Innate Immune Suppression by SARS-CoV-2 mRNA Vaccinations: The role of G-quadruplexes, exosomes and microRNAs

www.authorea.com/users/455597/articles/552937-innate-immune-suppression-by-sars-cov-2-mrna-vaccinations-the-role-of-g-quadruplexes-exosomes-and-micrornas

Stephanie Seneff,Greg Nigh,Anthony M. Kyriakopoulos,Peter A McCullough

概要

SARS-CoV-2のmRNAワクチンは、COVID-19の公衆衛生上の危機が広く認識されるようになったことを受けて市場に投入された。感染症におけるmRNAワクチンの利用は前例がなかったが、絶望的な時代には絶望的な手段が必要であったようだ。mRNAワクチンは、スパイクタンパク質をコードするmRNAを遺伝子操作で改変したものを利用する。これらの改変は、mRNAを細胞防御から隠し、タンパク質の生物学的半減期を長くし、スパイクタンパク質全体の産生量を多くする。

しかし、実験的および観察的証拠から、ワクチンに対する免疫反応は、SARS-CoV-2感染に対する反応とは全く異なることが明らかになった。これから示すように、ワクチンによって導入された遺伝子組み換えが、このような差のある反応の原因である可能性が高い。

本論文では、ワクチン接種が自然感染とは異なり、I型インターフェロンシグナルに重大な障害を引き起こし、それがヒトの健康に多様な悪影響を及ぼすという証拠を提示する。我々は、免疫細胞が、重要なマイクロRNAとともにスパイクタンパク質を含むエクソソームを大量に循環放出し、遠隔地のレシピエント細胞のシグナル伝達反応を誘導するメカニズムを説明する。

また、タンパク質合成の調節制御や癌のモニタリングに重大な障害をもたらす可能性があることも明らかにした。これらの障害は、神経変性疾患、心筋炎、免疫性血小板減少症、ベル麻痺、肝臓疾患、適応免疫の低下、腫瘍形成の増加、DNA損傷に直接関連する可能性があることが示されている。

我々は、VAERSデータベースの有害事象報告から、我々の仮説を支持する証拠を示している。我々は、mRNAワクチンの包括的なリスク/ベネフィット評価では、COVID-19のパンデミックの状況下でも、公衆衛生への積極的な貢献は除外されると考えている。

引用元 Stephanie Seneff, Greg Nigh, Anthony M. Kyriakopoulos, er al)。 SARS-CoV-2 mRNA ワクチンによる自然免疫の抑制。G-quadruplexes、エクソソームおよびマイクロRNAの役割。Authorea. 2022年1月21日付。

---

これはプレプリントであり、査読を受けていない。データは予備的なものである可能性がある。

はじめに

ワクチン接種とは、非病原性物質を利用して自然感染の免疫反応を模倣し、それによって病原体にさらされた場合に免疫を付与する試みである。この目的は、主に全生物ワクチンと弱毒化ウイルスワクチンの使用によって追求されてきた。サブユニットワクチンと呼ばれるウイルスの断片やそのタンパク質産物の使用は、技術的にさらに困難である。いずれにせよ、ワクチン接種キャンペーンを展開する際の暗黙の前提は、ワクチンが「良性感染」の効果をもたらし、将来の曝露に対する免疫系を活性化する一方で、実際の感染による健康への影響を回避するというものである。

COVID-19に関連するこの分野の文献の多くは、mRNAベースのワクチン接種に対する免疫反応が自然感染と似ていることを示唆している。プレプリント研究では、「自然感染と比較して、BNT162b2 [Pfizer]ワクチンの免疫原性が高い “ことが判明している。著者らは、量的な違いはあるものの、多くの質的類似点があることを発見した[2]。ジャーveri（2021）は、mRNAワクチンは、ウイルスに感染した場合と同じように、「自然感染と同じようにタンパク質が産生され、提示される」ことを示唆している[3]。米国疾病管理予防センター（CDC）は、記憶B細胞の産生に加えて、先行感染対ワクチン接種によって生じた抗体価に基づいて、ワクチン接種に対する免疫応答が自然感染に対する応答と類似していると主張するために、事例を作成している[4]。ワクチン接種と自然感染に対する体液性免疫反応の類似性は、ワクチン接種後の感染リスクの低減を示す試験データおよび観察データと相まって、集団ワクチン接種キャンペーンを正当化する根拠となっている。

この論文では、mRNAワクチンの接種が、ワクチン接種とは異なる一連の生物学的事象を引き起こすだけでなく、短期および長期の免疫能と正常な細胞機能に対して明らかに逆効果であることを示唆する科学文献を検討する。これらのワクチン接種は、がんモニタリング、感染制御、細胞のホメオスタシスに関連する重要な経路をダウンレギュレートすることが明らかにされている。また、高度に改変された遺伝物質が体内に導入される。medRxivのプレプリントでは、SARS-CoV-2の感染に対する免疫反応と、COVID-19に対するmRNAワクチンに対する免疫反応との間に著しい違いがあることが明らかにされている[5]。末梢樹状細胞の遺伝子発現差解析により、COVID-19患者ではI型とII型インターフェロン（IFN）の両方が劇的にアップレギュレートされたが、ワクチン接種者ではそうでないことが明らかになった。COVID-19患者では、循環造血幹細胞および前駆細胞（HSPC）の拡大が見られたが、ワクチン接種後にはこの拡大が顕著に見られなくなったことも注目すべき点であった。COVID-19患者で観察された循環血漿芽球の顕著な拡大も、ワクチン接種者では観察されなかった。これらの観察結果はすべて、後述するように、ワクチンがI型IFNシグナル伝達を積極的に抑制しているという考えと一致している。この論文では、ワクチンによって誘発されるI型IFNの抑制と、それが関連するシグナル伝達カスケードに及ぼす無数の下流効果に、限定はしないが、広範囲に焦点を当てることにする。

長期前臨床試験と第I相安全性試験は第II相試験と組み合わされ、その後第II相試験と第III相試験が組み合わされた[6]。そしてそれらでさえ早期に中止されプラセボ群に注射が行われたので、我々は安全シグナルについて薬事モニタリングシステムと公表された報告に注目する。そうしてみると、その証拠は心強いものではないことがわかる。現在採用されているmRNAワクチン接種に対する生物学的反応は、明らかに自然感染とは異なる。この論文では、その違いを説明し、mRNAワクチン接種によって始まると予想される免疫学的および病理学的プロセスを説明する。また、これらの生理的作用の根底にあるものを、実現した病的状態およびまだ観察されていない病的状態の両方と結びつけて考える。我々は、ブースターワクチン接種の大規模な実施は、これらの問題のすべてをより深刻にし、これらの繰り返し行われるブースター接種を受ける世界人口の抗ウイルス免疫能力および生来の癌モニタリング・防御をさらに侵食することになると予想している。

ファイザー／バイオテックとモデルナが製造するmRNAワクチンは、COVID-19の蔓延を抑制するために不可欠なものと考えられてきた。世界各国は、パンデミックの進行を食い止め、平穏な生活を取り戻すために、大規模なワクチン接種プログラムを積極的に推進している。しかし、これらの予防接種が予期せぬ形で害を及ぼす可能性、特に重症化から身を守る効果を上回る害を及ぼす可能性については、各国ともあまり考慮していないようである。ワクチンによって誘導された抗体は、2回目の接種後、わずか3週間から10週間で消失することが明らかになり [7]、人々は定期的なブースター注射を受けるよう勧められている [8]。また、デルタ株やオミクロン株のように、スパイクタンパク質の変異により、ワクチンによる抗体誘導に抵抗性を示すものが急速に出現していることが明らかになっている[9]。さらに、ワクチンは病気の蔓延を防ぐものではなく、症状の重篤度を軽減するとしか言いようがないことも明らかになっている[10]。2021年9月上旬に米国で行われた68カ国294郡のワクチン接種率とCOVID-19感染率を比較した研究では、両者の間に相関は見られず、これらのワクチンは病気の蔓延を防いでいないことが示唆されている[11]。症状の重症度については、イスラエルの病院で発生し、完全にワクチンを接種した入院患者5人が死亡したことで示されたように、この側面さえも疑われ始めている[12]。同様に、Brosh-Nissimov et al 2021）は、イスラエルの17の病院のうち、完全にワクチンを受けた患者の34/152（22%）がCOVID-19で死亡したと報告している[13]。

ワクチンは疾病の蔓延をほとんど制御せず、その有効性は時間とともに衰えるという証拠が増えているため、ワクチンがどの程度害を及ぼす可能性があるかを評価することがさらに不可欠になっている。SARS-CoV-2修飾スパイク蛋白質mRNAワクチン接種が生物学的影響を及ぼすことは疑う余地がない。ここでは、それらの影響を自然感染と区別し、それらのユニークな生物学的影響とワクチン接種に関連する病態とを結びつけるメカニズム的な枠組みを確立することを試みる。mRNAワクチン接種によって引き起こされる生物学的影響と有害な結果との因果関係は、大多数の症例で確立されていないことを認識する。

2.インターフェロン：その概要とがんサーベイランスについて

1957年に発見されたインターフェロン（IFN）は、弱毒化したA型インフルエンザウイルスにさらされた細胞が、その後の生きたウイルスによる感染を「妨害する」物質を作り出すという認識から、その名が付けられた[14]。IFNは、現在、免疫調節タンパク質の非常に大きなファミリーを形成していると理解されており、各IFNが相互作用する受容体に基づき、I型、II型、III型と呼ばれる3つのタイプに分けられている。I型IFNにはIFN-αとIFN-βがあり、この型が最も多様で、さらに17のサブタイプに分類される。IFN-αだけでも現在13のサブタイプが確認されており、それぞれはさらに複数のカテゴリーに分類されている[15]。タイプI IFNは、複数のストレス要因に対する免疫応答において強力な役割を担っている。実際、ウイルス感染症、固形癌、骨髄増殖性疾患、造血器新生物、多発性硬化症などの自己免疫疾患など、様々な疾患や状態の治療オプションとして臨床治療的価値を享受してきた[16]。

IFNは、非常に複雑で多様な役割を担っており、IFN制御因子ファミリー（IRFs）の活性を通して調整・制御されている[17]。IRF9は、抗ウイルス、抗腫瘍免疫、遺伝子制御に最も直接的に関与している[18-20]。

これと密接な関係にあるのが、形質細胞様樹状細胞（pDC）である。この細胞は、血液中を循環しているが、ウイルス感染時には末梢リンパ系器官に移動する稀なタイプの免疫細胞である。この細胞は、ウイルス感染に対して、I型IFNの産生を急激に増加させることで反応する。リンパ節で放出されたIFN-αは、B細胞をプラズマブラストへと分化誘導する。その後、インターロイキン-6（Il-6）がプラズマブラストを誘導し、抗体を分泌するプラズマ細胞へと進化する[21]。このように、IFNはウイルス増殖の制御と抗体産生の誘導の両方に重要な役割を担っている。IFN-αは、マクロファージやリンパ球がウイルスや細菌に感染したとき、あるいは腫瘍細胞に遭遇したときに産生され、抗ウイルスおよび抗がん免疫の中心的役割を果たしている。IFN-αは、C型肝炎の合併症（23)サイトメガロウイルス感染（24)慢性活性エボラウイルス感染（25)ヘルペスウイルス感染に伴う炎症性腸疾患（26）などの治療において、強力な抗ウイルス療法としての役割が認識されている。

