存疾患およびプロポリスがその影響を軽減するのに役立つことを示す証拠

10.1. 癌の場合

がんはCOVID-19に関連する併存因子と考えられている。がん患者は、併存疾患のない患者に比べて、重度のCOVID-19疾患に進行するリスクが3～4倍高い。また、コロナウイルスパンデミック時の病院環境は、がん患者が受けるべき治療を妨げたり、遅らせたりする可能性がある。症状のある患者は、がんであるかどうかを判断するために診療所または病院を訪れるリスクを冒さないことを選択することがある [111]。代替療法は、COVID-19患者におけるがんの進行を遅らせたり、がんやがん治療の影響を軽減したりするのに役立つ可能性がある。

プロポリスは、がんの補完療法としての可能性を持っている。プロポリスは、膀胱がん、血液がん、脳がん、乳がん、結腸がん、頭頸部がん、腎臓がん、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がんなど、さまざまな種類のがんに対して有効性を示している[112]。プロポリスは癌の進行を防ぐのに役立つ可能性があり、世界の様々な地域では癌治療の代替療法と考えられている[113]。プロポリスの抽出物は、血管新生の阻害を含め、試験管内試験および生体内試験の両方で腫瘍細胞の増殖を阻害することが明らかになっており、新しい抗がん剤の開発の可能性を示している[114], [115], [116]。プロポリスの様々な成分は、桂皮酸[66]、CAPE[117], [118], [119], ケルセチン[120]およびクリシン[121]を含む癌細胞の増殖を阻害することが示されている。プロポリスとその成分は通常、正常細胞にはほとんど影響を与えず、肝がん、メラノーマ、乳がん細胞株では細胞毒性に差がある[122,123]。プロポリスは癌細胞における腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（TRAIL）の活性を高める [124]。

10.2. 高血圧と心血管疾患

高血圧と心血管疾患はCOVID-19に関連する併存疾患と考えられている[125], [126], [127]。プロポリスはラットモデルで抗高血圧効果を実証している[33,34,128,129]。カメルーンでは、高血圧を含む様々な病気を治療するために一般的な医学で使用されている[130]。プロポリスは、心血管保護効果を含む健康上の利点のために、栄養補助食品として広く利用されてきた[131,132]。ヒトを対象とした試験では、プロポリスの摂取はHDL、GSH、TBARSレベルを含む重要な血液パラメータを改善し、心血管疾患のリスク低減に寄与することが実証された[132]。

10.3. 肥満

肥満はCOVD-19患者における主要な併存疾患であり、死亡率増加の予測因子である。肥満とSARS-CoV-2はともに炎症過程を誘発し、肥満者におけるSARS-CoV-2感染を悪化させる[133]。プロポリスは、高カロリー食を誘発したマウスの肥満において、炎症を抑制し、高脂血症やメタボリックシンドロームを予防した。プロポリスを給与したマウスでは、体重増加、内臓脂肪組織、肝臓および血清トリグリセリド、コレステロール、非エステル化脂肪酸のすべてが減少した[78,134]。プロポリスの成分であるカフェイン酸フェネチルエステルは天然の抗肥満剤である[135]。

10.4. 血栓塞栓症、血栓症、微小血栓症

微小血栓症、播種性血管内凝固、およびその結果として生じる多臓器不全は、重症化したCOVID19患者によく見られ、関連する高い死亡率を伴う[[136], [137], [138], [139]。抗凝固剤は死亡率を低下させることができるため、このような患者に処方されることがある（Tang er al)。プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター-1（PAI-1）のレベルの上昇は、血栓症および動脈硬化のバイオマーカーおよび危険因子である[140,141]。様々な種類のエビデンスが、プロポリスが血小板凝集や他の血栓症に関連するパラメータを減少させることを示している。プロポリスはリポ多糖類によって誘導されたPAI-1レベルの上昇を抑制することで、マウスの血栓性傾向を減少させた[142,143]。プロポリスは低密度リポ蛋白質ノックアウトマウスにおいて、血小板由来成長因子と血小板内皮細胞接着分子を抑制した [144]。ヒトの血液を用いた試験管内試験試験[145]およびその他の試験管内試験試験[146]では、プロポリスによって血小板凝集が減少した。よく研究されている生理活性プロポリス成分であるカフェイン酸フェネチルエステル（CAPE）は、コラーゲン誘導血小板活性化を阻害する[147]。