I型IFNシグナル伝達の障害は、多くの疾患リスク、特にがんに関連しており、I型IFNシグナル伝達は、腫瘍抑制遺伝子であるp53や様々なサイクリン依存性キナーゼ阻害剤のアップレギュレーションを通じて、一部、細胞周期を停止させることによってウイルスとがん細胞の両方の増殖を抑制する[27,28]。IFN-αはまた、腫瘍細胞による主要組織適合性（MHC）クラス1抗原の提示を誘導し、癌モニタリングシステムにより容易に認識されるようにする[29,30]。IFN-αの産生によって開始される抗がん作用の範囲は驚くべきものであり、直接的および間接的なメカニズムによって起こるものである。直接効果には、細胞周期の停止、細胞分化の誘導、アポトーシスの開始、ナチュラルキラー細胞やCD8+T細胞の活性化などがある[31]。

間接的な抗がん作用は、主にヤヌスキナーゼのシグナルトランスデューサーおよび転写活性化因子（JAK/STAT）経路の遺伝子転写活性化を通じて行われる。IFN-αが細胞表面に結合すると、チロシンキナーゼであるJAKが起動し、STAT1およびSTAT2をリン酸化する[32]。一旦リン酸化されると、これらのSTATは、癌遺伝子制御や他の細胞機能において幅広い役割を果たすIRFsファミリーの1つであるIRF9と複合体を形成する[33]。IFN刺激遺伝子因子3（ISGF3）と名付けられたこの複合体は、細胞核に移動して少なくとも150の遺伝子の発現を促進する[31]。IRF9は、IFN-αの抗増殖作用の活性化を担うIRFファミリーの主要メンバーであることが示唆されており、それは腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（TRAIL）受容体1および2（TRAIL-R1/2）への結合を介しているようである[34]。IRF7は、ウイルス感染に対する反応の初期に関与するIRFファミリーのもう一つの重要なメンバーである。通常、発現量は少ないが、ISGF3によって強く誘導される。IRF7はまた、セリンリン酸化と核内移行を受け、免疫応答をさらに活性化する。IRF7 は半減期が非常に短いため，その遺伝子誘導過程は一過性であり，おそらく IFN の過剰発現を避けるためであろう [35]．

TRAILがIRF9に結合すると、デスレセプター4（DR4）またはDR5のリガンドとして作用し、カスパーゼ8とカスパーゼ3の産生を含むイベントのカスケードを開始し、最終的にアポトーシスを誘発する [36]．IFN-αまたはIRF9のいずれかが抑制され、その結果TRAIL-Rと結合しないことによるこの経路の調節障害は、いくつかの血液学的悪性腫瘍と関連しており[37]、メラノーマ、大腸がん、リンパ腫の動物モデルにおいて転移能を高めることが示されている[38]。

IFN-αは、癌を抑制する幅広い役割を開始し、組織化する。Dunn et al 2005）は、IFN-αが癌の免疫抑制に積極的な役割を果たし、その作用部位は、腫瘍モニタリングのためにIFN-α結合を介して「プログラム」された造血細胞であることを示した[39]。特にI型IFNとIRF7およびIRF9との間の極めて複雑な相互作用を介して、多くの抗増殖作用が実行されることになる。このことは、多数の癌種に関連する腫瘍の成長および／または転移の増加を示す多数の研究によって証明されている。

例えば、（Bidwell et al 2012）は、800人以上の乳がん患者のうち、IRF7制御遺伝子の発現が高い人は、骨転移が有意に少ないことを見出し、最もリスクの高い人を予測する方法として、これらのIRF7関連遺伝子シグネチャの評価を提案している[40]。IRF7の発現を標的とするマイクロRNAの使用は、試験管内試験で乳がん細胞の増殖と浸潤を促進することも示されている[41]。（Zhao et al 2017）は、前立腺がんのマウスモデルにおける骨転移に関連して、IRF7に同様の役割を見いだした[42]。IRF7発現の背後にある抗癌メカニズムに関して、Solis et al 2006）は、IRF7が複数の遺伝子の転写およびTRAIL、IL-15,ISG-56およびCD80を含むそれらの下流タンパク質産物の翻訳を誘導することを見出し、治療上の意味を指摘した[43]。

IRF9もまた、癌のモニタリングと予防において中心的な役割を担っている。Erb et al 2013）は、IRF9が、IL-6が前立腺癌細胞に対するIFN-αの抗増殖効果を増大させるメディエータであることを実証した[44]。Tian et al 2018）は、IRF9が急性骨髄性白血病細胞の増殖およびアポトーシスの回避の重要な負のレギュレータであることを明らかにした[45]。それは、少なくとも部分的には、マスター制御タンパク質p53のアセチル化を通じて、そうする。

IFN-αとIRF9の両方は、BRCA2遺伝子が完全に機能している場合のがん予防特性にも必要であるらしい。MittalとChaudhuri（2009）は、First AACR International Conference on Frontiers in Basic Cancer Researchで発表した研究において、BRCA2の発現がIFN-α産生の増加をもたらし、以前に述べたIRF9,STAT1およびSTAT2の複合化をもたらすシグナル伝達経路を増強することを初めて示す一連の実験について述べている[46]。その2年前、Buckley et al 2007）は、BRCA1とIFN-γの組み合わせが、I型IFNとそれに続くIRF7,STAT1,およびSTAT2の産生を促進することを立証した[47]。このように、極めて重要な癌制御遺伝子であるBRCA1とBRCA2は、それぞれIRF7とIRF9に依存して、その保護作用を発揮していることが明らかになった。

Mamoor（2020）は、プレプリントで、SARS-CoV-1（マウス）またはMERS-CoV（試験管内試験 ）に感染するとIRF7とIRF9の産生が増加することを遺伝子発現解析によって明らかにし、著者は、「IRF7とIRF9がヒトにおけるSARS-CoV-2の免疫防御に重要かもしれない」と推測している。[48] この推測は、IRF7またはIRF9のいずれかの欠乏がCOVID-19の重症化リスクを著しく高めるという説得力のある証拠を検討したRasmussen et al 2021）によっていくらか確認されている [49]．重要なことに、彼らはまた、I型IFNがCOVID-19疾患に対する防御免疫において特異的に重要な役割を果たすことを示唆する証拠、すなわち、インフルエンザを含む他のほとんどのウイルス性疾患において複数のサイトカインによって共有される役割を指摘する。

以下に詳述するように、SARS-CoV-2スパイクタンパク質は、宿主細胞のエクソソーム産生を修飾する。スパイク遺伝子を細胞にトランスフェクションし、その後スパイクタンパク質を産生すると、その細胞は、IRF9の産生を抑制する一方で一連の炎症性遺伝子転写物を活性化するマイクロRNAを含むエクソソームを生成する[50]。これらのワクチンは、スパイクタンパク質の大量かつ継続的な産生を誘発するように特別に設計されているため、その意味は不吉である。上述したように、IRF9の阻害は、TRAILとその調節作用および下流のアポトーシス誘導作用のすべてを抑制することになる。エクソソームのマイクロRNAによるIRF9の抑制は、上記のようにその活性をその分子に依存するBRCA2遺伝子活性のがん保護効果を損なうことも予想される。BRCA2が関連するがんには、女性では乳がん、卵管がん、卵巣がん、男性では前立腺がん、乳がん、小児では急性骨髄性白血病などがある[51]。

ワクチン接種は、IRF7とSTAT2の両方を抑制することも実証されている[52]。これは、上記のようなBRCA1のがん保護作用を妨害することが予想される。BRCA1活性の低下に関連する癌には、女性では乳癌、子宮癌、卵巣癌、男性では前立腺癌と乳癌、そして男女ともに膵臓癌のわずかな増加がある[53]。

BRCA1発現の低下は、癌と神経変性の両方に関連している。BRCA1は、乳がん感受性遺伝子としてよく知られている。BRCA1は、SIRT1の活性化とそれに続くアンドロゲン受容体の抑制を通じて、乳がん細胞の増殖を抑制する[54]。（Suberbielle et al 2015）が行った研究では、アルツハイマー病患者の脳でBRCA1の減少が確認された[55]。さらに、マウスの歯状回で神経細胞のBRCA1をノックダウンした実験では、神経細胞の収縮やシナプス可塑性、学習・記憶における障害とともに、DNA二本鎖切断が増加することが示された。

血管免疫芽球性T細胞リンパ腫と呼ばれるまれな形態のリンパ腫と診断された患者に関する最近のケーススタディで詳述された分析では、BNT162b2 mRNAブースターショット投与後にリンパ腫病変が予想外に急速に進行したという強い証拠が示されている[56]。ワクチンブースター直前と21日後に実施した代謝亢進病変の詳細な指標を比較すると、ワクチン投与後は5倍に増加し、ブースター後の検査では、右わきの下の活性度が左わきの下に比べて2倍も高いことが明らかになった。ワクチンは右側に注射されていた。この点で、リンパ系悪性腫瘍がTRAIL R1の抑制と関連していることは指摘に値する[57]。

がん予防のためにBRCA1/2が最適に機能することの重要性が普遍的に認識されており、さらにがんモニタリングのためのTRAILシグナル伝達経路の中心的役割を考えると、ワクチン接種とその後のスパイクタンパク質生成によるIRF7およびIRF9の抑制は、注射された集団における長期のがん制御にとって極めて懸念すべきことだ。

3. mRNA ワクチンの設計における考慮点

SARS-CoV-2 mRNAワクチンの開発者の第一の目標は、スパイクタンパク質に対する強固な抗体反応を引き起こすことができるワクチンを設計することであった。スパイクタンパク質に対する既存の抗体によって、侵入したウイルスは宿主細胞に侵入する前に速やかに除去され、病気のプロセスを早期に停止させることができるはずである。Kaczmarekらによって簡潔に述べられているように、Kaczmarek et. (2021) [58]:

「ワクチン接種の理論的根拠は、すべての被接種者にSARS-CoV-2ウイルスに対する防御を提供することだ。この保護は、免疫系を刺激してウイルスに対する抗体を産生させ、記憶とウイルスを撃退する能力を長期間保持するリンパ球を発達させることによって達成される。」

ワクチンは一般に、接種直後に免疫細胞を注射部位に移動するように刺激するために、アルミニウムやスクワレンなどのアジュバントに依存している。mRNAワクチンの開発の歴史では、当初、mRNA自体がアジュバントとして機能することが期待されていた。これは、ヒトの細胞がウイルスRNAを異物として認識し、TLR3,TLR7,TLR8などのtoll like receptorを介したI型IFNのアップレギュレーションにつながるためである[59]。

しかし、時間とともにこのアプローチには問題があることが明らかになった。激しい反応はインフルエンザのような症状を引き起こし、IFN-αはカスケード反応を起こし、免疫反応を引き起こすのに十分な量のスパイクタンパク質を生成する前にメッセンジャーRNAを破壊する可能性があるからである[60]。スパイクタンパク質をコードするmRNAを特定の方法で改変することで、ヒトの細胞を騙して無害なヒトRNAとして認識させることができることが実験的に明らかになったとき、突破口が開かれたのである。Karikóらによるブレイクスルー論文（2005）は、一連の試験管内試験実験を通じて、すべてのウリジンをシュードウリジンに置き換えるようなmRNAの単純な改変が、外来mRNAに対する自然免疫の活性化を劇的に低下させることを実証した[59]。（Andries et al 2015）はその後、ウリジンの代替物としての1-メチルシュードウリジンが、シュードウリジンよりもさらに効果的で、mRNAに対するTLR反応を本質的に消失させ、血液由来の樹状細胞の活性化を阻止できることを発見した[61]。この改変は、市販されているmRNAワクチンのいずれにも適用されている[62]。

mRNAワクチンの設計を成功させるためには、RNAをRNA分解酵素による分解から保護できるよう、慎重に構築された粒子にmRNAをカプセル化する必要がある。mRNAワクチンは、コレステロールとリン脂質を含む脂質ナノ粒子として処方され、修飾されたmRNAは、エンドソームからの早期放出を促進し、さらに分解から保護するために高度に修飾されたポリエチレングリコール（PEG）脂質バックボーンと複合化される[63]。宿主細胞の既存の生物学的機構は、脂質粒子のエンドソームへの取り込みを通じて、mRNAからのタンパク質の自然な産生を促進するために利用される[63]。合成カチオン性脂質は、免疫細胞を注射部位に引き寄せ、エンドソームからの脱出を促進するアジュバントとして働くことが実験的に示されているため、同様に添加される。（De Beuckelaer et al 2016）は、「カチオン性リポプレックスにmRNAを凝縮すると、mRNAワクチン誘発T細胞応答の効力が数桁増加する 」と観察している。[60]別の重要な修正は、彼らがゲノム内の2つの隣接するアミノ酸のコードをプロリンのコードに置き換え、スパイクタンパク質が前駆安定化形態にとどまるようにしたことである[64]。

スパイクタンパク質のmRNAは、グアニンメチル化キャップ、ヒトタンパク質のものからコピーした3’および5’非翻訳領域（UTR)そして最後にRNAをさらに安定化させる長いポリ（A）テールを追加して、さらに「ヒト化」されている[65]。特に、赤血球が大量に産生するグロビンの3’UTRは、mRNAを分解から守り、持続的なタンパク質生産を維持するのに非常に有効であるため、研究者は巧みにこれを選択した[66]。赤血球には核がないため、一度破壊されたmRNAを置き換えることができないので、これは予想されたことだ。モデルナとPfizerの両ワクチンは、グロビンの3’UTRを採用し、Pfizerのワクチンは、わずかに修正されたグロビンの5’UTRも使用している[67]。De Beuckelaer et al 2016）は、このような改変の結果を次のように適切に要約している。「過去数年間、IVT [試験管内試験 transcribed] mRNAの調製方法における技術的改善（5′Cap修飾、最適化されたGC含量、改善されたpolyAテール、安定化UTR）は、現在、mRNAの直接生体内試験投与後数日にわたってタンパク質発現が達成できるほどIVT mRNAの安定性を高めている。」[60]

しかし、合成mRNAの最適化されたアナログキャップ形成は、必然的にレシピエント細胞にキャップ依存の長期翻訳を受けさせ、細胞生理学の恒常的な要求を無視することになる[65]。キャップ2’Oメチルトランスフェラーゼ（CMTR1）によって行われるキャップ2’Oメチル化は、IFN誘導RNA結合タンパク質による認識を防ぐために、mRNAを「自己」としてマークするモチーフとして機能している[68]。このように、キャップ2’Oメチル化モチーフを備えたワクチン中のmRNAは、ウイルスの侵入として検出されるのを回避しているのである。さらに、ワクチン中のmRNAの強固なキャッピングと合成メチル化に従って、細胞が単一かつ人工的な翻訳へのアプローチを行う圧倒的な原動力は、パターン認識受容体（PRR）の正常なシグナル伝達ではなく、差動による疾患の進行と根本的に関連している[69]。

mRNAの翻訳を制御する制御過程は非常に複雑であり、mRNAワクチンの文脈では非常に邪魔になる[65,69]。簡単に言えば、mRNAワクチンは、RNA型ウイルス感染に対する自然免疫反応を迂回するステルス戦略によって、意図した目標（すなわち、改変スパイクタンパク質の産生）を達成するためのものである。注入されたmRNAを含む脂質ナノ粒子は、エンドサイトーシスによって細胞内部に運び込まれる。mRNAは脂質キャリアから逃れ、リボソームへと移動する。そこで、特定のタンパク質を長期間にわたって大量に生産するための最適化されたプログラムに従って、最終的なタンパク質産物に大量に翻訳される。これらの修飾されたスパイクタンパク質は、次に3つの主要な経路のうちの1つをたどる。あるものはタンパク質分解され、断片はMHCクラスI分子と結合し、細胞傷害性T細胞に表面提示される。第二の経路は、同じスパイク断片がMHCクラスII分子と結合して細胞表面に移動し、T-ヘルパー細胞を活性化するものである。最後の経路は、可溶性スパイクタンパク質が細胞からエクソソームとして押し出され、B細胞活性化スパイク特異的抗体によって認識される経路である[70]。

結局、ナノ脂質と高度なmRNA技術を利用することで、外来性RNAに対する通常の免疫反応を回避し、外来性RNAウイルスに対する強力な抗体反応を作り出すことができる。

4. ワクチンmRNAにおけるGCの濃縮と潜在的なG4（pG4）構造

最近、我々のチームのメンバーは、合成mRNA転写物のコドン最適化により、SARS-CoV-2ワクチンのmRNAの二次構造に変化が生じる可能性について調査した[71]。この研究により、ワクチンのmRNAでは、ネイティブのSARS-CoV-2 mRNA（36%）と比較して、GC含有量が著しく増加している（Pfizer BNT 162b2 で53%、モデルナ mRNA-1273で61%）ことが示された。mRNAのGC含量の濃縮は、SARS-CoV-2ワクチンに使用されるmRNAの開発中に、二次構造、特にG四重鎖形成への影響を判断せずに行われたコドン最適化の結果であると思われる[71]。

コドン最適化とは、バイオテクノロジーによる治療薬（SARS-CoV-2ワクチン接種に使用された合成mRNAなど）に使用される、コドンを最適化した合成ポリペプチドおよびタンパク質の生産を指す。mRNAテンプレート内のコドンの割り当てを変更することで、生産されるポリペプチドおよび/またはタンパク質の量が劇的に増加する[72]。また、同義コドンの置換は、生成されるタンパク質の多機能制御および構造的役割に変化をもたらす[73]。このため、コドンの最適化は、その結果、タンパク質産物の二次構造に乱れを生じさせ、その結果生じる免疫原性、有効性および機能に壊滅的な影響を与える可能性があるため、注意が必要である[74,75]。特に、様々なヒトの病気は、同義塩基多型の結果である[76]。

熱ショックタンパク質70のmRNA転写産物のGCリッチバージョンとGCプアバージョンを同一のプロモーターとUTR配列のコンテキストで構成した実験では、GCリッチ遺伝子はGCプア対応物よりも数倍から百倍以上効率的に発現することが見いだされた[77]。これは、哺乳類の優先コドンのすべてが、3位にGまたはCヌクレオチドを持っていることが一因である。また、3’UTRのAUリッチエレメントがmRNAを不安定にすることはよく知られている[78]。特に懸念されるのは、ワクチンmRNAのGC濃縮コンテンツが、これらの構造における潜在的なG四重鎖（pG4）形成の能力を高める結果となり、これが神経疾患の発症を引き起こす可能性があるという事実である[79]。驚くべきことに、ヒトプリオンタンパク質（PrP）の遺伝子配列には複数のG4形成モチーフがあり、それらの存在は、PrPがミスフォールド型であるPrPscに変換する際の最初のミッシングリンクを形成している可能性がある[80]。PrPが自身のmRNAに結合することは、タンパク質をミスフォールドさせる種となる可能性がある。この観察は、スパイクタンパク質がプリオン様特性を持つという事実に照らして、特に重要である[81]。

一方、哺乳類では、GC含量は翻訳効率の調節やmRNAの発現制御に重要な役割を担っている[82]。特に翻訳開始時には、シス作用mRNA要素として働くGC含量は、43Sリボソーム前駆体結合とその後の真核生物翻訳開始因子4EF（eIF4F）複合体の組み立てをオーケストレーションしている。このシステムの代表的な例として、αおよびβグロビンのmRNAの5’非翻訳領域（5’UTR）を介した発現制御が挙げられる[82]。

一方、RNA中のpG4の存在は、ヘリカーゼなどのG4 RNA結合タンパク質の制御の鍵となる決定因子として、癌生物学に関与している[83]。一般に、RNA中のG四重鎖は、a) 遺伝子発現の制御、b) リボ核タンパク質の局在、c) mRNAの局在、d) がん原遺伝子の発現の制御において必須の役割を担っているとされている[84]。

SARS-CoV-2に関しては、スパイクタンパク質をコードするRNAを含むSARS-CoV-2のpG4と、ヒトのトランスクリプトームで配列決定されたものとの間に圧倒的な類似性があることが、関連する研究で明らかにされている[85]。したがって、スパイクタンパク質をコードする配列に多くのpG4構造を有するワクチン中の合成mRNAは、自然SARS-CoV-2感染中のG4に富むRNAによる潜在的な転写後の無秩序を増幅し複合化すると推論することができる。さらに、ヒト感染細胞においてSARS-CoV-2 RNAゲノムに結合する主要な細胞性タンパク質である細胞性核酸結合タンパク質（CNBP）は、SARS-CoV-2 RNAゲノムのポジティブセンスおよびネガティブセンス両方のテンプレート鎖によって形成されるSARS-CoV-2 G4sに結合してその展開を促進する[86]。ワクチンmRNAのG4に対するCNBPの同様の調節と、アンフォールドしたコンフォメーションへのG4平衡の促進は、miRNA結合に有利な条件を作り出し、これはmiRNA依存の遺伝子発現調節に直接影響を与えるだろう[87]。

ネガティブセンスRNAは、コロナウイルス（SARS-COV-2を含む）の非構造タンパク質によって形成されるレプリカーゼ転写酵素複合体（RTC）によって、複製と転写に効率をもたらすために生成される中間分子である[88,89]。しかしながら、このことは、ワクチン接種に関連する別の深刻な合併症を引き起こす可能性がある。C型肝炎のような他のネガティブセンスRNAウイルスとの共感染[90]、またはワクチン接種期間と同時期の他のコロナウイルスによる感染は、合成mRNAからネガティブセンス中間体を再生するためにRTCの必要な機械を提供し、したがってネガティブセンステンプレートによるpG4sの存在を増幅させるであろう。その結果、さらにエピトランスフォームの調節異常が生じるだろう[91]。

ここまでの話題をまとめると、ワクチンmRNA中のGC含量が濃縮されると、必然的にワクチン中のpG4含量が増加することになる。これは、次に、G4-RNA-タンパク質結合系の調節障害と、自然免疫の抑制、神経変性、および悪性形質転換を含む広範な潜在的な疾患関連細胞病態につながるであろう[83]。