10.5. 老年期の

高齢者は慢性炎症の影響を受けることが多く、全身的に増加したプロ炎症性サイトカインのレベルによって特徴づけられ、これはCOVID-19死亡率の主要な原因であるサイトカインストームの発生に寄与する可能性がある[148]。プロポリスには抗酸化作用があり、老化の進行を遅らせたり、減少させたりするのに役立つ可能性がある[149]。プロポリスの成分であるCAPEは、老化研究の一般的なモデル生物であるCaenorhabditis elegansの寿命を延ばした[150]。プロポリスの摂取は、高地に曝された高齢者（ヒト）の認知機能の低下から保護されている[151]。プロポリスを摂取した高齢者では、血清TGF-β1とIL-10のレベルが有意に高く、炎症の抑制に役立っており、これが認知機能の低下に対する保護のメカニズムである可能性がある。プロポリスを投与された男性では、主要な抗酸化物質であるスーパーオキシドジスムターゼ（SOD）の活性が増加し、酸化ストレスのマーカーであるマロンジアルデヒドは減少した[152]。同じ傾向は糖尿病ラットモデルでも検出された[153]。プロポリスは抗酸化活性を介して神経変性損傷を減少させる可能性があり、アルツハイマー病や加齢による認知障害から保護するのに役立つ[154,155]。アルツハイマー病のマウスモデルでは、プロポリスの有効成分であるコニフェラルアルデヒドが神経保護効果を示した。それは脳のβアミロイド沈着と脳内の病理学的変化を減少させ、学習と記憶能力の維持を助けた[156]。SARS-CoV-2の宿主細胞への侵入の鍵を握るアンジオテンシン系は、老化と関連している。SARS-CoV-2が高齢の患者で有意に高い死亡率を引き起こす理由の1つは、ウイルス感染の脆弱な標的であり、ウイルスの複製を促進するのに役立つことができる肺の老化細胞の数が多いことであると考えられる。そうなると、高齢者のCOVID-19の生存を助けるためには、老人性肺細胞溶解薬が有用になるだろう。COVID-19の治療薬として提案されているプロポリスの成分であるケルセチンは、解熱活性を有している[157]。

10.6. 糖尿病の

重症COVID19患者の死亡率が高い一般的な併存疾患には、糖尿病が含まれている[30]。糖尿病と炎症の関係、プロポリスの主要な生理活性成分であるフラボノイドがフリーラジカルやその他のプロオキシダント化合物から保護することを考えると、プロポリスの摂取が糖尿病のリスクを減少させる可能性があるのはもっともなことである[158]。ブラジル産のプロポリスは、炎症や糖尿病の予防に役立つことから、世界各地で健康的な栄養補助食品として人気を集めている[159]。プロポリスは糖尿病ラットの血糖値、血中脂質、フリーラジカルを減少させることがわかった[31,160]。また、糖尿病ラットのグリセミア[32,161]やインスリン抵抗性[162], [163], [164]を減少させた。実験的な糖尿病性腎症も予防された[165]。糖尿病マウスモデルでは、脂肪組織における免疫活性化を減衰させることにより、明らかに糖尿病症状が軽減された[166]。

糖尿病患者を対象とした臨床試験では、プロポリスの摂取が抗酸化パラメータ[167]、血糖コントロール[168,169]、脂質プロファイルと腎機能[170]を改善することが実証された。プロポリスはまた、創傷治癒特性を有する抗菌剤でもあり[171,172]、創傷が治癒しにくい糖尿病患者に特に有用であることが証明されている[173,174]。

カフェイン酸フェネチルエステル（CAPE）は、炎症および糖尿病に対する有益な効果を有する抗肥満剤と考えられている[175]。CAPEは、糖尿病マウスおよび肝細胞培養においてインスリン抵抗性を減少させた[176]。プロポリスの別の成分であるクリシンもまた、抗糖尿病特性を持っている[177]。