ワクチン接種によって導入された新しいG4構造の出現による翻訳後の調節に関して、もう一つ、miRNAの調節とpG4に関連する重要な問題が生じている。miRNAの構造では、数百のpG4配列が同定されている[92]。miRNAは、mRNAの3′-5’配列にあるそれぞれのターゲットに結合する際、そのアンフォールドしたコンフォメーションにおいて、それぞれのターゲットmRNAの翻訳を停止させる。一方、G4リガンドが存在する場合は、標的mRNAの翻訳が促進される[93]。さらに、これらのG4の少なくとも1つと結合すると予測される特定のmiRNAが少なくとも521個存在するため、膨大な数の推定miRNA結合部位がmRNAの3′ UTRのG4と重なっている。全体として、44,294のG4-miRNA潜在的結合部位が、ヒトにおける推定上の重複G4を有することが追跡されている[87]。

他の場所で述べたように、ワクチンmRNAの細胞内翻訳の間、eIF4Gに結合したeIF4Aのような、多くのRNA結合タンパク質ヘリカーゼの集合体の増加が起こる[65]。合成mRNAにおける増加したpG4の存在は、RNA結合タンパク質及びmiRNAの結合を潜在的に増幅させることができる。G4結合に大きな親和性を持つタンパク質成分（ヘリカーゼ）のこのような形の分子クラウディング[87]は、通常miRNA調節に利用できるG4を結合するRNA結合タンパク質の数を減少させるだろう。このようにRNA結合タンパク質が失われると同時に、G4sに結合することで調節可能なmiRNAも失われるため、細胞内に存在するmiRNAの翻訳調節が劇的に変化し、それによって癌遺伝子発現の必須調節が阻害される可能性がある。例として、p16依存的なp53腫瘍抑制タンパク質の制御が挙げられる[87,94]。

このプロセスは非常に複雑でありながら、細胞のホメオスタシスに等しい。そこで、再度、要約することにする。ワクチンmRNA中のGC含量が増加することで予想されるように、pG4が蓄積すると、翻訳イベント中に利用できる潜在的なG4構造が増加するという効果があり、これはmiRNAの転写後制御に影響を与える可能性がある。このことは、様々な癌に関連する癌遺伝子の発現を促進するか、あるいは細胞をアポトーシスや細胞死に追いやることになる[95]。この論文で先に述べた事例は、これらの注射が濾胞性B細胞におけるリンパ腫の進行を促進させるという仮説を強く支持している[56]。

miRNAの結合認識パターンは、その標的領域に対して不完全に相補的であり、このため、1つのmiRNAが多数の異なる標的に影響を与えることから、「マスターレギュレーター」と呼ばれる[92]。ワクチンのmRNAに含まれる多数のpG4は、予想通りデコイとして作用し、ヒトタンパク質の発現を制御するという通常の機能からmiRNAの注意をそらすだろう。ワクチンによるG4ターゲットの増加は、遺伝子発現を制御するためにヒトで発現されたG4をターゲットとするmiRNAの利用可能性を低下させるだろう。これは、心血管病理学[96]、神経変性の発症[97]、および/または癌の進行[98]に関与しているmiRNAの発現のダウンレギュレーションにつながる可能性がある。

エピトランススクリプトマシン内のほとんどの点で、miRNAは翻訳抑制に関与している。細胞の正常な維持に不可欠な一例は、p53の物理的な負の制御タンパク質であるマウスダブルミニッツ2ホモログ（MDM2）のものである。P53自体は、細胞の腫瘍抑制ネットワーク遺伝子のマスターレギュレーターと考えられている。P16 は多くの miRNA の発現を制御し、miR-141 と mIR-146b-5p が MDM2 mRNA に結合することにより、MDM2 の負の制御を誘導し、DNA 損傷イベント時に p53 のユビキチン化と細胞生存の促進を可能にする [94]．p53のMDM2抑制を制御するmiRNAのデレギュレーションは、予想通り、癌へのリスク上昇につながるだろう[99]。

5. I型IFNとCOVID-19

I型IFNは、ウイルス感染との戦いに不可欠な役割を果たし、I型IFNシグナルの欠損は、複数の研究においてCOVID-19による予後不良と関連付けられてきた。これらの症例は、しばしばI型IFNに対する自己抗体と関連している。以下に検討するように、I型IFNは、特に疾患過程のごく初期に投与された場合、重症のCOVID-19の治療にある程度の成功を収めて使用されてきた。もし、上記で論じたように、mRNAワクチンがI型シグナル伝達を妨害するならば、最初のワクチン接種後の2週間、抗体反応が開始される前に、COVID-19に対する感受性が増加する可能性がある。

ウイルスに感染した細胞は、多くのパターン認識受容体（PPR）を介してウイルス複製の存在を検出する。PPRは、ウイルス複製中にしばしば形成される異常なRNA構造を感知するセンチネルとしての役割を担っている。これらの受容体はオリゴマー化することで反応し、その後I型IFNを誘導し、最終的にウイルス増殖の抑制に関与する多くのタンパク質をアップレギュレートする[100]。

フランス、パリの研究者による、様々な重症度を持つ50人のCOVID-19患者のコホートを含む多人数の研究により、重症の患者はI型IFN反応が非常に損なわれていることが明らかになった[101]。これらの患者は、本質的にIFN-βを持たず、低いIFN-α産生および活性を有していた。これは、持続的な血中ウイルス量と、高レベルの腫瘍壊死因子α（TNF-α）およびIL-6によって特徴づけられる炎症反応の悪化と関連していた。著者らは、タイプI IFN療法を潜在的な治療オプションとして提案した。米国の複数の研究者による論文でも、重症のCOVID-19患者において、ケモカインの上昇とIL-6の発現の上昇とともに、I型とIII型の両方のIFNが低レベルであることを特徴とするユニークで不適切な炎症反応が確認されている[102]。

I型IFNは、重症COVID-19の治療オプションとして提案されたこともある。ハムスターモデルにおいて、研究者達はハムスターをSARS-CoV-2に暴露し、肺における炎症反応と遠位組織における全身性炎症を誘発した。彼らは、組換えIFN-αの鼻腔内投与が、ウイルス量の減少と症状の緩和をもたらすことを見いだした[103]。446人のCOVID-19患者のレトロスペクティブコホート研究は、IFN-α2bの早期投与が院内死亡率の低下と関連していることを決定した。しかし、遅いIFN療法は、死亡率を増加させ、回復を遅らせ、インターフェロン療法の早期投与は、良好な反応に不可欠であることを明らかにした[104]。

驚くほど多くの人々が、I型IFNに対する中和自己抗体を持っているが、この現象の根本的な病因は解明されていない。COVID-19患者54名と対照者26名の60万以上の末梢血単核細胞の縦断的プロファイリングとトランスクリプトームシーケンスを用いた研究では、重症患者の骨髄系細胞にI型IFN刺激遺伝子応答が顕著に欠如していることが判明した[105]。I型IFNに対する中和自己抗体は、重症患者の19%、重症患者の6%、中等症患者の0%に認められた。スペインのマドリッドに基づく別の研究では、重症のCOVID-19感染症患者の10%がI型IFNに対する自己免疫抗体を有していることが明らかにされた[106]。最後に、StertzとHale（2021）は、自己抗体またはおそらくインターフェロン系遺伝子に関連する機能喪失多型に起因するかどうかにかかわらず、インターフェロン産生の欠陥は、生命を脅かすすべてのCOVID-19症例の15%にも関連すると指摘している[107]。

6. 細胞のハウスキーピングのためのメチル化戦略は、一般にワクチンmRNAでは省かれているのか？

mRNAのメチル化は、メチル化剤（ライター）と脱メチル化剤（イレイザー）およびリーダータンパク質の複雑なカスケードによって転写物の翻訳、したがって遺伝子の発現を制御するために進化的に考案されたものである。mRNAの5′UTRにおけるアデノシンの重要なメチル化「N6-メチルアデノシン（m6A）」は、正常細胞の生理、炎症反応、癌の進行を制御している。ヒトの病気におけるm6Aの役割とメカニズムは、他の包括的なレビューで広範かつ見事に網羅されている[108,109]。これらの中で最も重要なのは、ワクチン接種後のNF-κBシグナルの上昇によって説明されるように、SARS-CoV-2分子ワクチン接種は、細胞ストレス状態を誘導することである[52,110]。

ウイルス感染や癌などの疾患によって誘導される細胞ストレス条件下では、m6Aはキャップ非依存的にmRNAの翻訳を優先的に行うように仲介する[111]。これは、SARS-CoV-2ワクチン接種によってmRNAがキャップ依存的に翻訳されるのとは対照的である。さらに、多様な細胞ストレス条件下では、mRNAの5’UTRがm6Aで富化される転写産物全体の付加が圧倒的に誘導される[111]。

真核生物翻訳開始因子4E（eIF4E）は、mRNAのキャップ構造にリボソームを誘導し、タンパク質への翻訳を開始させる最初のmRNAキャップ結合タンパク質である。ワクチンmRNAのキャップ依存性翻訳に依存すると、不自然なほど多くの合成mRNAを翻訳するために必要なeIF4Eの余剰分が消費されることになる。しかし、キャップ非依存的な翻訳では、eIF4EがeIF4Fと結合している必要はなく、翻訳が行われる。キャップ非依存翻訳が行われるmRNAは、内部リボソーム侵入部位（IRES）とは別に、mRNAをリボソームのキャップ非依存翻訳エンハンサー（CITE）に積極的に勧誘する因子と結合する特別な結合モチーフを備えているので、リボソームの獲得競争は転写物のキャップ非依存翻訳の人に移行することになる[112]。

さらにこれは、強力な癌遺伝子制御因子であり細胞増殖調節因子であるeIF4Eが、ワクチン中の強固にキャップされたmRNAとIRESを含むmRNAの間の競争に対抗しようとして、不自然に長期間、この競争によってその活動を維持することも意味する[113,65]。このような状態は、共起的なm6A mRNA修飾の調節不全をもたらし、様々ながんの分子進行に深刻に関連し[114]、さらにその後のウイルス感染に対する素因となる条件を作り出している[113]。

次に、mRNA-ワクチン由来のスパイクタンパク質が、大量のエクソソーム産生を介して細胞内IFN系に与える影響について考察する。

7. エクソソームとマイクロRNA

細胞間の重要なコミュニケーションネットワークは、ある細胞から絶えず放出され、後に離れた臓器にある別の細胞に取り込まれる細胞外小胞（EVs）から構成されている。エンドソーム内で形成されるエクソソームと呼ばれる小胞は、ウイルスに似た大きさで、エキソサイトーシスにより細胞外空間に放出され、その後、全身を循環する[115]。エクソソームは、mRNA、マイクロRNA、タンパク質、脂質など、多様な生物学的活性分子の集合体を送達することができる[116]。ウイルス感染時には、感染細胞が大量のエクソソームを分泌し、細胞間のコミュニケーションネットワークとして機能し、感染に対する反応を指揮する[117]。

アリゾナ州とコネチカット州の研究者チームによる共同研究において、mRNAワクチンを接種した人は、接種後14日目までにスパイクタンパク質を含む循環エクソソームを獲得することが明らかになった[118]。彼らはまた、最初のワクチン接種から14日後には、スパイクタンパク質に対する循環抗体が存在しないことも明らかにした。しかし、2回目のワクチン接種後は、スパイクを含む循環エクソソームの数が最大で12倍まで増加した。さらに、スパイクに対する抗体は、14日目に初めて出現した。エクソソームはその表面にスパイクタンパク質を提示しており、これが抗体産生を促進したと著者らは主張した。マウスにワクチン接種を受けた人由来のエクソソームを投与すると、スパイクタンパク質に対する抗体ができた。興味深いことに、発現がピークに達した後、循環しているスパイク含有エクソソームの数は、スパイクタンパク質に対する抗体のレベルの低下と歩調を合わせて、時間とともに減少した。

エクソソームは、ストレス条件下でストレス顆粒（SG）およびP体（PB）と密接に関連しながら、mRNA崩壊機構の一部として存在する[119,120]。「キャップ依存性翻訳への過度な依存」とも言えるワクチンmRNA誘導型翻訳の条件下では、大規模なデキャッピング複合体の促進・集合に対する明らかな抵抗性があり[65]、したがって生理的mRNA崩壊過程に対する抵抗性もある[119]。これは、そうでなければメッセンジャーリボヌクレインタンパク質（mRNP）を含むmRNAターンオーバーのための一般的な細胞戦略によって決定されるはずの特定の合成mRNAの運命が省略されていることを意味する[121]。

さらに、SARS-CoV-2ワクチンの合成mRNAによるキャップ依存性翻訳に過度に依存する条件下では[65]、その構造にかなりのIRESと特定のメチル化（m6A）を有する多くのネイティブmRNAが、mRNA崩壊品質管理機構と強く関連するキャップ非依存性翻訳を好んで選択することになる[114]。この意味で、かなりのデアデニル化mRNA産物やmRNA代謝（崩壊）由来の産物は、エクソソームカーゴに直接結びついている[121]。

キャップ依存性翻訳に依存している好例は、T細胞性急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）に記載されている。T-ALLではmTORC（mechanistic target of rapamycin C）-1が過剰に機能するため、細胞は完全にキャップ依存的な翻訳を行うようになる[122]。類似の状態がKyriakopoulosとMcCullough（2021）により記述されている[65]。この非常に攻撃的な癌の状態においてさえ、T-ALL細胞におけるキャップ依存性翻訳の阻害の間、キャップ非依存性翻訳への急速な復帰がある[122]。同様に、ピコルナウイルス感染[123]は、eIF4F複合体の構成要素の阻害とウイルスRNAのIRESの複数化により、細胞をキャップ非依存的翻訳に向かわせる。

ヒトでは、幼児や成人で90%以上の血清有病率を持つサフォードウイルスのような、ほとんどが無症状のピコルナウイルス感染が豊富に存在する[124]。ストレスに似た状態によるアポトーシスイベント[125]であれ、mRNAキャップ駆動型の発癌性効果[126]であれ、いずれの場合でも、エピトランスプリプトーム機能の増大とmRNAの崩壊促進により、miRNAレベルは増加する。遺伝子発現の要求が高いため、特定のmiRNAがP体を介してエクソソームに多量に含まれることが予想される[127]。

また、SARS-CoV-2分子ワクチン接種によるスパイクタンパク質の圧倒的な産生条件下では、当然ながら細胞内の過剰なスパイクタンパク質のかなりの割合もエクソソームカーゴを介してエクスポートされることが予想される[128]。

インドの研究チームによるブレイクスルー論文では、内部で合成されたSARS-CoV-2スパイクタンパク質に対する細胞反応におけるエクソソームの役割が調査されている[50]。彼らは要旨で次のように書いている。

「SARS-CoV-2 遺伝子産物であるスパイクは、宿主のエクソソームカーゴを修正することができ、それが遠くの非感染組織や器官に運ばれて、中枢神経系（CNS）内で破滅的な免疫カスケードを開始することができると提案する。」

彼らの実験は、ヒトHEK293T細胞を培養して、SARS-CoV-2スパイク遺伝子プラスミドにさらし、細胞内でスパイクタンパク質の合成を誘発させるというものであった。そして、この細胞が、スパイクタンパク質と特定のマイクロRNAを含むエクソソームを大量に放出することを実験的に見いだした。次に、このエクソソームを採取し、ヒトのミクログリア（脳に常在する免疫細胞）の細胞培養液に移した。その結果、ミクログリアはエクソソームを容易に取り込み、マイクロRNAに反応して急性炎症反応を起こすことがわかった。ヒト免疫不全ウイルス（HIV)日本脳炎ウイルス（JEV)デング熱など、さまざまなウイルス性疾患において、マイクログリアが神経炎症を引き起こす役割はよく知られている。COVID-19の重症例では、エクソソームを介した長距離の細胞間情報伝達が神経症状を発現させるメカニズムである可能性が提唱された。

さらに、エクソソーム中に高濃度で存在する2つのマイクロRNA、miR-148aおよびmiR-590を同定した。この2つのマイクロRNAが、I型インターフェロンシグナルを制御する2つの重要なタンパク質、ユビキチン特異的ペプチダーゼ33（USP33）とIRF9を抑制することにより、I型インターフェロンシグナルを特異的に阻害する機構を提案したのである。リン酸化されたSTAT1とSTAT2のヘテロダイマーがIFN刺激応答要素に結合するためにはIRF9が必要であり、したがってIRF9はシグナル伝達反応において必須の役割を担っている。著者らは、HEK293培養から抽出したエクソソームにさらされたミクログリアは、USP33の細胞内発現が50%減少し、IRF9が60%減少することを実験的に明らかにした。さらに、miR-148aがUSP33を、miR-590がIRF9を特異的にブロックすることを見出した。USP33は、IRF9からユビキチンを除去し、分解から保護する。したがって、この2つのマイクロRNAが一緒になってIRF9を妨害し、I型インターフェロンに対する受容体の反応をブロックするのである。

de Gonzalo-Calvoらによる研究。(2021)は、COVID-19患者の血液中のマイクロRNAプロファイルと、疾患の重症度に基づくそれらの定量的な分散を調べた[129]。複数のmiRNAがアップレギュレートおよびダウンレギュレートされていることが判明した。これらの中には、miR-148aのガイド鎖前駆体であるmiR-148a-3pが含まれてた。しかし、miR-148a自体は、彼らの研究で過不足としてカタログ化されたマイクロRNAには含まれておらず、miR-590も含まれていなかった。これらの結果から、miR148aやmiR-590とそれらの炎症作用は、ワクチン接種によるスパイク蛋白産生に特有のものであると考えられる。

腕の筋肉に注射した後、mRNAワクチンのmRNAは、免疫細胞によってリンパ系に運ばれ、最終的に脾臓に高濃度で蓄積することがトレーサー研究によって示されている[130]。他の研究は、脾臓のストレス免疫細胞が、迷走神経に沿って脳幹核に移動するエクソソームを大量に放出することを示している（Seneff and Nigh (2021) [81] に総説あり）。迷走神経は第10脳神経であり、喉仏の近くで脳幹に入る。上・反回喉頭神経は迷走神経の枝で、嚥下と発声に関わる構造を支配している。これらの神経に病変があると、嚥下困難（dysphagia)発声困難（dysphonia)および/または息切れ（dyspnea）を伴う声帯麻痺を引き起こす [131,132] 。これらの特定の病態については、以下のVAERSデータのレビューで触れることにする。

HEK293細胞はもともと、数十年前にヒト胎児の腎臓から採取された培養物に由来し、アデノウイルスDNAの感染により不死化したものである。腎臓から抽出された細胞でありながら、そのタンパク質発現プロファイルから、神経細胞由来である可能性が高いことを示している[133]。このことは、迷走神経のニューロンもスパイクタンパク質に同様の反応を示すことを示唆している。このように、利用可能な証拠は、内因的に産生されたスパイクタンパク質が、SARS-CoV-2の自然感染とは異なるマイクロRNAプロファイルを作成し、それらの違いは、潜在的に広範囲の有害な影響を伴うことを強く示唆している。

以下の分析の中心的なポイントは、I型IFNに対するワクチン接種と自然感染の影響との重要な違いである。ワクチン接種はIFN産生を積極的に抑制するが、自然感染は疾患サイクルのごく初期にIFN産生を促進する。既往症のある人は、I型IFNのシグナル伝達障害を示すことが多く、これがより重症で重篤、さらには致命的なCOVID-19につながる。もしワクチンによって誘導された障害が、時間の経過とともに抗体レベルが低下しても維持されるなら、ワクチンがない場合よりも重症の疾患発現を引き起こすという事態につながる可能性がある。

I型IFNを抑制することで予想されるもう一つの結果は、で述べるように、既存の慢性ウイルス感染症の再活性化であろう。

8. 水痘・帯状疱疹の再活性化

CD8+T細胞におけるI型IFN受容体シグナルは、ウイルス感染に応答してエフェクター細胞およびメモリー細胞を生成するために重要である[134]。CD8+T細胞は感覚神経細胞における潜伏ヘルペス感染の再活性化をブロックすることができる[135]。SARS-CoV-2の自然感染ではなくワクチン接種後にI型IFNシグナル伝達が障害されると、CD8+T細胞のヘルペス抑制能力も障害されるであろう。これが、ワクチンに対する反応のメカニズムなのだろうか？

帯状疱疹は、潜伏していた帯状疱疹ウイルス（HZV）の再活性化によって引き起こされる、ますます一般的な疾患であり、小児期の水痘の原因ともなっている。系統的レビューにおいて、Katsikasら、（2021）は、mRNAワクチン接種後平均5.8日で発生した帯状疱疹の91例を確認した[136]。因果関係がまだ確認されていないことを認めつつ、「帯状疱疹は、おそらく医師や他の医療専門家がCOVID-19ワクチンの接種を受けた患者に見られると予想される状態である」[136]。20201年9月に発表された編集者への手紙の中で、Fathy et al 2021）は、帯状疱疹及び/又は単純ヘルペスの再活性化の40例を含む、ワクチン関連と推定される皮膚反応の672例について報告した[137]。これらの症例は、アメリカ皮膚科学会と国際皮膚科学会連盟のCOVID-19皮膚科レジストリに報告されており、特にワクチンによる皮膚科的後遺症を追跡するために設立されたものであった。COVID-19ワクチン接種後の帯状疱疹再活性化の複数の追加症例報告が文献にある[138,139]。（Lladó et al 2021）は、再活性化した帯状疱疹感染症の52件の報告のうち51件がmRNAワクチン接種後に起こったことを指摘した[140]。帯状疱疹自体も、STAT2のリン酸化を妨害すること及びIRF9の分解を促進することの両方を通じて、感染細胞におけるIFN-αシグナル伝達を妨害する[141]。

ウイルスの再活性化の別の症例も注目に値する。これは 2007年にC型肝炎ウイルス（HCV）に感染した82歳の女性に関するものである。ファイザー／バイオエヌテックのmRNAワクチンを接種した数日後に、黄疸の出現とともに、HCV負荷の強い増加が起こった。彼女はワクチン接種の3週間後に肝不全で死亡した[142]。

9. DNA修復の障害と適応免疫

免疫系とDNA修復系は、高等生物が多様な脅威から身を守るために頼る2つの主要なシステムであり、共通の要素を有している。主要なDNA修復タンパク質の機能喪失は、修復の欠陥につながり、機能的なB細胞やT細胞の産生を阻害して、免疫不全を引き起こす。非相同末端結合（NHEJ）修復は、リンパ球特異的なV（D）J組み換えに重要な役割を果たし、これは、抗原曝露に反応してB細胞抗体の非常に多様なレパートリーを産生するのに必須である[143]。DNA修復の障害もまた、癌への直接的な経路である。

中国、上海の研究者が行ったブレイクスルー研究では、弱毒化したウイルスに基づくCOVID-19ワクチンの初回接種前と接種28日後に患者から採取した末梢血単核細胞（PBMC）の単細胞mRNA配列決定を行い、患者コホートの免疫機能に関連するいくつかのパラメータをモニタリングした[52]。これらのワクチンはmRNAワクチンとは異なるが、ワクチンの内容物を粘膜や血管の障壁を迂回して三角筋に注射することによっても機能する。著者らは、多くの異なる免疫細胞タイプにおいて、ワクチン接種後の遺伝子発現に一貫した変化があることを見いだした。観察されたNF-κBシグナルの増加とタイプI IFN応答の減少は、生物学的アッセイでさらに確認された。他の研究と同様に、ワクチン接種後28日目にSTAT2とIRF7が有意にダウンレギュレートされ、I型IFN反応が損なわれていることを示唆することが分かった。彼らは、「これらのデータを総合すると、ワクチン接種後、少なくとも28日目までには、中和抗体の生成以外に、リンパ球や単球の免疫系が、おそらくより脆弱な状態になっていることが示唆された」と書いている。 [52].