10.7. 腎臓の病気

COVID-19は、腎障害または肝障害などの併存疾患を有する患者にとって重要な脅威である[178]。腎臓はSARS-CoV-2の共通の標的である[179]。COVID-19患者は腎障害のリスクが高くなり[79]、その結果、COVID-19患者の多くは腎機能障害を呈する[180]。死亡率の増加は、慢性腎臓病を有するCOVID-19患者および血液透析を受けている患者では一般的である[181]。プロポリスは腎臓病に対する保護効果を示している。動物モデルでのプロポリス治療により腎症が予防された[165,182,183]。ブラジル産の赤いプロポリスは、ラットの腎切除モデルで高血圧と腎障害を減衰させた[184]。ラットモデルにおけるプロポリスの抗糖尿病活性は肝障害を減少させた[160]。先駆的な臨床試験では、プロポリスは慢性腎臓病患者の蛋白尿を減少させた[51]。

10.8. 細菌感染

細菌感染はCOVID-19の一般的な合併症である[79]。プロポリスは、その抗菌特性のために長い歴史を持っており、COVID-19患者の細菌感染症の治療に役立つ可能性がある。プロポリスの治癒特性は旧約聖書の至る所で言及されており、プロポリスは古代ギリシャのヒポクラテスによって、ただれや潰瘍の治療のために処方されていた[185]。プロポリスは、その抗菌性のためにロシアや東ヨーロッパの他の国で何世紀にもわたって人気があった[186]。プロポリスの薬理学的価値は、ほとんどの医薬品のように1つまたは数種類の物質だけではなく、抗菌性物質の自然な混合物に由来する[187]。プロポリスの成分であるガランギン、ピノセンブリン、ルチン、ケルセチン、ナリンゲニン、およびCAPEは細菌の膜透過性を増加させ、これが抗菌特性を説明する可能性がある[188]。De Camposら[189]は、プロポリスの主な作用機序が細菌細胞の破裂と溶解であることを示した。プロポリスは、黄色ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌エピダーミディス、大腸菌[190]に対して抗菌活性を示しており、黄色ブドウ球菌のメチシリン耐性株およびメチシリン感受性株を含む[191]。抗生物質であるアンピシリン、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、バンコマイシン、オキサシリンにプロポリス抽出物を添加すると、黄色ブドウ球菌に対する抗菌活性が向上した[192,193]。抽出物はまた、この細菌による細胞接着とその結果としてのバイオフィルム形成を減少させた[193]。プロポリス（蜂の接着剤として知られることもある）はヒト結核菌に対して抗菌活性を持つが、グラム陰性菌に対しては限定的な活性しか持たないことが多い。これらの抗菌特性は、フラボノイドの含有量が多いことに起因していると考えられている[186]。プロポリスは細菌性の虫歯を回避するのに役立つ[194]。プロポリスとその成分の一部は細菌の運動性を抑制する[195]。ブラックポプラ（Populus nigra, Populus nigra）の木の樹脂は、ヨーロッパで薬用として使用されるプロポリスの主な原産地であり、よく知られた抗菌作用を持つフェノールとフラボノイドを含んでいる[196]。プロポリスは、濃度に応じて静菌性、殺菌性がある[197]。プロポリスのエタノール抽出物は、シュードモナサエルギノーサによる微生物の増殖とバイオフィルム形成を抑制した[198]。プロポリスの抗菌性は、創傷治癒のバイオフィルムに有用な成分となる[199]。

11. 限界。標準化の欠如

人間は何千年もの間、プロポリスを生薬として使用していた。プロポリスには、抗ウイルス性、抗菌性、抗真菌性、抗炎症性、免疫調節性、抗酸化性、創傷治癒性など、様々な有用な活性が記述されている[200,201]。しかし、植物の地理的な出所、蜂の種、季節性、および気候の違いは、化学組成に劇的に影響を与える可能性がある[48,202]。これらの詳細は、加工および溶媒抽出プロセス（極性に応じて一部の化合物を選択的に抽出することができる）[203]のバリエーションとともに、その生物学的特性に影響を与える可能性がある。これは、試験の再現性に影響を与えたり制限したりして、ヒト臨床試験の適切な投与量を決定するために使用される結果の集計を混乱させ、最終的には処方者に不安を与えることになりかねない。