これらの著者らはまた、DNAを修復する能力が損なわれていることを示唆する遺伝子発現の攪乱的な変化を確認した。成長中の細胞における総転写活性の60%までが、リボソームRNA（rRNA）を生成するためのリボソームDNA（rDNA）の転写に関与している。リボソームDNAをRNAに転写する酵素は、RNAポリメラーゼI（Pol I）である。Pol Iはまた、rDNAの完全性をモニタリングし、細胞の生存に影響を与える[144]。転写の間、RNAポリメラーゼ（RNAP）はDNAを活発にスキャンして、かさ高い損傷（二本鎖切断）を見つけ、その修復を開始する。成長中の真核細胞では、ほとんどの転写がPol IによるリボソームRNAの合成を伴う。したがって、Pol IはDNA損傷後の生存を促進する[144]。（Liu et al 2021）によって同定されたダウンレギュレートされた遺伝子の多くは、細胞周期、テロメア維持、及びPOL Iのプロモーター開口と転写の両方に関連しており、DNA修復プロセスの障害を示していた[52]。

抑制された遺伝子セットの1つは、「新しいCENPA（セントロメアタンパク質A）を含むヌクレオソームのセントロメアへの沈着 “に起因していた。新しく合成されたCENPAは、細胞周期のテロフェイズ後期／G1期初期にセントロメアのヌクレオソーム中に沈着している。このことは、不活化SARS-CoV-2ワクチンに対する反応の特徴として、G1期における細胞周期の停止を指摘している。多能性胚幹細胞が（複製開始前の）G1期で停止すると、自己再生と多能性の維持が損なわれることになる[145]。

DNA修復と適応免疫に大きく関わる2つのチェックポイントタンパク質は、BRCA1と53BP1であり、2つの主要な修復プロセスである相同組換え（HR）とNHEJの両方を促進する [146,147]。ヒト細胞を用いた試験管内試験の実験では、SARS-CoV-2全長スパイクタンパク質が核内に入り、二本鎖切断部位へのこれら2つの修復タンパク質の動員を妨げることが特異的に示された[143]。著者らは、「メカニズム的には、スパイクタンパク質は核内に局在し、主要なDNA修復タンパク質BRCA1および53BP1の損傷部位への動員を妨げることによって、DNA損傷修復を阻害することが分かった 」と、その結果を要約している。

mRNAワクチンが、DNA修復を妨害しうるもう一つのメカニズムは、miR-148を介したものである。このマイクロRNAは、細胞周期のG1期においてHRをダウンレギュレートすることが示されている[148]。この論文で先に述べたように、これはMishraとBanerjea（2021）による実験において、スパイクタンパク質合成後にヒト細胞から放出されたエクソソームで見つかった2つのマイクロRNAのうちの1つであった[50]。

10. 免疫性血小板減少症（Immune Thrombocytopenia

免疫性血小板減少症は自己免疫疾患の一つで、免疫系が循環血小板を攻撃するものである。免疫性血小板減少性紫斑病（ITP）は、麻疹、おたふくかぜ、風疹（MMR)A型肝炎、水痘、ジフテリア、破傷風、百日咳（DPT)経口ポリオ、インフルエンザなどの予防接種に関連している[149]。アデノウイルスDNAベースのワクチンは、ワクチン誘発性免疫性血小板減少症（VITT）を引き起こすことが広く認識されているが[150]、mRNAワクチンはVITTのリスクがないわけではなく、生命を脅かす致命的な脳静脈洞血栓症[151-153]などの事例が報告されているため、その発生が報告されているのである。そのメカニズムは、VITT抗体が血小板第4因子（PF4）に結合し、血小板の活性化を誘発する免疫複合体を形成することであると考えられている。その後の凝固カスケードにより、脳、肺、肝臓、脚などにびまん性の微小血栓が形成され、血小板数の劇的な減少を伴う（Kelton et al 2021）。このワクチンに対する反応は、ヘパリン投与が顕著に関与しないことを除けば、ヘパリン誘発性血小板減少症（HIT）に酷似しているとされている[154]。

mRNAワクチンは、主に免疫グロブリンG（IgG）免疫反応を誘発し、IgAの誘発量は少なく、[155]、さらにIgMの産生量は少ないことが示されている[156]。IgG抗体の産生量は、COVID-19の重症例で見られる反応と同等である。HITを誘発するのは、ヘパリンと複合したIgG抗体である。スパイクタンパク質およびPF4と複合化したIgGが、mRNAワクチンに反応してVITTを誘発する複合体であるという仮説を立てることができる。実際、スパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（RBD）がPF4と結合することが実験的に示されている[157]。

HIT の背後にあるメカニズムは、ヒト化マウスモデルの使用も含めて、よく研究されている。興味深いことに、マウス血小板ではなくヒト血小板はFcγRIIA受容体を発現し、チロシンリン酸化カスケードを通じてPF4/ヘパリン/IgG複合体に応答し、血小板活性化を誘導する。活性化されると、血小板は顆粒を放出し、凝固促進性の微小粒子を生成する。また、カルシウムを取り込み、プロテインキナーゼCを活性化し、微小血栓を形成し、カルパインの活性化により細胞死カスケードを開始する。この活性化した血小板はPF4を細胞外に放出し、さらにこのPF4がヘパリンやIgG抗体と結合して血小板活性化をさらに促進するという悪循環を支えている。このように、FcγRIIAは疾患過程の中心的存在である[158]。

ヒトFcγRIIA受容体を発現するように操作されたマウスの研究により、これらのトランスジェニックマウスは、野生型の対応するマウスよりもはるかに血小板減少症に罹患しやすいことが示されている[159]。血小板は、抗原を血栓に捕捉したり、免疫細胞による除去のために脾臓に運んだりして、抗体-抗原複合体のクリアランスにおいて重要な役割を果たすことが提唱されている。血小板はこの過程で明らかに急速に消費され、血小板数の減少をもたらす（血小板減少症）。

血小板は通常、平均寿命が5〜9日と短いため、常に骨髄で合成され、脾臓で除去されている。抗体と結合した血小板は、Fcγ受容体を介して血小板の活性化に続いて脾臓に移動し、マクロファージによる貪食によって捕捉・除去される[160]。体内の全血小板の3分の1は脾臓に存在する。mRNAワクチンは、腕の筋肉の注射部位に最初に引き寄せられた免疫細胞によって脾臓に運ばれるので、脾臓のワクチン感染マクロファージによってスパイクタンパク質を含むエクソソームが放出される莫大な機会が存在する。脾臓でP4F/IgG/スパイク蛋白複合体が形成された後の血小板活性化は、毒性スパイク蛋白を除去しようとするメカニズムの一部であると推測することができる。

先ほど、スパイクタンパクにさらされたヒトの細胞が放出するエクソソームで高発現する2つのマイクロRNAのうちの1つがmiR-148aであると述べた。miR-148aは、血小板上のFcγRIA発現を制御する上で中心的役割を果たすタンパク質の発現を抑制することが実験的に示されている。このタンパク質はT-cell ubiquitin ligand-2 (TULA-2) と呼ばれ、血小板のFcγ受容体の活性を特異的に阻害する。miR-148aはTULA-2 mRNAを標的にしてその発現をダウンレギュレートする。したがって、ワクチンによってスパイクタンパク質を合成せざるを得なくなったマクロファージが放出するエクソソーム中に存在するmiR-148aは、スパイク抗原とスパイクに対して作られたIgG抗体によって形成される免疫複合体に対して、血小板減少のリスクを高めるように作用しているのである。

11. PPAR-α、スルファチド、肝疾患

すでに述べたように、MishraとBanerjea（2021）による実験では、スパイクタンパク質がIRF9合成を特異的に妨害するマイクロRNAを含むエクソソームの放出を誘導することが実証された[50]。このセクションでは、IRF9の抑制の結果の1つが、核内受容体ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体α（PPAR-α）を介した、肝臓でのスルファチドの合成の減少であろうことを示すことにする。

スルファチドは、主に肝臓から合成・分泌される哺乳類の主要な血清スフィンゴ糖脂質である[161]。これらは、体内で唯一のスルホン化脂質である。スルファチドは、セラミドからガラクトセレブロシドへの変換とそれに続く硫酸化の2段階のプロセスによって形成される。スルファチドは、血小板、赤血球およびリンパ球の表面に発現している。血清スルファチドは、抗凝固作用と抗血小板活性化作用の両方の機能を発揮している。スルファチドを合成する肝臓の酵素、セレブロシドスルホトランスフェラーゼは、マウスでPPAR-αの活性化により誘導されることが特異的に見出されている[162]。したがって、PPAR-αの発現が低下すると、スルファチドの欠乏症になる。

PPAR-αリガンドは抗炎症作用や抗線維化作用を示すが、PPAR-αの欠損は肝脂肪症、脂肪性肝炎、脂肪線維症、肝がんにつながる[163]。2019,日本の研究チームによって、PPAR-αの欠損遺伝子を持つマウスを用いたブレイクスルー実験が行われた[161]。これらのマウスは、高コレステロール食を与えると、凝固因子のレベルの上昇とともに、過剰なトリグリセリド蓄積と肝臓の炎症および酸化ストレスの悪化を引き起こしやすくなった。また、肝臓と血清の両方でスルファチドのレベルが低下していた。著者らは、コレステロール過多は、肝脂質代謝の異常と酸化ストレスに続いて、血栓症を促進することによって、その毒性を発揮すると仮定した。PPAR-αは、肝疾患の改善効果に加え、凝固因子の転写調節やスルファチド合成のアップレギュレーションを通じて、これらの毒性作用を減弱させることができることを明らかにした。彼らは、PPAR-αの活性化を目的としたフィブラートなどの治療法が、高コレステロール食による心血管疾患を予防する可能性があることを提案した。

mRNAワクチンからのmRNAは、肝臓や脾臓に優先的に移動し、他の臓器よりも高い濃度に達することがトレーサー研究によって示されている[130]。したがって、ワクチンによって肝臓のIRF9が抑制される可能性がある。IRF9は肝細胞で高発現し、そこでPPAR-αと相互作用し、PPAR-αの標的遺伝子を活性化する。IRF9ノックアウトマウスの研究では、このマウスに高脂肪食を与えると、脂肪沈着と肝インスリン抵抗性が生じることが示された。対照的に、アデノウイルスを介した肥満マウスの肝IRF9の過剰発現は、インスリン感受性を改善し、脂肪症と炎症を改善した [164] 。

研究文献にある複数の症例報告では、mRNAワクチン後の肝障害が記述されている [165-167]。これらの結果を導くもっともらしい要因は、IRF9のダウンレギュレーションによるPPAR-αの抑制と、それに続く肝臓でのスルファチド合成の減少である。

12. ギラン・バレー症候群およびその他の神経疾患

GBSは、長期にわたる罹患率と有意な死亡リスクを伴う急性の炎症性脱髄性神経障害である [168] 。この疾患は、炎症性サイトカインの放出に関連した神経に対する自己免疫攻撃を伴う。

GBSは、スルファチドおよび他のスフィンゴ脂質に対する自己抗体としばしば関連している [169] 。活性化T細胞は、マクロファージによる抗原提示に反応してサイトカインを産生し、これらのサイトカインは、エピトープの拡散を通じて自己抗体産生を誘導することができる [170]。この抗体は、次に補体の活性化を誘発し、脱髄と軸索の損傷を引き起こし、末梢神経細胞の重篤な傷害につながる[171]。スパイクタンパク質は、スルファチドの硫酸化ガラクトースに似た硫酸化アミノ糖複合体であるヘパラン硫酸に結合することが示されている[172]。従って、スパイクもスルファチドに結合することが考えられ、これがスパイク-スルファチド複合体に対する免疫反応の引き金になるかもしれない。

前節で述べたように、IRF9の抑制によって肝臓でのスルファチド合成が損なわれると、やがて全身性のスルファチド欠乏症になる。スルファチドの欠乏は、脳や神経系に大きな影響を与える可能性がある。ミエリン鞘に含まれるガラクト脂質の20%はスルファチドである。スルファチドは神経系の主要成分であり、末梢神経系と中枢神経系の両方でミエリン鞘に特に高濃度で存在する。スルファチドの欠乏は、GBSの一般的な症状である筋力低下、振戦、および運動失調を引き起こすことがある [173]。脳のミクログリアとアストロサイトを介した慢性神経炎症は、脳内スルファチドの劇的な喪失を引き起こし、脳内スルファチドの欠乏はアルツハイマー病の主要な特徴である [174]。セラミドからスルファチドを合成する能力に欠陥があるマウスは、加齢に伴い軸索の健康を維持する能力に障害が見られるようになる。時間の経過とともに、ミエリン鞘の冗長性、非圧縮性、変性、および軸索のランビエ節での構造の劣化が生じ、機能的に有能な軸索接合部の喪失を引き起こす[175]。

アンジオテンシンII（Ang II）は、心血管疾患に対する深い影響に加え、神経変性疾患につながる脳内の炎症にも関与している[176]。SARS-CoV-2のスパイクタンパク質には、SARS-CoVにはない独特のfurin切断部位があり、細胞外酵素のfurinがスパイクタンパク質のS1セグメントを切り離し、循環中に放出することができる[177]。S1は、マウスで血液脳関門を通過することが示されている[178]。S1には、ACE2受容体に結合して、受容体を無力化する受容体結合ドメインが含まれている。ACE2受容体のシグナル伝達が減少すると、Ang II合成が増加する。脳の神経細胞はACE2受容体を持っており、スパイクを含むエクソソームやワクチン中のナノ粒子を取り込んだスパイク産生細胞から放出されるS1によって破壊されやすいと思われる。Ang IIは、脳の室傍核内で、ミクログリアのTLR4を介したシグナル伝達を増強し、ミクログリアの活性化を誘導し、組織損傷につながる活性酸素の産生を増加させる[179]。

Ang IIの過剰発現は、視神経の神経変性の原因因子であり、視神経炎を引き起こし、重度の不可逆的な視覚喪失をもたらすことがある[180]。COVID-19のmRNAワクチン接種直後に視神経炎が出現した症例が複数報告されている[181,182]．他の衰弱性神経疾患もワクチン接種直後に出現しており、因果関係が疑われている。ヨーロッパを拠点とした、COVID-19ワクチン接種後の神経症状を追跡するケーススタディでは、ワクチン接種後中央値11日以内に発症した21例が確認された。症例は、脳静脈洞血栓症、神経系脱髄疾患、炎症性末梢神経障害、筋炎、筋無力症、辺縁系脳炎、巨大細胞動脈炎など多様な診断名であった[183]。Khayat-Khoei et al 2021）は、1回目または2回目のmRNAワクチン接種後21日以内に脱髄疾患を呈した24歳から64歳までの患者7人のケースシリーズを記述している[184]。4 名は（コントロールされた）MS の既往があり、3 名は以前は健康であった。

難聴と耳鳴りもまた、COVID-19の稀な副作用として知られている。難聴、前庭機能障害、耳鳴りなどの聴覚症状を患った一連のCOVID-19患者10名を対象とした症例研究がある[185]。著者らは、ヒトの内耳組織がACE2,furinおよび膜貫通プロテアーゼserine 2（TMPRSS2）を発現しており、ウイルスの侵入を促進することを明らかにした。また、SARS-CoV-2が特定のヒト内耳細胞型に感染することも明らかにした。

SARS-CoV-2ウイルスが耳に感染する可能性を評価した別の研究では、マウスの中耳と内耳のさまざまな種類の細胞で、受容体ACE2,酵素furin、TM-PRSS2の発現を具体的に調査した。その結果、ACE2とfurinは「耳管、中耳腔、蝸牛にびまん性に存在し、これらの組織がSARS-CoV-2感染に感受性があることを示唆する」ことがわかった。[186]. 耳鳴りは、AngⅡレベルの上昇によって誘発される高血圧と正の相関がある [187]。

頭痛は、COVID-19 mRNAワクチンの非常に一般的な副反応であり、特に、既に頭痛にかかりやすい人々にとって、頭痛は非常に一般的である。171人の参加者を対象としたアンケートに基づく研究では、頭痛の発生率は、1回目のワクチン接種後20.5%であり、2回目の接種後45.6%に上昇することが判明した[188]。ある事例では、37歳の女性が2回目のファイザー/バイオニック社のmRNAワクチン接種後、11日間続く衰弱性片頭痛発作に苦しんでいることが報告されている[189]。

片頭痛の治療には、補助療法としてステロイドがよく使用される [190] 。デキサメタゾンや他のステロイドは、ステロイド受容体を介して肝臓のPPAR-α受容体を刺激し、IRF9抑制の効果を相殺する[191]。片頭痛の起源に関する理論には、脳幹、主に三叉神経における感覚入力の処理の変化が含まれる[192]。三叉神経は脳幹の迷走神経に近接しているため、スパイクを運ぶエクソソームは迷走神経経路に沿って容易に到達する可能性がある。磁気共鳴イメージングにより、異常な微細構造と脱髄を反映する三叉神経の構造変化が、片頭痛を頻繁に起こす人の特徴であることが明らかにされている [193]。SARS-CoV-2感染またはmRNAワクチン接種に関連する潜在的な要因は、ACE2受容体のスパイク阻害による脳幹のAng IIの過剰レベルである。ACE阻害剤とAng II受容体拮抗剤は、片頭痛の適応外治療薬として普及している[194,195]。したがって、片頭痛はスパイク蛋白によるACE2受容体の破壊と、ミクログリア炎症反応とスルファチドの喪失による重要な顔面神経を覆うミエリン鞘の破壊の両方から生じる可能性がある。そのスパイクタンパク質の供給源は、外因性か内因性かのどちらかである可能性がある。

13. ベル麻痺

ベル麻痺は、片側顔面神経麻痺を引き起こす一般的な脳神経疾患である。第III相臨床試験でも、ベル麻痺は際立っており、プラセボ群では1例のみであったのに対し、治療群では7例が出現した [196,197] 。文献に報告されている事例では、36歳の男性がワクチン接種の1日後に左腕の脱力感が生じ、その後数日間で腕のしびれ、しびれへと進行し、ベル麻痺の症状が出現したものである。ベル麻痺の一般的な原因は、被殻神経節を中心とする単純ヘルペスウイルス感染の再活性化である[198]。これは、今度はI型IFNのシグナル伝達の乱れによって引き起こされることがある。

14. 心筋炎

COVID-19ワクチンが心筋炎と心膜炎を引き起こし、特に30歳未満の男性でリスクが増加するという事実に、多くのメディアが注目している[197,200]。心筋炎は血小板の活性化と関連しているので、これはワクチンに対する反応における1つの要因である可能性がある[201]。しかし、もう一つの要因は、mRNAワクチンに感染したマクロファージが放出するエクソソームと、そのエクソソームに含まれる特定のマイクロRNAに関連している可能性がある。

重症のCOVID-19疾患を患う患者を対象とした研究では、インフルエンザに罹患した患者および健康な対照群と比較して、循環しているマイクロRNAの発現を特に調査した。COVID-19に関連して一貫して発現が上昇したマイクロRNAの1つはmiR-155であり、著者らは、これが慢性心筋障害および炎症の予測因子となる可能性を示唆した。一方、インフルエンザ感染はmiR-155の発現上昇と関連していなかった。と彼らは結論づけた。「我々の研究は、COVID-19患者における心臓関連miRの有意な変化を同定し、COVID-19と心血管疾患およびそれぞれのバイオマーカーとの強い関連を示した」[202]と結論付けた。

300人の心血管疾患患者と健康な対照者を比較した研究では、対照者と比較して患者におけるmiR-155の循環レベルが統計的に有意に増加することが示された。さらに、（Gensiniスコアによる）動脈の収縮がより強い人は、病気の少ない人よりも高い値を示していた[203]。

重要なのは、エクソソームが心臓病と関連した炎症に関与していることだ。心筋梗塞の際、miR-155は心筋のマクロファージで急激に発現が上昇し、エクソソーム内の細胞外環境へ放出される。このエクソソームは線維芽細胞に運ばれ、miR-155は線維芽細胞において、炎症から身を守るタンパク質や線維芽細胞の増殖を促進するタンパク質をダウンレギュレートする。その結果生じる障害は、心破裂につながる[204]。

スパイクタンパク質のS1セグメントがどのようにフーリンによって切断され、循環中に放出されうるかについては既に述べた。それは、受容体結合ドメイン（RBD）を介してACE2受容体に結合し、その機能を阻害する。ACE2はAng IIを分解するため、ACE2を無効にすることはAng IIの過剰発現に直結し、心血管疾患へのリスクをさらに高めることになる。AngIIによる血管収縮は、冠動脈閉塞がない場合でも、永続的な心筋損傷を引き起こす独立したメカニズムである。Ang IIによる心筋の急激な収縮が繰り返されると、最終的には心不全や突然死に至ることもある[205]。