プロポリスの生物学的特性に関わるメカニズムの理解には、かなりの研究が行われていた[54,189,204,205]。また、プロポリスの生理活性化合物を保存し、各病状に最適な薬理学的特性を一貫して提供するための適切な抽出方法を決定するための技術的・分析的プロセスの改善にも努力が払われてきた[50,200,201,203,[206], [207], [208]]。しかし、プロポリスは、健康補助食品、食品補助食品、化粧品および/または衛生製品として、製品の種類によって異なる分類で市場に提供されている製品であるにもかかわらず、公表された研究に見られる様々な有益な効果は、生理活性フラボノイドには質的および量的なばらつきがあり、養蜂家によって提供された原料に依存するという議論に基づいて、欧州委員会によって許容される「クレーム」として受け入れられていない。これらの要因、および標準化された抽出・調製方法の欠如が、この種の承認を許さない理由であり [209]、Chan [38]が提案した標準化を正当化するものである。

ハチ製品の分野では「標準化」はまだ一般的な手順ではないが、この現実はすでに植物医薬品業界に存在している。ハーブ製品を扱うとき、植物が季節性、土壌処理、近くの他の植物種、および他の様々な条件を含む環境の強い影響に苦しむので、受け取った原料の違いを見つけることは正常であり、その結果、しばしば化学的に、定性的および/または定量的に異なる植物材料のバッチになる。この種の材料を使用する場合、同一のバッチを持つことは不可能であるが、安全性及び有効性の研究を検証し、製品が市場に提供される際に有用な特性を保証するためには、最低限の標準化が必要である[210]。

米国ハーブ製品協会による「標準化」の定義は次のとおりである：「標準化とは、合理的な一貫性のある材料を生産するために必要な情報と管理の体系を指す」[211]。この目標を達成するために利用可能なメカニズムと技術は利用可能であるが、課題も存在する。Nikamら[210]は，そのような標準化を開発しようとする者のための有用なガイドラインを提示している。

11.1. 標準化されたプロポリス製品
ブラジルでは、12種類の主要なプロポリスがすでに記載されている[201]。この大きなばらつきと、これらの違いが研究、開発および工業分野で引き起こす限界のために、Berrettaら[54]は、EPP-AF®と名付けられた標準化プロポリス抽出物を開発した（特許第0405483-0号、2019年7月23日付工業所有権誌承認）。0405483-0,2019年7月23日に工業所有権誌によって承認された）は、特徴的なHPLCフィンガープリントと一貫した生物学的効果（抗菌活性）に加えて、フェノールおよびフラボノイド化合物のグループについてバッチ間の再現性を有している[54]。この抽出物を用いていくつかの研究が行われており、分析開発と検証[54,212,213]、抗菌、抗真菌、創傷治癒特性などの生物学的効果[54,205,[214], [215], [216], [217]などの生物学的効果、および抗炎症および免疫調節活性[22,24]などがある。]

12. 安全性および有効性試験

12.1. 非臨床研究

病気の治療にプロポリスを使用してきた伝統的な歴史に加えて、動物を用いた様々な研究により、プロポリスの安全性が実証されている[[218], [219], [220]]。EPP-AF®の安全性試験は、試験管内試験エイムズテストを用いて実施され、評価した細菌株に異常がないこと（未発表データ）と、小核試験で異常がないこと（試験管内試験）が実証されている[221]。Tavaresら[222]もまた、突然変異原性物質であるドキソルビシンを陽性対照として、小核を用いてプロポリスを研究した。彼らは、プロポリスが「ヤヌス」化合物のように振る舞い、高濃度では遺伝毒性があり、低濃度では化学予防効果があることを発見した。このことは、臨床試験に正しく外挿するために必要な適切な用量と試験モデルの重要性を示している。さらに、急性および亜急性動物毒性試験を実施したところ、非常に高い処理レベルであっても、EPP-AF®プロポリスはLD50用量（最大試験値3000mg/kg）に達しなかった[223]。ウィスターラット（1000 mg/kg）とウサギ（300 mg/kg）を用いた試験から得られた安全性データ、および米国食品医薬品局が提案した換算係数を用いて、ヒト試験用の用量を提案した[50]。