ACE2の抑制は、オリジナルのSARS-CoVウイルスに関する研究において既に確認されていた。SARS-CoVに感染した患者の剖検研究により、心臓の損傷を促進する上でACE2阻害が重要な役割を担っていることが明らかになった。SARS-CoVウイルスRNAは、死亡した患者から採取した20の剖検されたヒト心臓サンプルの35%で検出された。心臓がSARS-CoVに感染した患者では、心筋障害に関連したマクロファージ浸潤の顕著な増加が見られた。重要なことは、心臓におけるSARS- CoVの存在が、ACE2タンパク質の発現の著しい低下と関連していたことである[206]。

15. ワクチン有害事象報告システム（VAERS）に関する考察

食品医薬品局（FDA）のワクチン有害事象報告システム（VAERS）は、不完全ではあるが、ワクチンに対する潜在的な有害反応を特定するための貴重なリソースである。CDCとFDAの協力により設立されたVAERSは、「米国で認可されたワクチンの安全性に問題がある可能性を検出するための全国的な早期警告システム」である。CDCによれば、「ワクチンの安全性に問題がある可能性を示すような、異常な、あるいは予期せぬ有害事象報告のパターンを検出するために特に有用」だそうだ。(https://vaers.hhs.gov/about.html) CDCでさえ、VAERSに報告された有害事象は「実際の有害事象のごく一部 [207]」に過ぎないことを認識している。広く引用された報告書では、VAERSに報告されるワクチン関連の有害事象は全体の1%未満であると指摘されている [208]。しかし、その主張には引用がないので根拠は不明である。Rose（2021）は、VAERSのデータをより高度に分析し、31倍もの過少報告の推定値を発表している[209]。過少報告を正確に判断することは不可能であるが、利用可能な証拠は、過少報告が非常に強くVAERSデータを特徴づけていることだ。以下に示す情報は、そのような観点から理解されるべきである。

15.1 免疫抑制、血小板減少、神経変性に関する VAERS シグナル

この小節で言及する特定の症状の報告数に関するすべての集計は 2021年11月29日にVAERSデータベースオンラインツール（http://wonder.cdc.gov/vaers.html）の調査に基づいており、あらゆるCOVID-19ワクチンに関するすべての報告が含まれているが、米国人口に限定されている。

VAERSの31年の歴史の中で、任意のワクチンに関連して報告された合計9,153の死亡があり、それらの死亡の7,114（78%）がCOVID-19ワクチンと関連していた。重要なのは 2021年6月現在、VAERSで報告された死亡例のうち、ワクチン接種が原因として除外できたのはわずか14%であったことである[210]。これは、これらの前例のないワクチンが、より伝統的なワクチンで見られるものをはるかに超える、毒性の異常なメカニズムを示していることを強く示唆している。

1990年以降、ベル麻痺を何らかのワクチンと関連づけた全症例の96%が、COVID-19ワクチンと関連しているという衝撃的な結果が出た（3,331症例のうち3,197症例）。COVD-19ワクチンについては、ギラン・バレー症候群（GBS）の報告が760件あった。視神経炎または視神経症が100例以上あった。片頭痛とCOVID-19を関連づけた報告が8,298件あった。COVID-19ワクチンと関連した耳性帯状疱疹の症例は52件あった。これは基本的に、耳の近くの脳神経に影響を与えるヘルペスの症例である。難聴は、耳性帯状疱疹の特徴的な症状であり、永久的なものになる可能性がある[211,212]。2021年11月19日現在、「耳鳴り」が記載された症例は12,204件である。難聴はもちろんもっと深刻で、それゆえ一般的ではないが、これまた印象的な数のヒットがあり、2,662件にのぼる。

COVID-19ワクチンと血小板減少症を関連付けたVAERSレポートは653件であった。これは、1990年から 2021年までの31年間に、他のすべてのワクチンで報告された774例と比較するものである。

VAERSデータベースには肝機能障害に関する用語が多く含まれており、COVID-19ワクチンに関連する様々な肝臓に関する用語として、hepatomegaly（73例)肝脂肪症（105例）肝酵素増加（338例)肝臓障害（71例)肝臓損傷（44例)肝臓痛（91例）および肝炎（62例）など約2,000件のVAERSでのレポートがあった。

コビッドワクチンによる反応では，嚥下困難4,650例，発声障害1,697例，呼吸困難37,132例であった。この論文で既にレビューしたように、スパイクタンパク質と関連するマイクロRNAを含むエクソソームへの曝露によって引き起こされる炎症による迷走神経損傷が原因であると考えられている。また、失神の報告は13,789件あった。血管迷走神経性失神は、すべての年齢層で最もよく見られる失神のタイプである[213]。67,682件の吐き気と26,630件の嘔吐は、様々な傷害に反応して吐き気と嘔吐を誘発する中心的役割を果たす迷走神経回路へのダメージを反映しているのかもしれない [214]。

表1

1990年から 2021年12月12日までのVAERSデータベースにおいて、COVID-19ワクチンとの関連または他のすべてのワクチンとの関連で、がんを示すいくつかの用語が発生したイベントの数、および2つのカウントの間の比。カウントは米国からのデータに限定された。他のすべてのワクチンのカウントは31年間の合計であるのに対し、COVID-19のカウントは1年未満の単一クラスのワクチンであることに注意してほしい。

15.2 癌に関する VAERS シグナル

がんは、一般に、細胞における最初の悪性化から臨床的に認識される病態の発現まで、数ヶ月から、より一般的には数年かかると理解されている疾患である。有害事象のVAERS報告は、主にワクチン接種後の最初の1ヶ月、あるいは最初の数日間に起こっているため [209]、ワクチン後のがん進行の加速は、認識しにくいシグナルである可能性が高いと思われる。さらに、ほとんどの人は、がんがワクチンによって引き起こされる可能性のある有害事象であることを期待していない。しかし、我々が論文で概説したように、もしmRNAワクチン接種が癌遺伝子制御、細胞周期制御、アポトーシスの広範な調節異常につながっているなら、VAERS報告は、他のワクチンと比較して、癌の報告の増加を反映するはずである。

実際、VAERSの報告にはこれが反映されており、劇的に増加している。表1は、米国でVAERSに報告された最も一般的ながん、新たに同定されたがん、または新たに進行した安定したがんを含む事象を示している。表1は、VAERSの情報収集の31年間の歴史の中で、COVID-19の接種に関する報告と他のすべてのワクチン接種に関する報告とを比較したものである。この表は、オンラインリソースであるhttp://wonder.cdc.gov/vaers.html、「癌」、「癌腫」、「腫瘤」、「新生物」などの癌を示す検索語を検索し、「肺」など特定の臓器に関するヒット数を集計したものである。これらのデータは 2021年12月12日に収集された。

特筆すべきは、COVID-19ワクチン接種後の乳がんの報告が3倍、B細胞リンパ腫の報告が6倍以上あったことだ。濾胞性リンパ腫は1例を除き、すべてCOVID-19ワクチンと関連していた。膵臓癌は3倍以上であった。

これは，過去 1 年間に mRNA ワクチン接種を受けた人の数が，他のすべてのワクチン接種に比べて不釣り合いであることを参考にしても説明できない．COVID-19以外のワクチン接種を受けた人の総数は不明だが、VAERSの31年間の報告履歴を見ると、過去1年間にmRNAワクチン接種を受けた人の数より何桁も多いのは間違いない。全体として、上の表では、VAERSへのがん報告のうち、COVID-19の接種に関連するものは、他のすべてのワクチンに関連するものに比べ、2倍となっている。このことは、緊急に調査すべきシグナルであると我々は考えている。

16. 考察

SARS-CoV-2に対するmRNAワクチン接種の安全性と有効性については、米国および世界中の公衆衛生機関から揺るぎないメッセージが発せられ続けている。Günter KampfによるLancet Regional Healthへの最近の手紙[215]で示されたように、その有効性はますます疑わしくなっている。Kampfは、ワクチン接種者がワクチン非接種者と同じように病気を広げる可能性があることを示すデータを提供した。彼はこう結論づけた。「公衆衛生管理策を決定する際に、ワクチン接種を受けた人口を可能な限り適切な感染源として無視することは、重大な過失であると思われる。」

この論文で我々は、これらのワクチン接種の安全性プロファイルの3つの非常に重要な側面に注意を喚起する。第一は、主にIFN-αとそれに関連するシグナル伝達カスケードの抑制を介して、自然免疫の破壊が広範囲に記録されていることだ。この抑制は、潜在的なウイルス感染の再活性化や、将来の感染と効果的に闘う能力の低下など、さまざまな影響を及ぼすだろう。第二に、細胞内で遺伝的に引き起こされる悪性形質転換を予防・検出するシステムの調節がうまくいかず、その結果、ワクチン接種によってこれらの形質転換が促進される可能性があることだ。第三に、mRNAワクチン接種は、エクソソームによって行われる細胞内コミュニケーションを破壊し、スパイクmRNAを取り込んだ細胞がスパイクを運ぶエクソソームを大量に産生するよう誘導し、深刻な炎症性の結果をもたらす可能性がある。これらの可能性のいずれかが完全に実現した場合、世界中の何十億という人々に甚大な影響を与え、医療制度が直面する短期および長期の疾病負担に貢献する可能性がある。

現在、mRNAの翻訳調節およびストレス顆粒を介したクリアランスにおけるG4の複数の役割に関する認識が急速に広まっていることを考えると、コドン最適化の結果としてGC含有量が濃縮されることによるpG4の増加は、未知ではあるがおそらく遠大な影響を及ぼすものと思われる。ワクチンにおけるこれらのコンストラクトの安全性の具体的な分析評価は、クリプティック発現を同定するための質量分析、RNAやDNA結合タンパク質の必須活性の妨害や干渉の可能性を評価する免疫沈降研究など、早急に必要とされるものである。

17. 結論

本論文で概説した潜在的な病理学的影響の範囲を決定するためのさらなる研究が行われるまで、mRNAワクチン接種を世界中で直ちに停止することが必要である。このような予防接種を公衆衛生キャンペーンの一環として位置づけるには，潜在的な付随的被害による人体への影響を詳細に分析することが必要である．また、我々が概説したmRNAワクチン接種の健康影響に関連するシグナルを検出するために、VAERSやその他のモニタリングシステムを最適化することが急務である。ハーバード・ピルグリム・ヘルスケア社の研究に記載されているが、残念ながらCDCのサポートを受けていないアップグレードされたVAERSモニタリングシステムは、この点で貴重なスタートとなると考えている[208]。

結局のところ、何十億もの生命が危機に瀕していると言っても過言ではない。我々は公衆衛生機関に対し、この論文で議論された問題がなぜ公衆衛生に関係ないのか、あるいは関係あることを認め、それに従って行動することを、証拠をもって証明するよう求めている。公衆衛生機関がこの点で正しいことを行うまで、我々はすべての個人がこの情報を判断材料として、自分自身の健康管理を決定することを奨励する。

著者による寄稿 S.S.、G.N.、A.K.はいずれも原案の執筆に大きく貢献した。P.M.は編集の修正に参加した。

資金提供 本研究は，Qmulus プロジェクトの支援のもと，台湾・台北の Quanta Computers, Inc.

利益相反。著者らは利益相反を宣言していない。