12.2. 臨床試験

サンパウロ大学リベイラオプレット医学部（FMRP/USP）において、標準化プロポリスエキス（EPP-AF®）375mg/日を5日間摂取した場合の安全性を評価するために、健康なボランティアを対象に臨床安全性試験が実施された。有害事象は観察されないであった。本試験では、標準化プロポリスエキス（EPP-AF®）375mg/日を5日間経口摂取しても急性毒性は認められないであった。HDLコレステロール値に有意な変動が認められたことから、心血管系に対するこの有益な効果を確認するためには、より多くの患者を対象とした更なる研究が必要とされている（未発表データ）。

さらに、この場合、さらに重要なこととして、薬物相互作用を評価するための研究が、主要な肝代謝酵素（チトクロームP450酵素-CYP）および輸送酵素Pgpを分析するために、カクテルアプローチを用いて実施された。その結果、この標準化されたプロポリス抽出物は、WHOによって確立された基準[53]に従って、薬物相互作用のリスクがなく、安全であることが示された。相互作用試験で試験されたプロポリスは錠剤で提供されたものであり、結果として、これらの結果は必ずしもプロポリスアルコール抽出物に外挿することはできない。

プロポリス製剤を用いて、イスラエルの子供（1～5歳）430人を対象に、プラセボエリキシルとチズキット（エキナセアエキス50mg/ml（Echinacea purpureaとE. angustifoliaプロポリスエキス50mg/ml、ビタミンC 10mg/mlを含む標準的な市販薬）を用いた無作為化、二重盲検、プラセボ対照の臨床試験が実施され、呼吸器感染症に対して良好な結果が得られた[224]。成人の喘息治療を対象とした別の臨床研究が行われた[204]。プロポリス水抽出物を用いたこの研究では、腫瘍壊死因子（TNF-aICAM-1,IL-6,IL-8,「保護」サイトカインであるIL-10を含む主要な炎症性サイトカインが減少し、プロスタグランジンE2,F2a、ロイコトリエンD4のレベルが有意に減少したことが示された[204]。

慢性腎臓病患者32人を対象とした無作為化二重盲検プラセボ対照臨床試験では、標準化プロポリスエキス（EPP-AF®）を1日500mg/日の経口投与で12ヶ月間投与した場合の安全性が示され、プロポリス群ではプラセボ群と比較して蛋白尿と尿中MCP1が有意に減少し、副作用は認められないであった[51]。健康なボランティアを対象に標準化プロポリスエキス（EPP-AF®）を用いて実施された別の臨床試験では、抗酸化活性を評価することを目的とした。健康なボランティアにおいて、酸化ストレスによって誘発される細胞損傷の減少が見られ、酵素的抗酸化能の増加、特にスーパーオキサイドディスムターゼ（SOD）に影響を与え、脂質過酸化とDNA酸化（8-OHDG）を減少させることが示された（論文投稿）。これらのデータは、プロポリスが細胞、組織、および人体に及ぼす重要な保護効果を示しており、老化、変性疾患、およびこれらの酸化プロセスに関与する他のいくつかの状態の影響を軽減している。

もう一つの関連する臨床試験は、Soroyら[225]によってデング出血熱患者を対象に実施された。彼らの二重盲検、無作為化、プラセボ対照試験では、プロポリス製品であるPropoelixTM（200mgカプセル2個、1日3回）が評価され、血小板数の改善とTNF-αの減少が示され、患者の入院期間の短縮が促進された。

現在のCOVID-19パンデミックは、治療法の選択肢としてプロポリスへの強い関心を促している。その結果、COVID-19患者の治療のためのブラジル産グリーンプロポリスエキス（EPP-AF）の臨床試験がブラジルで最近開始された（https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04480593）。

12.3. 投与量

プロポリスを用いた臨床試験は世界の様々な地域で実施されてきたが、そのほとんどが標準化されていないという限界があった。Berrettaら[50,51,53]はその多くを評価しており、最も一般的な用量は成人で500mg/日であった。EPP-AF®の場合を考えると、これまでの臨床データではプロポリス375～500mg/日の用量が支持されているが、非臨床試験では、それ以上の用量でも耐えられ、有用である可能性があることが示されている[211]。1日500mgの用量は、プロポリスエキス（乾燥物の11%w/v）30滴を1日3～4回、約100mlの水で希釈したもの、または同量のエキスを含むカプセルや錠剤を1日3～4単位で服用したものに相当する。予防目的では、通常、1日30滴または1カプセルを服用する。しかし、Soroyら[225]が安全に使用した1200mg/日の投与量を考慮すると、COVID-19のより重篤な症例では、500mg/日以上の投与量が有用である可能性がある。

13. プロポリスを使用したサプリメント・食品・衛生製品

プロポリスのエキスやスプレーは、薬草エキスや蜂蜜と組み合わせて使用されることが多く、現在ではブラジルのほぼすべての薬局で見かけるようになった。プロポリス製品の技術的な規則は、規制のカテゴリーや国によって異なる。ブラジル、カナダ、アメリカ合衆国、中国、韓国、日本、オーストラリア、欧州共同体などのいくつかの国では、すでにプロポリスに関する規制が設けられている[50]。

14. 現代の医薬品に頼るのではなく、栄養補助食品や他の天然の代替品の使用を検討する理由は何か？

プロポリスは、その健康への利点から、食品や飲料に広く使用されている。プロポリスには、アルデヒド、クマリン、ポリフェノール、ステロイド、無機化合物を含む何百もの天然化合物が含まれており、抗菌作用、抗酸化作用、抗炎症作用、免疫調節作用、抗腫瘍作用、抗癌作用、抗潰瘍作用、肝保護作用、心保護作用、神経保護作用など、幅広い生物学的・薬理学的特性を持っている[226]。健康産業では、プロポリスを含む天然物を医薬品の代替源として常に使用してきた[62]。プロポリスの成分が複雑に混ざり合っていることで、成分の個々の効果を分析しても明らかなように、相乗効果により、より大きな健康効果が得られる可能性がある[97]。

現代医学は、病気の生物や体に特異的かつ強力な影響を与える強力な薬剤に依存している。この戦略と適切な衛生対策は非常に効果的であることが証明されており、その結果、人間の寿命はほぼ一定に伸び、1900年以降は2倍以上の70歳以上になっている[227]。しかし、医薬品を承認するために実施されているシステムには、新しい選択肢を発見し、安全性と有効性を試験し、5～10年後にその使用の承認を得るために必要な長いリードタイムと多額の資金が必要なことなど、いくつかの欠点もある。高額な費用がかかることや、この延長されたプロセスでは、必要な投資を補うだけの製品が得られない可能性があるため、潜在的に有用な材料が利用できなくなる可能性がある。もう一つの問題は、現代医療は非常に高価であり、個人や国のコストは常に上昇しているということである。その結果、十分な医療を必要とするすべての人が利用できない可能性がある。これらの強力な医薬品の多くは、副作用も懸念されている。医師や患者は、薬の副作用のリスクと病気の影響を秤にかけなければならないことがよくある。また、いくつかの疾患では、有効な薬剤が利用できず、患者のケアは症状の緩和と感染症の結果に焦点を当てている。

現代の薬の代替品の中では、天然の健康食品の伝統的な使用がある。しかし、そのような製品は通常、医薬品として登録することができない。特許を取得するのが難しく、人々が簡単に購入したり、収集したりすることができるため、そのような製品を医薬品として認定するために必要な多額の投資は、補償されないことが多いのである。不思議なことに、現代の医薬品を開発するための戦略の一つは、天然物の成分を慎重に解剖し、どの成分が望ましい活性を持っているかを判断し、特許を取得して合成し、認可を得るための高額なプロセスを経ることであるが、そのような製品は特許を取得しているため、投資に対するリターンが得られる可能性がある。ブラジルのグリーンプロポリスはその一例で、抗がん作用のかなりの証拠がある[228,229]。このプロポリスは特許を取得していないが、その成分の一部は単離され、合成され、現在ではがん治療薬として特許を取得している[230]。ブラジルは、特にアジア諸国を中心にグリーンプロポリスを大量に生産し、輸出し続けているが、様々な特許を取得した成分は他国の企業の所有物である。

世界の一部の地域では、米国食品医薬品局（FDA）に相当するものが、特定の天然物を公式に「機能性食品」または他の類似のカテゴリーに分類している。このように、それらは健康に良いと信じている人々によって生産され、販売され、使用されることができる。機能性食品として分類されるためには、これらの機関は、それらが安全であり、健康上の利点が証明されていることを証明する必要がある [71,231]。この選択肢は、通常は安価であり、処方箋を必要としない代替品を提供する。具体的には、現在のCOVID-19パンデミックにおいて、高リスクグループの予防的治療としてプロポリスが提案されている[232]。

天然薬の資格認定と登録を支援するためには、ある程度の投資が必要であるが、これは企業が提供する場合もあれば、この種の投資の必要性を認識している政府のプログラムが提供する場合もあり、あるいはその両方が必要となる場合もある。ブラジルでは、サンパウロ州の研究機関（FAPESP）がPIPE（http://www.fapesp.br/pipe/）と呼ばれるプログラムを実施しており、農業用の天然有害生物防除代替品や「自然薬」製剤など、このような支援がなければ通常は開発されないと認識している製品について、小規模企業がこの種の研究に資金を提供するのを支援している。プロポリス製品に関する様々な研究プロジェクトがこのFAPESP PIPEプログラムから資金援助を受けており、創傷治癒・抗真菌製品[54,205,[214], [215], [216]、標準化されたプロポリス製剤の開発[54]、慢性腎臓病と糖尿病患者を対象とした安全性と有効性のテスト[51]などが行われている。

現代の医薬品は通常、有効成分が1つか数種類しかないのに対し、天然物は多くの有効成分を持つことができる。例えば、プロポリスには何百もの成分が含まれており[226]、その多くは様々なタイプの病気の治療に役立つ可能性を持っているか、特定の病気やその結果に対して様々な作用モードを持っている性質を持っている[233], [234], [235]。もう一つの考慮事項は、進行したCOVID19 [236]の深刻な結果となっている微小血栓症を予防するために使用される抗凝固剤のような強力な特異的効果は、過剰出血および他の危険な副作用を避けるために特定の用量を必要とする[237]ことであり、そのような薬剤は、ある種の血液疾患、または様々な心臓および血管障害を有する患者にとって安全な選択肢ではないということである。天然の抗凝固剤は、強い副作用なしに血栓症のリスクを減らすのに十分なレベルで、ある程度の保護を与えることができる。プロポリスは抗凝固作用を実証している[147]。

15. 結論

COVID-19パンデミックが引き起こしている多数の死亡者数やその他の種類の被害を考えると、SARS-CoV-2感染とその影響を回避または軽減するのに役立つ治療法を見つけることが急務となっている。プロポリスは、PAK-1阻害作用を含む抗炎症作用や免疫調節作用が証明されている。また、SARS-CoV-2ウイルスの宿主細胞侵入の主要標的であるACE2への付着もプロポリスによって抑制される。CAPE、ルチン、ケルセチン、カエンフェロール、ミリセチンを含むプロポリスの成分は、ACE2との強い相互作用をin silicoで実証している。カエンフェロールはTMPRSS2の発現を低下させた。これらの活性に加えて、プロポリスは主要な肝酵素や他の主要な酵素と相互作用することはない。世界保健機関（WHO）が採択した基準によれば、プロポリスは増強や不活性化のリスクなく主要な薬剤と同時に使用することができる。

プロポリスがSARS-CoV-2に特異的に影響を与えるかどうかを判断するには、さらなる研究が必要である。しかし、プロポリスはアレルギーを発症する可能性のある人を除いてリスクのない製品であることを考えると、この天然のハチ製品の生物学的活性が知られていることから、感染のリスクと影響を軽減し、治療の補助的な役割を果たすためにプロポリスを使用することを示唆している。